殷云飛 魯邱陽

【摘要】 目的：探討給予中晚期肝癌患者程序性死亡受體（PD-1）單抗治療的近期效果以及對其外周血T淋巴細(xì)胞亞群相關(guān)指標(biāo)的影響。方法：選取2018年7月-2019年8月本院收治的50例中晚期肝癌患者，隨機數(shù)字表法將其分為研究組和對照組，各25例，對照組給予甲苯磺酸索拉非尼片以及奧沙利鉑，研究組給予抗PD-1單抗治療。比較兩組近期療效、外周血T淋巴細(xì)胞亞群指標(biāo)水平、血清細(xì)胞因子水平及不良反應(yīng)發(fā)生情況。結(jié)果：治療3個月后，研究組總有效率為76.00%，高于對照組的48.00%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。研究組死亡率為4.00%，與對照組的12.00%比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。治療前，兩組外周血CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平及aFGF、bFGF、VEGF水平比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）;治療后，研究組T淋巴細(xì)胞亞群各指標(biāo)水平均高于對照組，各血清細(xì)胞因子水平均低于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。研究組不良反應(yīng)發(fā)生率為16.00%，低于對照組的44.00%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論：給予中晚期肝癌患者抗PD-1單抗治療近期效果明顯，可有效改善患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群指標(biāo)水平及血清細(xì)胞因子水平，控制病情發(fā)展。

【關(guān)鍵詞】 肝癌 PD-1 淋巴細(xì)胞亞群

Effect of Anti PD-1 Monoclonal Antibody on Short-term Efficacy and Peripheral Blood T Lymphocyte Subsets in Patients with Advanced Liver Cancer/YIN Yunfei， LU Qiuyang. //Medical Innovation of China， 2021， 18（13）： 0-022

[Abstract] Objective： To investigate the short-term effect of programmed death receptor （PD-1） monoclonal antibody therapy in patients with advanced liver cancer and its effect on peripheral blood T lymphocyte subsets related indexes. Method： A total of 50 patients with advanced liver cancer admitted to our hospital from July 2018 to August 2019 were selected. They were divided into study group and control group by random number table， 25 cases in each group. The control group was treated with Sorafenib Toluenesulfonate Tablets and Oxaliplatin， and the study group was treated with anti PD-1 monoclonal antibody. The short-term efficacy， peripheral blood T lymphocyte subsets， serum cytokine levels and the incidence of ADR were compared between the two groups. Result： After 3 months of treatment， the total effective rate of the study group was 76.00%， which was higher than 48.00% of the control group， the difference was statistically significant （P<0.05）. The mortality rate in the study group was 4.00%， compared with 12.00% in the control group， the difference was not statistically significant （P>0.05）. Before treatment， there were no significant differences in the levels of CD3+， CD4+， CD8+， CD4+/CD8+ and the levels of aFGF， bFGF and VEGF in peripheral blood between two groups （P>0.05）. After treatment， the levels of T lymphocyte subsets in the study group were higher than those in the control group， and the levels of serum cytokines were lower than those in the control group， the differences were statistically significant （P<0.05）. The incidence of adverse reactions in the study group was 16.00%， lower than 44.00% in the control group， the difference was statistically significant （P<0.05）. Conclusion： Anti PD-1 monoclonal antibody can achieve obvious short-term effect in the treatment of patients with advanced liver cancer， which can effectively improve the levels of peripheral blood T lymphocyte subsets and serum cytokines， and control disease progression.

[Key words] Liver cancer PD-1 Lymphocyte subsets

First-authors address： The Third Affiliated Hospital of Chongqing Medical University， Chongqing 401120， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2021.13.005

肝癌是臨床常見的惡性腫瘤，相關(guān)研究顯示我國肝癌發(fā)病率以及死亡率均為全球首位[1-2]，嚴(yán)重影響人們的身心健康。肝癌早期診斷困難且病情進(jìn)展迅速，約80%的患者確診時已經(jīng)是中晚期，該類患者往往預(yù)后不佳[3-4]。臨床上對于早期患者以手術(shù)治療為主，中晚期患者治療的方法仍然以放射介入、化療、靶向治療等手段為主，但治療結(jié)果往往不盡人意[5]。近年來，隨著研究進(jìn)展，免疫治療逐漸成為肝癌研究的熱點，目前研究認(rèn)為，采取程序性死亡受體PD-1單抗治療對腫瘤細(xì)胞有一定抑制作用，PD-1屬于免疫抑制分子，通過調(diào)節(jié)免疫作用可殺死癌細(xì)胞、對抗腫瘤[6-7]。本文主要探討了給予中晚期肝癌患者抗PD-1單抗治療的近期效果以及對其外周血T淋巴細(xì)胞亞群相關(guān)指標(biāo)的影響作用，以期為臨床提供參考，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018年7月-2019年8月本院收治的50例肝癌患者為研究對象。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）經(jīng)臨床相關(guān)檢查確診為中晚期肝癌;（2）臨床資料完整;（3）預(yù)計生存時間超過12周。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）心、腎、肺等重要器官代謝功能障礙者;（2）可正常交流者;（3）有免疫系統(tǒng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)、感染性疾病及惡性腫瘤者;（4）無法耐受抗PD-1單抗治療者;（5）近期準(zhǔn)備接受肝移植或已接受肝移植者;（6）近一個月接受過其他肝臟病灶局部治療;（7）有明顯臨床癥狀的中樞神經(jīng)系統(tǒng)轉(zhuǎn)移者;（8）妊娠期或哺乳期者。隨機數(shù)字表法將患者分為研究組和對照組，各25例。患者簽署研究知情同意書，研究經(jīng)本院倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2 方法 對照組給予口服甲苯磺酸索拉非尼片（生產(chǎn)廠家：Bayer Schering Pharma AG，批準(zhǔn)文號：H20130137，規(guī)格：0.2 g），0.4 g/次，2次/d，以及奧沙利鉑（生產(chǎn)廠家：江蘇奧賽康藥業(yè)有限公司，批準(zhǔn)文號：國藥準(zhǔn)字H20064297，規(guī)格：0.1 g）100 mg/m2，靜脈滴注，1次/2周。研究組給予抗PD-1單抗治療，選擇納武利尤單抗注射液（生產(chǎn)廠家：Bristol-Myers Squibb Holdings Pharma， Ltd.Liability Company，批準(zhǔn)文號：注冊證號S20180015，規(guī)格：100 mg︰

10 mL）3 mg/kg，靜脈注射（2周為1個周期）。兩組干預(yù)時間均為3個月。

1.3 觀察指標(biāo)及判定標(biāo)準(zhǔn) （1）療效評價標(biāo)準(zhǔn)：完全緩解，所有病理性淋巴結(jié)短軸值<10 mm;部分緩解，目標(biāo)病灶最大徑之和減少≥30%;疾病進(jìn)展，目標(biāo)病灶最大徑之和增加≥20%或有新病灶出現(xiàn);疾病穩(wěn)定，目標(biāo)病灶未發(fā)生變化;死亡。總有效=完全緩解+部分緩解[8]。（2）外周血T淋巴細(xì)胞亞群：通過流式細(xì)胞儀對CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平進(jìn)行檢測。采集患者EDTA抗凝血2 mL，向樣品測定管中加50 μL抗凝血后再加入10 μL對應(yīng)抗體，利用振蕩器混勻，室溫避光孵育20 min后再加入溶血素1 mL繼續(xù)混勻，室溫避光靜置10 min，以1 200 r/min轉(zhuǎn)速進(jìn)行離心操作5 min，加入1 mL PBS緩沖液，繼續(xù)以1 200 r/min轉(zhuǎn)速進(jìn)行離心操作5 min，加入400 μL PBS緩沖液，混勻后放入流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測。（3）血清細(xì)胞因子：通過酶聯(lián)免疫吸附法對成纖維細(xì)胞生長因子（aFGF、bFGF）以及血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）進(jìn)行檢測。（4）不良反應(yīng)：統(tǒng)計疲乏、惡心嘔吐、發(fā)熱、頭暈等不良反應(yīng)發(fā)生情況。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 20.0軟件對所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析，計量資料用（x±s）表示，比較采用t檢驗;計數(shù)資料以率（%）表示，比較采用字2檢驗。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組一般資料比較 研究組男14例，女11例;年齡35～65歲，平均（50.69±8.05）歲。對照組男15例，女10例;年齡36～77歲，平均（51.14±8.27）歲。兩組一般資料比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

2.2 兩組療效比較 治療3個月后，研究組總有效率為76.00%，高于對照組的48.00%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（字2=4.160，P=0.041）。研究組死亡率為4.00%（1/25），與對照組的12.00%（3/25）比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（字2=1.087，P=0.297）。見表1。

2.3 兩組外周血T淋巴細(xì)胞亞群指標(biāo)比較 治療前，兩組外周血CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）;治療后，研究組T淋巴細(xì)胞亞群各指標(biāo)水平均高于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表2。

2.4 兩組治療前后血清細(xì)胞因子水平比較 治療前，兩組aFGF、bFGF、VEGF水平比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）;治療后，研究組各血清細(xì)胞因子水平均低于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表3。

2.5 兩組不良反應(yīng)發(fā)生情況比較 研究組不良反應(yīng)發(fā)生率為16.00%，低于對照組的44.00%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（字2=4.667，P=0.031），見表4。

3 討論

在我國肝癌發(fā)生的主要原因是由慢性乙肝病毒感染引起的，同時還可能與黃曲霉毒素、遺傳因素、肥胖及糖尿病、飲水污染等因素有關(guān)[9]，臨床表現(xiàn)為肝區(qū)疼痛，腹脹、惡心嘔吐、食欲減退等消化道癥狀，可伴有發(fā)熱、乏力、皮膚鞏膜黃染、脾大、腹水等全身癥狀，臨床影像學(xué)檢查可見肝臟占位性病變[10-11]。當(dāng)出現(xiàn)相關(guān)癥狀時應(yīng)及早就醫(yī)確診，排除惡性腫瘤病變的可能性，給予針對性治療[12]。對于肝癌患者手術(shù)是根治的最好方法，但對于無法耐受手術(shù)者，藥物治療、放射治療、靶向治療、免疫治療等更適合[13]。隨著臨床醫(yī)療技術(shù)的發(fā)展，抗PD-1抗體治療開始應(yīng)用于抗癌治療，其機制為抗PD-1抗體通過阻斷PD-1以及程序性死亡分子配體1（PD-L1）途徑來阻斷T細(xì)胞抑制信號從而促進(jìn)腫瘤免疫微環(huán)境的改善，并提升對腫瘤細(xì)胞的清除及監(jiān)視能力[14-15]。目前臨床對于抗腫瘤藥物的研制與試驗正處于快速進(jìn)展期，采取多中心協(xié)作研究推動新藥物臨床試驗為臨床治療提供更多可能。

靶向藥物雖可殺死一定腫瘤細(xì)胞，但患者長期接受靶向藥物治療可能產(chǎn)生耐藥性，此時靶向藥物治療抗腫瘤作用減弱。PD-1為重要免疫抑制分子，屬于CD28超家族成員，可參與免疫活動，主要以下調(diào)免疫系統(tǒng)對人體細(xì)胞的反應(yīng)以及對T細(xì)胞炎癥活動進(jìn)行抑制而促進(jìn)調(diào)節(jié)自身免疫系統(tǒng)達(dá)到預(yù)防免疫性疾病的目的[16-17]。本研究結(jié)果顯示治療3個月后，研究組總有效率為76.00%，高于對照組的48.00%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。治療后，研究組T淋巴細(xì)胞亞群各指標(biāo)水平及各血清細(xì)胞因子水平均優(yōu)于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），提示抗PD-1單抗治療中晚期肝癌患者臨床效果好，可有效改善患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群及血清細(xì)胞因子水平。分析其原因可能是PD-1主要存在于活化T淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞以及B淋巴細(xì)胞，另外多數(shù)腫瘤細(xì)胞表面還可表達(dá)PD-L1，并與存在于浸潤淋巴細(xì)胞的PD-1分子發(fā)生結(jié)合，對CD3+、CD4+及CD8+T淋巴細(xì)胞功能分子釋放具有抑制作用，最終致使淋巴細(xì)胞凋亡，加強免疫作用，促進(jìn)殺傷腫瘤細(xì)胞[18]。CD8+T細(xì)胞在腫瘤中對腫瘤細(xì)胞具有監(jiān)控和殺傷作用，而肝癌患者腫瘤微環(huán)境發(fā)生改變可對CD8+T細(xì)胞增殖、分化功能進(jìn)行抑制，其水平降低，經(jīng)過治療后逐漸升高。成纖維細(xì)胞生長因子對平滑肌細(xì)胞具有增殖作用，并可促進(jìn)提高內(nèi)皮細(xì)胞游走能力，最終使新血管形成，同時血管內(nèi)皮生長因子也可誘導(dǎo)新血管形成，進(jìn)而促進(jìn)生成腫瘤血管，故認(rèn)為血清細(xì)胞因子可促進(jìn)病灶形成。另外本研究還顯示研究組不良反應(yīng)發(fā)生率為16.00%，低于對照組的44.00%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），提示抗PD-1單抗治療較靶向藥物治療其副作用更輕，患者出現(xiàn)的疲乏、惡心嘔吐、發(fā)熱、頭暈等不良反應(yīng)可能是由于患者自身免疫系統(tǒng)受損以及治療藥物常見不良反應(yīng)，經(jīng)過對癥處理后患者不良反應(yīng)減輕或消失。有報道指出抗PD-1抗體不僅在肝癌治療中效果明顯，在非小細(xì)胞肺癌、胃癌、結(jié)直腸癌、霍奇金淋巴瘤、黑色素瘤等中也有明顯效果[19-20]，但由于臨床費用較高，多數(shù)患者無法承擔(dān)，只能選擇其他治療方式。

綜上所述，對中晚期肝癌患者給予抗PD-1單抗治療近期效果顯著，對患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群相關(guān)指標(biāo)有一定影響作用，但本研究樣本量較少，其臨床具體價值及安全性有待進(jìn)一步擴大樣本量、展開長期隨訪進(jìn)行深入分析。

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（收稿日期：2020-08-18） （本文編輯：姬思雨）