董 宇,林翰清,繆 松,3,*,盧 旭,*

(1.福建農(nóng)林大學(xué)食品科學(xué)學(xué)院,福建福州 350002; 2.中國(guó)-愛爾蘭國(guó)際合作食品物質(zhì)學(xué)與結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)研究中心,福建福州 350002; 3.愛爾蘭農(nóng)業(yè)部農(nóng)業(yè)與食品發(fā)展局Teagasc食品研究中心,愛爾蘭科克 999014)

多糖類化合物是重要的天然產(chǎn)物資源,在自然界中分布極廣。多糖是動(dòng)植物細(xì)胞壁的組成成分,如肽聚糖和纖維素;多糖也可作為動(dòng)植物儲(chǔ)能物質(zhì),如糖原和淀粉;此外多糖還具有特殊的生物活性,如肝素在人體內(nèi)具有抗凝血作用,肺炎球菌細(xì)胞壁中的多糖具有抗原作用,因而這類多糖被稱為活性多糖。目前的研究表明,活性多糖具有多種生物活性,尤其是其具有免疫調(diào)節(jié)、抗癌、抗病毒、降血糖等功能,近年來(lái)已經(jīng)成為食品、醫(yī)藥以及生物領(lǐng)域的熱點(diǎn)[1-3]。多糖提取和分析方法也發(fā)展迅猛,目前多糖的提取方法主要有酸堿提取法、超聲提取法、微波提取法、超臨界萃取法、酶提取法、超高壓提取法、動(dòng)態(tài)高壓微射流技術(shù)、高壓脈沖電場(chǎng)提取技術(shù)(High intensity pulsed electric fields,HIPEF)以及多種方法互相結(jié)合的聯(lián)合提取法[4-7]。眾多的提取方法一般以水作為提取溶劑;酸堿提取法工藝要求嚴(yán)格,如果超出工藝要求的酸堿度范圍可能引起多糖中糖苷鍵的斷裂;超聲、微波、高壓提取法對(duì)多糖的組成和活性有較大的影響;酶法提取相對(duì)于其他提取方法,具有反應(yīng)條件溫和、產(chǎn)物不易變質(zhì)、提取效率高、成本低、環(huán)保節(jié)能、優(yōu)化有效組分等顯著的優(yōu)勢(shì)[4-5,8],尤其是酶法與其他提取方法相結(jié)合的輔助提取方法,可提高提取效率,并減少提取時(shí)間。因此,本文主要闡述了多糖類化合物酶法提取技術(shù)的原理、特點(diǎn)及影響因素,并廣泛比較了該技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展,由此對(duì)該技術(shù)的發(fā)展進(jìn)行了展望。

1 酶法提取多糖的原理及其影響因素

1.1 酶法提取多糖的原理

酶法提取多糖的原理在于酶的特異性催化作用,且與酶作用于底物化學(xué)鍵位的選擇性有關(guān)。酶可以選擇并針對(duì)性地降解植物、藻類以及微生物的細(xì)胞壁和細(xì)胞膜(如淀粉、纖維素和果膠等主要細(xì)胞成分),減少溶劑提取時(shí)來(lái)自細(xì)胞壁、細(xì)胞膜和細(xì)胞間質(zhì)的阻力,使有效成分得到釋放[9-12],同時(shí)酶的使用也可將部分多糖降解為更小分子量的片段,從而更有利于多糖從細(xì)胞內(nèi)分離出來(lái)[13]。酶法提取多糖常見的酶有纖維素酶、果膠酶、蛋白酶,具體使用種類要根據(jù)不同的底物而定。例如植物的細(xì)胞壁成分是由纖維素、半纖維素、果膠質(zhì)、木質(zhì)素等物質(zhì)構(gòu)成,則一般需要纖維素酶和果膠酶;而動(dòng)物細(xì)胞膜一般由脂質(zhì)與蛋白質(zhì)構(gòu)成,一般由蛋白酶水解,例如星蟲科的方格星蟲,肉質(zhì)脆嫩,含有豐富的蛋白質(zhì)多糖復(fù)合物類活性物質(zhì),需要采用胰蛋白酶進(jìn)行酶解[14-15]。

1.2 酶法提取多糖的影響因素

酶法提取多糖的效率一般與溫度、pH、底物濃度、酶濃度、提取時(shí)間、抑制劑及激活劑等因素相關(guān),通過(guò)預(yù)試驗(yàn)一般可以獲得相關(guān)因素的酶解最適條件。

1.2.1 溫度和pH 每一種酶都有一個(gè)最適的溫度范圍,但它不是固定的,其大小受作用時(shí)間、底物種類等影響,并且過(guò)高或過(guò)低的溫度都會(huì)降低酶解效率。同樣過(guò)高或過(guò)低的pH也會(huì)造成酶解效率的下降,原因是pH的不適會(huì)引起酶蛋白質(zhì)構(gòu)象的改變,從而導(dǎo)致了酶的變性;即使pH的不適未引起酶的變性,但其同樣會(huì)影響酶與底物的解離過(guò)程,從而降低酶活性,不利于催化產(chǎn)物的形成。此外,酶構(gòu)象的活性位點(diǎn)或官能團(tuán)區(qū)域可能會(huì)因?yàn)閜H的調(diào)節(jié)而改變[16]。

1.2.2 底物濃度與酶濃度 當(dāng)?shù)孜镞^(guò)量時(shí),反應(yīng)達(dá)到平衡后,酶解效率不會(huì)因?yàn)榈孜餄舛鹊脑黾佣黾?而酶解時(shí)間會(huì)因?yàn)槊傅牟蛔愣娱L(zhǎng),當(dāng)加酶量過(guò)多時(shí),底物的稀缺會(huì)造成酶與酶之間出現(xiàn)競(jìng)爭(zhēng)底物的現(xiàn)象,從而抑制酶的催化作用,同時(shí)也會(huì)造成酶的浪費(fèi)。

1.2.3 提取時(shí)間 酶提取多糖時(shí)間的長(zhǎng)短也會(huì)影響催化效率,當(dāng)酶解時(shí)間過(guò)短時(shí),酶與底物的反應(yīng)會(huì)不充分,從而導(dǎo)致產(chǎn)物的提取率較低;當(dāng)酶解時(shí)間過(guò)長(zhǎng)時(shí),酶促反應(yīng)完成后,產(chǎn)物提取率不會(huì)隨著時(shí)間的延長(zhǎng)而增加,當(dāng)酶足量時(shí),隨著酶解時(shí)間的延長(zhǎng),多糖甚至?xí)幻附到鉃閱翁?得率反而下降[17-20]。

1.2.4 抑制劑及激活劑 抑制劑會(huì)與酶進(jìn)行可逆或不可逆的結(jié)合,從而抑制酶的催化作用。當(dāng)酶的活性基團(tuán)與抑制劑以共價(jià)鍵的形式牢固結(jié)合時(shí),酶的活性會(huì)喪失,超濾、透析等方法也無(wú)法除去抑制劑以恢復(fù)酶的活性,此為不可逆結(jié)合。可逆結(jié)合可分為競(jìng)爭(zhēng)性抑制作用、非競(jìng)爭(zhēng)性抑制作用和反競(jìng)爭(zhēng)性抑制作用。競(jìng)爭(zhēng)性抑制作用為抑制劑與酶所作用的底物結(jié)構(gòu)相似,可與底物共同競(jìng)爭(zhēng)酶的活性位點(diǎn);非競(jìng)爭(zhēng)性抑制作用為抑制劑與底物可同時(shí)結(jié)合在酶的不同部位,形成酶-底物-抑制劑三元復(fù)合物,使反應(yīng)終止;反競(jìng)爭(zhēng)性抑制作用為酶與底物形成絡(luò)合物后才能與抑制劑結(jié)合,結(jié)果同樣使反應(yīng)終止。與不可逆結(jié)合不同的是,可逆結(jié)合可通過(guò)物理的方法去除抑制劑,并恢復(fù)酶活性。酶的激活劑大多都是金屬離子或者其他無(wú)機(jī)離子,某些還原劑也能激活特定的酶,使酶中二硫鍵還原成巰基從而提高酶活性;但激活劑也有其最適濃度,過(guò)多也會(huì)造成對(duì)酶的抑制作用[21]。

2 酶法提取多糖的技術(shù)

目前酶法提取多糖的技術(shù)主要有單酶法、多酶法、酶法提取技術(shù)與其他技術(shù)的聯(lián)用三大類。本文將根據(jù)相關(guān)研究的最新進(jìn)展對(duì)這幾種方法進(jìn)行介紹和比較。

2.1 單酶法提取

單酶法是指只利用一種酶來(lái)酶解原料從而獲取多糖的方法,經(jīng)常使用的酶包括纖維素酶、蛋白酶、果膠酶等。纖維素酶是一種可以酶解纖維素的β-D-葡萄糖苷鍵,破壞植物的細(xì)胞壁,從而釋放出多糖等有效成分的酶。蛋白酶是一種可以水解生物體內(nèi)游離的蛋白質(zhì),使蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)變得松散的酶;蛋白酶還可以水解糖蛋白和蛋白聚糖中游離的蛋白質(zhì),降低蛋白質(zhì)對(duì)原料的結(jié)合力,使得多糖的浸出變得有利[14]。目前多糖提取中常用的蛋白酶有胰蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶。果膠酶是一種作用于果膠復(fù)合物的酶的總稱,包括果膠甲酯酶、聚半乳糖醛酸酶和果膠酸裂解酶三種。如表1所示,通過(guò)總結(jié)可以看出,單一酶提取多糖的條件和得率會(huì)隨著提取物的不同而表現(xiàn)出較大的差異,相同的多糖水解酶在酶解不同底物時(shí)的最適pH和溫度仍然表現(xiàn)出了一定的規(guī)律性,纖維素酶的最適pH在4.5～6.0,溫度在50 ℃左右;胰蛋白酶的最適pH在8.0～8.6,溫度在37～60 ℃;中性蛋白酶的最適溫度在40～54 ℃;木瓜蛋白酶的最適pH在4～6.6,溫度在50～55 ℃;果膠酶的最適pH在3.0～5.0,溫度在40～60 ℃。單酶法提取多糖得率與傳統(tǒng)熱水提取多糖得率相比并沒有突出優(yōu)勢(shì),甚至多糖提取率會(huì)略低于熱水提取,因此單酶法提取不適合用于多糖生產(chǎn),一般是作為預(yù)實(shí)驗(yàn)來(lái)觀察提取效果或者作為多酶法提取正交設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)的單因素實(shí)驗(yàn)來(lái)進(jìn)行研究[22-25]。

表1 不同酶在多糖提取中的應(yīng)用Table 1 Application of different enzymes in polysaccharide extraction

2.2 多酶法提取

多酶法提取包括復(fù)合酶法提取和分段酶法提取,多酶法提取中酶種類的選取一般依據(jù)提取物細(xì)胞壁、細(xì)胞膜的成分或者其多糖與所結(jié)合蛋白質(zhì)的性質(zhì)。復(fù)合酶法提取即選用兩種或多種酶,并按照一定比例進(jìn)行組合優(yōu)化后,同時(shí)作用于提取物,以起到增加酶解效率和多糖提取率的效果。復(fù)合酶法的酶配比、加酶量、溫度、pH等最優(yōu)條件的研究一般是在單酶最適條件研究的基礎(chǔ)上,通過(guò)正交試驗(yàn)或響應(yīng)面試驗(yàn)等來(lái)確定[16,55-56]。夏平等[57]以桑葉多糖為研究對(duì)象,以纖維素酶和果膠酶(質(zhì)量比為1∶1)為復(fù)合酶,多糖提取率高達(dá)14.32%,是王芳等[58]采用單一纖維素酶(12.49%)法提取率的1.11倍。于翠芳等[59]采用復(fù)合酶法(蛋白酶∶纖維素酶∶果膠酶=1∶1∶1)提取枸杞多糖,提取率為13.96%,是吳素萍等[27]采用單一纖維素酶(11.20%)法提取率的1.25倍。張艷等[60]采用復(fù)合酶法(纖維素酶∶木瓜蛋白酶=1∶1)提取香菇多糖的提取率高達(dá)13.25%,是王文文等[61]采用單一纖維素酶(4.16%)提取法的3.19倍。以上的研究表明,優(yōu)化后的復(fù)合酶法可提高多糖的提取率,但還需優(yōu)化酶的合理配比以及酶種類組合,如提取洋蔥多糖過(guò)程中李建鳳等[62]采用纖維素酶、木瓜蛋白酶和果膠酶(較優(yōu)配比為18∶5∶10)的復(fù)合酶法的提取率為3.75%,明顯小于陳曦等[63]采用纖維素酶、木瓜蛋白酶和中性蛋白酶(2∶2∶1)為復(fù)合酶的研究(18.75%),也同樣小于曹芮等[40]采用胰蛋白酶單酶法的提取率(13.10%)。

分段酶法提取中酶的加入順序、每種酶的作用時(shí)間等都會(huì)對(duì)提取效果有影響。分段酶法提取中酶的添加順序一般是通過(guò)研究酶的不同加入順序?qū)Χ嗵翘崛〉男Ч麃?lái)確定,同時(shí)各酶分段使用的最優(yōu)條件是在單因素實(shí)驗(yàn)研究的基礎(chǔ)上通過(guò)正交試驗(yàn)或其它試驗(yàn)來(lái)獲取。王艷等[64]采用纖維素酶、果膠酶和木瓜蛋白酶提取姬松茸多糖,在采用均勻設(shè)計(jì)法獲取各單酶最適條件的基礎(chǔ)上進(jìn)行復(fù)合酶法和分段酶法研究,分段酶法研究中酶的添加順序按照三種酶的排列組合即6種順序依次研究對(duì)多糖提取的效果,結(jié)果顯示,分段酶法多糖得率均高于復(fù)合酶法(11.65%),也高于熱水提取法(7.69%);酶的最優(yōu)添加順序?yàn)橄忍砑庸z酶,然后添加纖維素酶,最后添加木瓜蛋白酶,并且每種酶的作用條件均是其最優(yōu)條件,最終多糖提取率為13.42%,但通過(guò)對(duì)比6種添加順序?qū)Χ嗵堑寐实挠绊懓l(fā)現(xiàn),6種添加順序所獲得的多糖提取率之間并沒有太大差別,極差僅為1.29%。程俊文等[65]采用分步酶法,在優(yōu)化的條件下利用纖維素酶、果膠酶和木瓜蛋白酶分別依次處理了香菇子實(shí)體,最終多糖得率達(dá)到14.17%,高于張艷等[60]的研究(13.25%)。分段酶法提取多糖優(yōu)于復(fù)合酶的優(yōu)勢(shì)在于可以給予每一種酶較優(yōu)的酶解條件,從而發(fā)揮每一種酶的最大作用和效率,避免由于酶解條件的不同對(duì)于酶解效率的影響,最大限度地提高提取率,但是該法步驟繁瑣,會(huì)增加工作量和資本投入,因此需要在實(shí)際工作中進(jìn)行取舍。

2.3 酶法提取技術(shù)與其他技術(shù)的聯(lián)用

2.3.1 超聲波協(xié)同酶法提取多糖 超聲波輔助提取法的原理主要是依據(jù)超聲波的機(jī)械效應(yīng)、空化作用和熱效應(yīng),通過(guò)提高物質(zhì)的分子運(yùn)動(dòng)頻率和速度來(lái)增加溶劑的穿透力,從而提高被提取成分的溶出速度。超聲波和酶法輔助提取是近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的從植物中提取生物活性物質(zhì)的新技術(shù)。范金波等[66]以黑木耳為原料,優(yōu)化了超聲波輔助復(fù)合酶法對(duì)黑木耳多糖的提取工藝,獲得超聲波復(fù)合酶作用時(shí)間為66 min時(shí),多糖提取率為22.25%,是鈞矛等[67]采用的復(fù)合酶法提取率的5.11倍,時(shí)間也縮短了122 min;同樣王杉杉等[68]以枸杞為原料,優(yōu)化超聲波輔助復(fù)合酶法提取枸杞多糖的工藝條件,其中超聲時(shí)間為50 min,多糖平均得率為58.910%,是于翠芳等[59]采用復(fù)合酶法提取率的4.22倍,并且提取時(shí)間也縮短了10 min。貫云娜等[69]以大蒜為研究材料,其中比較了復(fù)合酶法、超聲輔助復(fù)合酶法、酶解后超聲提取、超聲后酶解提取對(duì)大蒜多糖得率的影響,研究表明超聲輔助復(fù)合酶法提取最優(yōu)提取時(shí)間為30 min,大蒜多糖得率為25.798%,是超聲法提取的1.21倍,是復(fù)合酶法提取的1.48倍,且消耗時(shí)間更短,同時(shí)酶解后超聲提取和超聲后酶解提取的得率分別為21.832%和23.199%,因此該文的研究表明,超聲波環(huán)境并沒有影響復(fù)合酶的活性,反而通過(guò)兩者的協(xié)同作用增加了大蒜多糖的得率。綜上超聲波可以通過(guò)破壞細(xì)胞壁,促進(jìn)多糖的溶出,進(jìn)一步提高其產(chǎn)量,同時(shí)采用超聲輔助提取可以縮短提取時(shí)間[70-72];而酶輔助提取具有投資成本低、能耗低、重現(xiàn)性好、操作簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)[20,73-74],因此,兩種方法的結(jié)合可起到互相促進(jìn)的作用。

2.3.2 微波協(xié)同酶法提取多糖 微波是一種具有較高能量的高頻電磁波。微波能夠以高能量照射植物細(xì)胞,可使細(xì)胞內(nèi)部的極性分子產(chǎn)生偶極渦流、離子傳導(dǎo)和高頻率摩擦等現(xiàn)象,導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生大量熱量,細(xì)胞內(nèi)溫度升高,分子運(yùn)動(dòng)速度加快,同時(shí)液態(tài)水汽化產(chǎn)生水蒸氣,進(jìn)一步導(dǎo)致胞內(nèi)壓力變大,最終導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)部的化學(xué)成分沖破細(xì)胞壁,釋放到提取溶劑中[8,75-76]。王珺等[77]采用微波輔助酶法(α-淀粉酶∶纖維素酶(g/g)=10∶1)提取懷山藥多糖,提取率為34.78%,是喬宇等[78]采用單酶法提取的5.72倍。李靜等[79]采用微波輔助酶法(纖維素酶與果膠酶比例為1.3∶1)提取柚皮多糖,提取率為22.8%,是王瑩等[80]采用復(fù)合酶法提取的2.76倍,是岳賢田[81]只采用微波輔助提取法的1.32倍,并且節(jié)省微波時(shí)間160 min。此外與傳統(tǒng)水提取法相比,微波法具有處理量較大、萃取效率高、耗時(shí)短、選擇性好、萃取效率和產(chǎn)品純度更高等優(yōu)點(diǎn),但微波在提取時(shí)間較長(zhǎng)的情況下會(huì)破壞多糖的結(jié)構(gòu),降低多糖的活性[82]。因此微波法與酶法聯(lián)用可以有效地減少微波時(shí)間較長(zhǎng)對(duì)多糖結(jié)構(gòu)的破壞,同時(shí)彌補(bǔ)酶法提取的不足。

2.3.3 高壓脈沖電場(chǎng)(HIPEF)法協(xié)同酶法提取多糖 高壓脈沖電場(chǎng)技術(shù)是一種已被應(yīng)用于多糖提取領(lǐng)域的新興非加熱處理技術(shù),該技術(shù)目前廣受關(guān)注,因?yàn)樵摷夹g(shù)具有電穿孔性能,賦予其較強(qiáng)的破除細(xì)胞屏障的能力,而且對(duì)熱敏性物質(zhì)的破壞力較小,即可最大限度地減少對(duì)多糖和酶活性的破壞,同時(shí)HIPEF還具有能耗低、操作低、費(fèi)用低、提取時(shí)間短、提取率和得率高、部分提取物在低溫下有效性增強(qiáng)、所提生物活性成分穩(wěn)定性高等優(yōu)點(diǎn),因此在多糖生產(chǎn)中具有良好的應(yīng)用前景[6,83]。陳文等[84]采用酶技術(shù)結(jié)合高壓脈沖電場(chǎng)法優(yōu)化了方格星蟲多糖提取的工藝實(shí)驗(yàn)條件,最佳工藝條件中酶解時(shí)間為2 h,最大提取率為6.45%,是張琴等[14]人采用胰蛋白酶法提取的4.06倍,同時(shí)時(shí)間縮短1 h。

3 酶法提取多糖優(yōu)勢(shì)

3.1 提取率較高

酶法提取是多糖提取方法中較為成熟有效的一種,尤其是在多糖提取率方面具有突出優(yōu)勢(shì)。例如表2中段宙位等[85]、李瑩等[86]、鄧桂蘭[87]和王鵬等[88]的研究表明,與傳統(tǒng)的水提法、超聲輔助提取法、微波輔助提取法、以及堿浸提法等方法相比,酶法提取在多糖的提取率方面的效果優(yōu)于其他方法,尤其是復(fù)合酶法的提取效果更加明顯。而Chen等[89]、Wu等[90]、Li等[91]和Chen等[92]的研究也表明,超聲輔助酶法比酶法、超聲輔助提取法和水提法的多糖提取率更高,酶法提取率高的原因在于在最適的反應(yīng)環(huán)境下,酶促反應(yīng)的高效性和專一性使得多糖的釋放效率得到了較大的提升。而酶法與其他方法聯(lián)用可互補(bǔ)各技術(shù)之間的缺陷,進(jìn)一步提升多糖的提取率。

表2 酶法提取多糖的優(yōu)勢(shì)Table2 Advantages of enzymatic extraction of polysaccharides

3.2 生物活性更強(qiáng)

如表2所示,在抗氧化性以及抗癌效果等生物活性方面酶法提取多糖的效果也明顯優(yōu)于其他方法。這可能是由于多糖提取方法和提取條件的不同,造成了所提多糖的分子量大小、單糖含量及其組成有所差別,從而影響了其抗氧化等生物活性。而且研究普遍認(rèn)為多糖的化學(xué)成分、結(jié)構(gòu)、分子質(zhì)量和構(gòu)象會(huì)影響其生物活性和其他藥用特性[93-95]。研究表明,酶法提取多糖與傳統(tǒng)的熱水提法等方法相比,其多糖的形貌結(jié)構(gòu)、單糖的組成上往往沒有明顯差別[16,89,96],但是在單糖的比例、多糖的分子量分布和未甲基化半乳糖醛酸的含量上會(huì)有差別[90,97-99]。Fan等[100]研究了復(fù)合酶法提取的多糖相比于單酶法和水提法所提取的多糖的差異,結(jié)果表明多糖分子量與抗氧化性的相關(guān)性最強(qiáng),多糖的分子量越小,抗氧化性越高,而復(fù)合酶法提取出的多糖分子量最小,因此其抗氧化性最高。而其他研究也表明了酶法提取多糖可能是通過(guò)降低多糖的分子量來(lái)增強(qiáng)多糖活性[98-101],此外Wu等[90]和Shang等[99]的研究還表明,酶法提取的多糖中具有抗氧化活性的未甲基化半乳糖醛酸的含量更高。因此酶法提取可通過(guò)降低多糖分子量、增加提取物中未甲基化半乳糖醛酸的含量來(lái)改變多糖的生物學(xué)活性,其原因可能是酶法提取所獲得的多糖,打破了原生多糖的長(zhǎng)鏈結(jié)構(gòu),從而釋放了更多的活性單元,并且未破壞其活性單元的聚合結(jié)構(gòu),使其相對(duì)分子質(zhì)量保持在一個(gè)合適的較低水平,從而在整體上提升了多糖的活性。

此外,采用超聲輔助提取法和微波輔助法提取的多糖在抗氧化性上也會(huì)高于傳統(tǒng)水提法[101-102],研究表明這也可能是通過(guò)降低多糖的分子量和增加去甲基糖醛酸而增加了多糖的活性[103-106],因此采用微波輔助酶法或者超聲輔助酶法提取多糖可能是一種更好的選擇。例如,Chen等[89]采用熱水提取法、超聲輔助提取法、酶輔助提取法和超聲輔助酶法提取山楂多糖,熱水提取法獲得的多糖相對(duì)分子質(zhì)量最大,其他方法獲得的多糖相對(duì)分子質(zhì)量無(wú)明顯差異;超聲輔助酶法獲得的多糖對(duì)超氧自由基的清除作用最強(qiáng)。Li等[91]、Wu等[90]和Chen等[92]的研究同樣也表明相比于熱水提取法、酶法和超聲輔助提取法,超聲輔助酶法提取的多糖抗氧化性最好,并且其多糖的分子量最低、糖醛酸或者熊果酸的含量最高。

4 結(jié)論及展望

酶法提取多糖技術(shù)由于具有酶促反應(yīng)條件溫和、高效、環(huán)保、節(jié)能和特異性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn),得到了廣泛的應(yīng)用。目前,隨著人們對(duì)于活性多糖功能的研究越來(lái)越多,酶法提取技術(shù)也得到了不斷地發(fā)展,近年來(lái)的研究表明單一酶法提取技術(shù)的應(yīng)用越來(lái)越少,復(fù)合酶法以及復(fù)合酶法結(jié)合超聲輔助提取技術(shù)的應(yīng)用越來(lái)越多,這一改變與所獲多糖的提取率和活性較高直接相關(guān)。高壓脈沖電場(chǎng)技術(shù)作為一種新興的多糖提取技術(shù),其與酶法的結(jié)合已經(jīng)在方格星蟲多糖提取中得到應(yīng)用,該技術(shù)在一定功率下具有產(chǎn)熱少、耗能低的優(yōu)點(diǎn),明顯優(yōu)于超聲波及微波等技術(shù),相信該技術(shù)與酶法的結(jié)合使用將會(huì)成為未來(lái)多糖提取的一個(gè)熱點(diǎn)研究方向。此外,多糖的提取技術(shù)服務(wù)于多糖的活性功能研究已經(jīng)成為目前多糖提取技術(shù)發(fā)展的基本理念,即以“生理功能-有效組分-提取工藝”為核心的研究思路,將有效多糖組分的產(chǎn)率設(shè)為優(yōu)先指標(biāo),提取環(huán)節(jié)就進(jìn)行方法的選擇和優(yōu)化,可大大增加功能多糖的生產(chǎn)效率,減少不必要的資本消耗。酶法提取的多糖具有更好的生物學(xué)活性,在未來(lái)相關(guān)領(lǐng)域的發(fā)展中將會(huì)扮演更為重要的角色。