陳麗華,朱婕曼,劉玉鳳,劉 浩,馬春星,張 凡,劉云春(河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院.婦產(chǎn)科；.病理科，河北張家口075061)

絕經(jīng)后女性是子宮內(nèi)膜癌的高發(fā)群體，患者多并發(fā)高血壓、糖尿病等基礎(chǔ)疾病，且部分患者因早期無癥狀而未能及時治療干預(yù)，給患者治療帶來困難，成為短期預(yù)后不良的誘因。糖鏈抗原125（cancer antigen 125，CA125）、糖類抗原199(carbohydrate antigen199，CA199)等腫瘤標記物在子宮內(nèi)膜癌早期診斷與預(yù)后判斷中的價值已被臨床多次報道，但CA125，CA199 亦可在子宮內(nèi)膜異位癥、盆腔炎癥及卵巢癌等患者中出現(xiàn)異常表達，這使其判斷患者短期預(yù)后的特異性價值有所局限。血管緊張素（1-7）[angiotensin-（1-7），Ang-（1-7）]與受體阻斷藥（Ang Ⅱ）均屬腎素-血管緊張素系統(tǒng)具有多功能的活性肽，有研究表明，腎素-血管緊張素系統(tǒng)（renin‐angiotensinsystem，RAS）是一種調(diào)節(jié)系統(tǒng)，能調(diào)節(jié)水鈉平衡、體液平衡等，在調(diào)節(jié)體內(nèi)平衡和正常生理功能中起著重要作用[1-2]。其不僅存在于循環(huán)系統(tǒng)中，還存在于心、腎、腦、子宮等許多其他器官中[3]。本研究旨在探討Ang-（1-7）及其MasR 受體在子宮內(nèi)膜癌臨床治療及患者預(yù)后等方面的價值。

1 材料與方法

1.1 研究對象 選取我院2017年4月～2019年4月手術(shù)切除的78例子宮內(nèi)膜癌組織，經(jīng)病理確診均為子宮內(nèi)膜癌?；颊吣挲g35～73歲，平均年齡52.73±19.45歲，體重指數(shù)20.25±2.36kg/m2，其中絕經(jīng)有57例，未絕經(jīng)有33例，40例并發(fā)高血壓，27例并發(fā)糖尿病，23例并發(fā)子宮肌瘤，并收集同時期32例子宮內(nèi)膜不典型增生患者子宮內(nèi)膜組織及16例正常子宮內(nèi)膜組織作為對照，所有患者術(shù)前均未進行化療。本研究獲得我院倫理委員會批準。納入標準：①患者均簽署知情同意書；②患者均在宮腔鏡下穿刺活檢后證實為子宮內(nèi)膜癌。排除標準：①嚴重肝腎疾病者；②自身免疫系統(tǒng)缺陷者；③并發(fā)有其他原發(fā)性惡性腫瘤者。見表1。

表1 各組研究對象一般資料比較（±s）

表1 各組研究對象一般資料比較（±s）

類 別 子宮內(nèi)膜癌組(n=78) 子宮不典型增生組(n=32) 正常子宮組織組(n=16) F/Z P年齡(歲) 52.73±19.45 51.61±19.32 49.27±18.69 75.142 0.946體重指數(shù)（kg/m2） 20.25±2.36 20.31±3.21 20.24±1.96 24.213 0.266宮腔深度(mm) 7.25±2.47 7.02±2.65 7.13±2.52 35.123 0.735孕次 2 2 2-0.526 0.615

1.2 儀器與試劑 采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測，試劑盒購自美國Adlitteram Diagnostic Laboratories 公司，酶標儀為澳大利亞anthos 2010型，操作步驟嚴格按照試劑盒說明書進行。

1.3 方法 ELISA檢測Ang-（1-7）,將新鮮冷凍子宮內(nèi)膜組織在預(yù)冷氯化鈉注射液中多次洗滌，稱取0.2g，然后依次加入氯化鈉注射液和甲基磺酰氟（Phenylmethylsulfonyl fluoride，PMSF）。組織凈重（G）∶0.9g/L 氯化鈉注射液（M1）∶PMSF（BT1）=1∶10∶100。超聲勻漿至透明無顆粒狀。在4℃下于1 2000g 離心5 min，取上清液。Wstern blot檢測MasR 受體的蛋白表達,將子宮內(nèi)膜組織超聲勻漿成透明無顆粒狀，離心后取上清液。將30g總蛋白加入15g/L的SDS 聚丙烯酰胺凝膠混合電泳，在PVDF 膜上印跡，用5g/L 脫脂牛奶密封1h，抗MasR 一級抗體（1∶1 000）4℃孵育過夜。TBST 膜清洗3次，每次10 min，然后與辣根過氧化物酶標記的次級抗體在室溫下孵育1h。用TBST沖洗薄膜3次，然后顯影。使用QuantityOne 軟件進行灰度分析。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析 統(tǒng)計分析使用SPSS 18.0 統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，子宮內(nèi)膜組織及子宮內(nèi)膜癌組織中Ang-(1-7)和MasR表達水平差異采用單因素方差分析（F檢驗）,計量資料采用均數(shù)±標準差(±s)表示，陽性率采用百分比表示，組間比較采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組患者Ang-（1-7），MasR陽性率比較 子宮內(nèi)膜癌組、不典型增生組與正常子宮組織組Ang-（1-7）陽性率分別為56（71.79%），12（37.50%），2（12.50%）；陰性率為22（28.20%），20（62.50%），14（87.50%），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=11.506，P=0.000）。MasR陽性率分別為51（65.38%），11（34.38%），1（6.25%）；陰性率為27（34.62%），21（65.62%），15（93.75%），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=8.619，P=0.002）。

2.2 三組患者Ang-（1-7），MasR組織內(nèi)表達結(jié)果 見表2。與不典型增生組織和正常組織相比，子宮內(nèi)膜癌組Ang-（1-7）和MasR表達顯著增高（P<0.05）。

表2 三組Ang-（1-7），MasR組織內(nèi)表達結(jié)果（±s）

表2 三組Ang-（1-7），MasR組織內(nèi)表達結(jié)果（±s）

項 目 子宮內(nèi)膜癌組（n=78） 不典型增生組（n=32） 正常子宮組織組（n=32） F p Ang-（1-7）（μg/L） 1.35±0.23 0.78±0.15 0.45±0.08 45.323 <0.05 MasR（μg/L） 2.43±0.83 0.87±0.56 0.78±0.23 76.238 <0.05

2.3 Ang-（1-7），MasR的表達與子宮內(nèi)膜癌臨床病理特征的關(guān)系 見表3。Ang-（1-7），MasR表達在不同TNM 病理分期、不同分化程度及有無轉(zhuǎn)移子宮內(nèi)膜癌患者中差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P<0.05）。

表3 Ang-（1-7），MasR的表達與子宮內(nèi)膜癌臨床病理特征的關(guān)系

3 討論

絕經(jīng)后女性是子宮內(nèi)膜癌的高發(fā)群體，患者多并發(fā)高血壓、糖尿病等基礎(chǔ)疾病，且部分患者因早期無癥狀而未能及時治療干預(yù)，成為短期預(yù)后不良的誘因[4-5]。因而，對患者預(yù)后影響因素進行研究可為臨床治療提供參考。CA125，CA199 等腫瘤標記物在子宮內(nèi)膜癌早期診斷與預(yù)后判斷中的價值已被臨床多次報道，但CA125，CA199 亦可在子宮內(nèi)膜異位癥、盆腔炎癥及卵巢癌等患者中出現(xiàn)異常表達，這使其判斷患者短期預(yù)后的特異性價值有所局限[6-8]。

Ang-（1-7）與Ang Ⅱ均屬腎素-血管緊張素系統(tǒng)具有多功能的活性肽，侯智為等[9]動物實驗證實Ang Ⅱ可促進血管內(nèi)皮生長因子表達而加快子宮內(nèi)膜癌腫瘤血管生長，還有基礎(chǔ)研究顯示Ang Ⅱ可通過調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)化生長因子β 和c-myc 基因參與腫瘤增殖[10]。而Ang-(1-7)是Ang Ⅱ拮抗因子，Ang-(1-7)可能通過抑制Ang Ⅱ達到抑制腫瘤增殖的作用。另外，Ang-(1-7)可抑制子宮內(nèi)膜上皮細胞分化，誘導(dǎo)異常增生的腫瘤細胞凋亡，其作用具有劑量依賴性[11]。MasR 對Ang-(1-7)可發(fā)揮傳遞效應(yīng)，并可調(diào)節(jié)Ang Ⅱ表達，達到調(diào)控子宮內(nèi)膜組織生長作用[12]。因而，MasR 在子宮內(nèi)膜癌組織中表達與Ang-(1-7)一致，本研究發(fā)現(xiàn)子宮內(nèi)膜癌組Ang-（1-7）及MasR陽性率均高于子宮內(nèi)膜不典型增生組和正常子宮組織組，說明子宮內(nèi)膜組織Ang-（1-7）及MasR陽性率高表達可能提示患者預(yù)后不良。

我們還發(fā)現(xiàn)，MasR表達上調(diào)，VEGF和MVD也上調(diào)。VEGF是一種功能強、特異性高的可溶性血管生成啟動因子，與腫瘤生長、侵襲和轉(zhuǎn)移具有密切的相關(guān)性[13-14]。SEKI 等[15]發(fā)現(xiàn)子宮內(nèi)膜癌細胞可分泌VEGF，促進血管生成，淋巴管浸潤區(qū)高于非淋巴管浸潤區(qū)，與MVD 一起對患者生存率有顯著影響。MVD 作為腫瘤血管生成定量分析的指標，能清楚地反映其浸潤轉(zhuǎn)移能力[16]。SALVESEN等[17]對60例子宮內(nèi)膜癌患者進行了平均19年的隨訪調(diào)查,發(fā)現(xiàn)子宮內(nèi)膜癌中MVD 與腫瘤分級、肌層浸潤及淋巴管脈管浸潤具有相關(guān)性，是子宮內(nèi)膜癌的獨立預(yù)后因素。本次實驗表明MasR表達上調(diào)、VEGF表達上調(diào)和MVD 升高呈正相關(guān)，證明AngII 可能通過MasR 增加VEGF的分泌達到促進子宮內(nèi)膜癌間質(zhì)新生血管形成的作用。

綜上所述，MasR 在子宮內(nèi)膜癌中表達上調(diào)與病理分期、分化程度及有無轉(zhuǎn)移等因素具有密切的相關(guān)性，且MasR，VEGF水平表達上調(diào)和MVD水平升高呈正相關(guān)，提示MasR 可能參與了子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生發(fā)展，而MasR表達的上調(diào)促進了子宮內(nèi)膜癌細胞的生長和血管生成，可能成為判斷子宮內(nèi)膜癌預(yù)后的一個指標。而Ang-(1-7)可能通過抑制Ang Ⅱ達到抑制腫瘤增殖作用，Ang-(1-7)還可抑制子宮內(nèi)膜上皮細胞分化，誘導(dǎo)異常增生的腫瘤細胞死亡，且MasR 對Ang-(1-7)可發(fā)揮傳遞效應(yīng)，并可調(diào)節(jié)Ang Ⅱ表達，達到調(diào)控子宮內(nèi)膜組織生長作用。因此，Ang-（1-7）和MasR的表達與子宮內(nèi)膜癌患者的預(yù)后密切相關(guān)，為臨床診斷及治療提供了新的治療靶向，值得臨床進一步推廣應(yīng)用。