程 琳 徐茹霞 朱 琦

根管治療雖可有效封閉根尖孔，一定程度恢復(fù)牙解剖形態(tài)和功能，但無(wú)法替代正常牙髓組織對(duì)牙滋養(yǎng)與修復(fù)作用，導(dǎo)致根管治療后易出現(xiàn)牙體缺損和斷裂[1]。當(dāng)牙因齲病等因素出現(xiàn)脫礦時(shí)，轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）可從牙基質(zhì)中大量釋放，促進(jìn)牙髓細(xì)胞向成牙本質(zhì)細(xì)胞分化，介導(dǎo)牙體組織修復(fù)[2]。Galler 等[3]研究發(fā)現(xiàn)，根管消毒劑對(duì)牙本質(zhì)TGF-β1 釋放量存在影響。

資料和方法

收集2018 年7 月～2019 年12 月因正畸拔除的120 顆單根離體牙。納入標(biāo)準(zhǔn):①口腔錐形束CT顯示為單根直根管；②牙根長(zhǎng)13～15mm；③牙體完整且無(wú)齲壞、隱裂、填充物及修復(fù)體。排除標(biāo)準(zhǔn):①既往根管治療史；②牙根彎曲度＞20°；③處于哺乳期或妊娠期；④近3 個(gè)月使用抗生素、免疫調(diào)節(jié)劑治療。70 例患者，男38 例，女32 例，年齡18～75 歲，平均年齡（49.42±11.25）歲。隨機(jī)將牙樣本分為陰性對(duì)照組（n＝20）、0.9%NaCl 組（n＝20）、17%乙二胺四乙酸（ethylenediaminetetraacetic acid， EDTA）組（n＝20）、10%檸檬酸（Citric acid，CA）組（n＝20）、10%磷酸（phosphoric acid，PA）組（n＝20）和37%PA 組（n＝20）。

根段模型制備:磷酸鹽緩沖生理鹽水沖洗單根離體牙，刀片刮除牙面牙周組織，截除牙冠和根尖部分，取中段制備成高8mm，長(zhǎng)6mm 圓柱形牙根段，外牙根表面涂抹指甲油。

TGF-β1 向根管間隙釋放量:1.5%次氯酸鈉（NaOCl）沖洗根段樣品5min，30Ga 側(cè)方開(kāi)口沖洗針（瑞士康特齒科集團(tuán)） 對(duì)預(yù)備完成根管進(jìn)行終末沖洗，陰性對(duì)照組采用5mL 蒸餾水，0.9%NaCl 組采用5mL 的0.9%氯化鈉溶液，17%EDTA 組采用5mL 的17%EDTA 溶液，10%CA 組采用5mL 的10%CA 溶液，10%PA 組采用5mL 的10%PA 溶液，37%PA 組采用5mL 的37%PA 溶液，操作流程按照廠家說(shuō)明書(shū)進(jìn)行；吸水紙紙尖干燥根段，置于含青霉素和鏈霉素各100U/mL 的α- 最低限度基本培養(yǎng)基（上海聯(lián)碩生物科技有限公司，貨號(hào)SH30265.01B），37℃培養(yǎng)24h；酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定培養(yǎng)基中TGF-β1 釋放量（ 上海酶聯(lián)生物科技有限公司， 貨號(hào)ML-Elisa-0014）；最終吸收值與試劑盒提供標(biāo)準(zhǔn)值一致，每個(gè)樣品重復(fù)測(cè)定三次取平均值。

殘留沖洗劑細(xì)胞毒性[4]:水冷狀態(tài)下，制備牙本質(zhì)切片（5mm×5mm×1mm）；隨機(jī)選取3 個(gè)未沖洗牙本質(zhì)切片為對(duì)照組，剩余切片以1.5%NaOCl 沖洗5min 后，0.9%NaCl 組采用5mL 的0.9%氯化鈉溶液，17%EDTA 組采用5mL 的17%EDTA 溶液，10%CA 組采用5mL 的10%CA 溶液，10%PA 組采用5mL 的10%PA 溶液，37%PA 組采用5mL 的37%PA溶液；吸水紙紙尖干燥牙本質(zhì)切片表面，置于Transwell 上室；人根尖牙乳頭干細(xì)胞置于無(wú)血清和生長(zhǎng)因子培養(yǎng)基中培養(yǎng)，取5×104個(gè)細(xì)胞置于下室，中間以聚碳酸酯膜隔開(kāi)，37℃24h；測(cè)定490nm波長(zhǎng)處光密度值（optical density，OD），試劑盒購(gòu)置于艾美捷科技有限公司，貨號(hào)K300-500；細(xì)胞活力（%）＝（OD 實(shí)驗(yàn)組-OD 空白組）/（OD 對(duì)照組-OD空白組）×100%。

掃描電子顯微鏡（scanning electron microscope，SEM）檢查:將試件安裝在鋁制短管上，金噴鍍，臺(tái)式掃描電子顯微鏡（×2500）觀察根管表面及牙本質(zhì)小管開(kāi)口情況。

采用SPSS20.0 軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料用（）表示，多組比較采用單因素方差分析，兩兩比較Snk-q 檢驗(yàn)。P＜0.05 為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

終末沖洗24h 后，陰性對(duì)照組、0.9%NaCl 組和37%PA 組TGF-β1 釋放量比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；17%EDTA 組、10%CA 組、10%PA 組TGF-β1 釋放量大于陰性對(duì)照組、0.9%NaCl 組和37%PA 組（P＜0.05）；10%CA 組TGF-β1 釋放量大于17%EDTA 組和10%PA 組（P＜0.05），見(jiàn)表1。

0.9%NaCl、17%EDTA、10%CA、10%PA 和37%PA 沖洗根管后，SCAP 細(xì)胞活力與未處理的牙本質(zhì)無(wú)顯著差異（P＞0.05）；17%EDTA 組和10%CA 組SCAP 細(xì)胞活力高于37%PA 組（P＜0.05），圖1。

表1 不同終末沖洗方案TGF-β1 向根管間隙釋放量比較（pg/mL，）

表1 不同終末沖洗方案TGF-β1 向根管間隙釋放量比較（pg/mL，）

與陰性對(duì)照組比較，aP＜0.05；與0.9%NaCl 組比較，bP＜0.05；與17%EDTA組比較，cP＜0.05；與10%CA 組比較，dP＜0.05；與10%PA 組比較，eP＜0.05

組別陰性對(duì)照組0.9%NaCl 組17%EDTA 組10%CA 組10%PA 組37%PA 組例數(shù)20 20 20 20 20 20 F P TGF-β1 42.13±12.58 45.36±13.42 246.37±18.47ab 512.34±20.25abc 225.15±18.64abcd 46.78±15.34cd 2461.748＜0.01

圖1 不同殘留沖洗液對(duì)SCAP 細(xì)胞的毒性作用（MTS 法）

圖2 不同終末沖洗方案根管表面SEM 圖像（×2500）

與0.9%NaCl 組比較，17%EDTA、10%CA、10%PA 和37%PA 沖洗后根管表面均存在少量玷污層。17%EDTA 組牙本質(zhì)小管部分開(kāi)口，有未完全去除的玷污層和堵塞物，而10%CA 組牙本質(zhì)小管完全開(kāi)放，無(wú)玷污層堵塞，圖2。

討 論

根管治療可有效控制和消除感染，緩解根尖組織炎癥反應(yīng)，但治療后患牙不具有免疫和形成繼發(fā)性牙本質(zhì)基質(zhì)等功能，增加牙體斷裂風(fēng)險(xiǎn)[5]。牙髓再血管化可在根管預(yù)備后，充分消毒根管，使壞死牙髓組織成為無(wú)菌基質(zhì)，刺激根尖周組織出血，由血凝塊提供干細(xì)胞、支架和生長(zhǎng)因子，促進(jìn)管腔內(nèi)牙髓樣組織形成和牙根再發(fā)育[6]。TGF-β1 在促進(jìn)牙髓干細(xì)胞增殖和體外成牙本質(zhì)分化中起著重要作用[7]。有文獻(xiàn)報(bào)道，EDTA 預(yù)處理前用氯己定灌水可增加TGF-β1 釋放[3]?？咕鷦⒚撯}劑、組合成分、天然藥物為常用根管沖洗液。NaOCl 具有高效殺菌和溶解有機(jī)組織作用，1%NaOCl 可有效減少根管內(nèi)糞腸球菌感染，但其在溶解牙髓軟組織的同時(shí)，可破壞根管壁牙本質(zhì)基質(zhì)[8]。EDTA 可與羥磷灰石中Ca2+結(jié)合形成絡(luò)合物，溶解無(wú)機(jī)成分。研究證實(shí)，EDTA 可有效提取牙本質(zhì)基質(zhì)中TGF-β1[9]。另有研究發(fā)現(xiàn)，NaOCl+17%EDTA 沖洗組合可有效去除根管玷污層，開(kāi)放牙本質(zhì)小管，阻止微生物再定植[10]。檸檬酸（citric acid，CA）可與Ca2+螯合形成可溶性絡(luò)合物，有效去除根管壁有機(jī)玷污層[11]。研究表明，同一溫度下，NaOCl+MTAD 清除根管玷污層能力優(yōu)于NaOCl+EDTA[12]。Prado M 等[13]研究發(fā)現(xiàn)，37%PA 抗菌活性與2%氯已定和5.25% NaOCl 相似，但細(xì)胞毒性高于17% EDTA 和10% CA。

本研究中，TGF-β1 釋放量上，10% PA、10%CA 和17% EDTA 強(qiáng)于其他終末沖洗方案，其中10% CA 方案顯示出更大優(yōu)勢(shì)，提示10% CA 在促進(jìn)牙本質(zhì)基質(zhì)釋放TGF-β1 效果上優(yōu)于其他沖洗方案，結(jié)果中10%CA 表現(xiàn)出較突出的促TGF-β1釋放作用與Galler 等[3]研究結(jié)果不一致，原因可能為牙本質(zhì)片取材部位和TGF-β1 收集方法不同。與未處理牙本質(zhì)比較，不同沖洗液沖洗根管后，SCAP 細(xì)胞活力無(wú)顯著差異，提示本研究中的終末沖洗液均未對(duì)SCAP 細(xì)胞產(chǎn)生明顯毒性作用。與37% PA 比較，17% EDTA 和10% CA 表現(xiàn)出更小細(xì)胞毒性，與Prado 等[13]研究結(jié)果一致。根管壁玷污層可抑制牙髓干細(xì)胞植入粘附，阻止生長(zhǎng)因子釋放，降低再生牙髓治療成功率[14]。本研究發(fā)現(xiàn)，與0.9% NaCl 組比較，17% EDTA、10% CA、10% PA 和37% PA 沖洗后根管表面存在少量玷污層，但10% CA 去污效果可能優(yōu)于17% EDTA。