胡國(guó)芹，呂欽諭，趙 靜，朱明環(huán)，禹順英，易正輝#，陳 健#

1.上海市黃浦區(qū)精神衛(wèi)生中心精神科，上海200011；2.上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬精神衛(wèi)生中心精神科，上海200030；3.上海市浦東新區(qū)精神衛(wèi)生中心精神科，上海200122

精神分裂癥是一種常見(jiàn)的嚴(yán)重慢性精神疾病，患病率約1%［1］。研究者們對(duì)精神分裂癥的具體病因和潛在的病理生理機(jī)制仍然知之甚少。18 歲之前起病的患者，被定義為早發(fā)性精神分裂癥（early onset schizophrenia，EOS），較晚發(fā)精神分裂癥患者具有更多的遺傳學(xué)基礎(chǔ)［2］。精神分裂癥患者發(fā)病年齡越早，其親屬患精神分裂癥的比例越高［3］。

來(lái)自不同種族人群的大樣本關(guān)聯(lián)研究［4］表明，位于1 號(hào)染色體的一氧化氮合成酶1 接頭蛋白（nitric oxide synthase 1 adaptor protein，NOS1AP）基因是與精神分裂癥顯著相關(guān)的基因之一。諸多研究者在精神分裂癥尸腦組織中發(fā)現(xiàn)不同腦區(qū)NOS1AP 蛋白表達(dá)水平發(fā)生變化［5］。3 種NOS1AP 蛋 白 亞 型（NOS1AP-L、 NOS1AP-S、NOS1AP-S'）在精神分裂癥患者尸腦組織的背外側(cè)前額葉區(qū)域表達(dá)升高，在小腦區(qū)域表達(dá)降低［6］。但是關(guān)于NOS1AP 基因變異如何影響蛋白表達(dá)的病理機(jī)制研究較少。課題組前期關(guān)于EOS 核心家系的研究［7］發(fā)現(xiàn)，NOS1AP 基因rs12742393 位點(diǎn)與EOS 存在顯著相關(guān)趨勢(shì)，且通過(guò)病例-對(duì)照研究發(fā)現(xiàn)精神分裂癥和正常對(duì)照相比，外周血NOS1AP mRNA 和蛋白表達(dá)明顯增加。本研究擬在中國(guó)漢族人群中進(jìn)一步擴(kuò)大樣本研究NOS1AP 基因與精神分裂癥的相關(guān)性，并且通過(guò)在線預(yù)測(cè)軟件進(jìn)一步探討rs12742393位點(diǎn)變異對(duì)RNA和蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)的影響。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

選擇2012年10月—2015年12月期間上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬精神衛(wèi)生中心收治的精神分裂癥住院或門診患者，以及同一時(shí)期在上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬精神衛(wèi)生中心的職工和復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院青浦分院體檢中心的受檢者中招募的健康志愿者作為研究對(duì)象，分為EOS組、非早發(fā)性精神分裂癥（non-early onset schizophrenia，non-EOS）組和正常對(duì)照（health control，HC）組。

EOS 組納入標(biāo)準(zhǔn)：①漢族，年齡18～65 歲，性別不限。②符合美國(guó)《精神障礙診斷與統(tǒng)計(jì)手冊(cè)》（第4 版）（Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders，4th edition，DSM-Ⅳ）精神分裂癥的診斷標(biāo)準(zhǔn)。③首次確診精神分裂癥的年齡≤18歲。④受教育背景及文化足以理解研究?jī)?nèi)容和知情同意書。EOS組排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并符合DSM-Ⅳ其他診斷的精神疾病。②合并中樞神經(jīng)系統(tǒng)器質(zhì)性疾病、糖尿病等重大軀體疾病者。non-EOS 組納入標(biāo)準(zhǔn)：首次確診精神分裂癥的年齡＞18歲，其他納入標(biāo)準(zhǔn)同EOS組。non-EOS組排除標(biāo)準(zhǔn)同EOS組。HC組納入標(biāo)準(zhǔn)：①年齡18～65歲。②性別不限。③漢族。HC組排除標(biāo)準(zhǔn)：①符合DSM-Ⅳ中任何精神疾病。②嚴(yán)重腦器質(zhì)性疾病或軀體疾病。③精神活性物質(zhì)使用者。④妊娠期及產(chǎn)后1年女性。3組研究對(duì)象之間無(wú)血緣關(guān)系。研究得到上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬精神衛(wèi)生中心倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)（批件號(hào)2012-26R）。所有研究對(duì)象均簽署書面的知情同意書，對(duì)于精神分裂癥患者，其監(jiān)護(hù)人同時(shí)簽署知情同意書。

1.2 研究方法

1.2.1 診斷工具 入組時(shí)至少由2 名副高級(jí)職稱以上的精神科醫(yī)師采用DSM-Ⅳ診斷標(biāo)準(zhǔn)對(duì)精神癥狀進(jìn)行評(píng)定。

1.2.2 DNA 提取 采集各組研究對(duì)象靜脈血各2 mL，2%乙二胺四乙酸抗凝。采用1 mL 血液基因組DNA 小量提取試劑盒（北京天根生物科技有限公司）提取DNA，測(cè)量DNA濃度。提取好的DNA保存于-80 ℃冰箱備用。

1.2.3 多態(tài)性位點(diǎn)的選擇 在人類基因組序列第37 版（http：//grch37.ensembl.org/Homo_sapiens/Info/Index）下載NOS1AP基因染色體位置信息，將位置信息輸入到千人基因 組 數(shù) 據(jù)（http：//www.internationalgenome.org/vcf-pedconverter#online-version）中進(jìn)行轉(zhuǎn)換；選擇中國(guó)北京漢族（Chinese Han origin in Beijing，CHB）人群，chr11：2763301～27699871， 導(dǎo) 出ped 和info 文 件， 導(dǎo) 入Haploview 4.2 單倍型分析軟件，以相對(duì)連鎖不平衡系數(shù)r2＞0.8、次等位基因頻率＞20%為標(biāo)準(zhǔn)選擇標(biāo)簽多態(tài)性位點(diǎn)。結(jié)合既往文獻(xiàn)研究結(jié)果進(jìn)一步進(jìn)行篩選，最終選擇NOS1AP 基 因 非 編 碼 區(qū) 的rs12742393、 rs4145621、rs1415263位點(diǎn)（圖1）。

圖1 NOS1AP基因中多態(tài)性位點(diǎn)Fig 1 Location of polymorphism loci in NOS1AP gene

1.2.4 等位基因和基因型檢測(cè)及頻率分析 采用美國(guó)Applied Biosystems TaqMan 檢測(cè)試劑盒對(duì)NOS1AP 基因rs12742393、rs4145621 和rs1415263 位點(diǎn)進(jìn)行分型。通過(guò)SHEsis在線軟件［8］對(duì)EOS組、non-EOS組和HC組3個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)進(jìn)行哈迪-溫伯格（Hardy-Weinberg，H-W）平衡檢驗(yàn)以及等位基因和基因型頻率分析。確定等位基因和基因型頻率分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的多態(tài)性位點(diǎn)（陽(yáng)性位點(diǎn)）。

1.2.5 遺傳模型的分析 利用SNPstats 在線工具進(jìn)行最優(yōu)遺傳模型的分析，采用似然比檢驗(yàn)（likelihood ratio test，LRT）評(píng)估不同模型間的擬合優(yōu)度。利用SNPstats在線網(wǎng)站將相對(duì)復(fù)雜的模型（顯性、隱性、超顯性遺傳模型）與一個(gè)簡(jiǎn)單的模型（共顯性模型）進(jìn)行比較，根據(jù)P＜0.05 的情況下阿凱克信息準(zhǔn)則（Akaike information criteria，AIC）值進(jìn)行最優(yōu)遺傳模型判斷；AIC 值越小，模型越精確，可視為最優(yōu)遺傳模型。

1.2.6 陽(yáng)性位點(diǎn)變異引起編碼RNA 和蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)變化的預(yù)測(cè) 采用RNAfold 在線軟件預(yù)測(cè)陽(yáng)性位點(diǎn)變異對(duì)NOS1AP基因的初級(jí)轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物二級(jí)結(jié)構(gòu)的影響，分別對(duì)不同等位基因的RNA 空間結(jié)構(gòu)進(jìn)行模擬和比對(duì)及自由能計(jì)算。利用DNAstar軟件預(yù)測(cè)蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)，主要對(duì)α螺旋、β 折疊、β 轉(zhuǎn)角、無(wú)規(guī)卷曲所占比例進(jìn)行預(yù)測(cè)。由于NOS1AP蛋白與免疫功能相關(guān)，為進(jìn)一步探究NOS1AP基因的功能，利用軟件預(yù)測(cè)的方法來(lái)研究NOS1AP 基因多態(tài)性對(duì)T 細(xì)胞抗原表位的影響。細(xì)胞毒性T 淋巴細(xì)胞（cytotoxic T lymphocyte，CTL）抗原表位通過(guò)CTLpred在線軟件預(yù)測(cè)，輔助T 細(xì)胞（helper T cell，Th）表位利用ProPred在線軟件預(yù)測(cè)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。定量資料以x±s表示，組間比較采用單因素方差分析；定性資料以n（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。等位基因和基因型頻率分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的進(jìn)一步采用Bonferroni 法進(jìn)行校正。納入樣本的統(tǒng)計(jì)效能通過(guò)Quanto 1.2.4 軟件計(jì)算，本研究統(tǒng)計(jì)效能＞0.8。P＜0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般人口學(xué)資料

研究共入組333 例EOS 患者、491 例non-EOS 患者和901 例HC 樣本。各組對(duì)象性別和年齡的分布均符合正態(tài)分布，統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果顯示3 組對(duì)象的性別和年齡均匹配（P＞0.05，表1）。

表1 EOS組、non-EOS組與HC組一般人口學(xué)資料的比較Tab 1 Comparison of general demographic data among EOS group，non-EOS group and HC group

2.2 H-W平衡檢驗(yàn)

使用SHEsis在線軟件對(duì)EOS組、non-EOS組和HC組的3 個(gè)位點(diǎn)基因型頻率分布進(jìn)行H-W 平衡檢驗(yàn)，結(jié)果顯示EOS 組、non-EOS 組和HC 組3 個(gè)位點(diǎn)基因型頻率分布均符合H-W 平衡檢驗(yàn)（P＞0.05），故將3 個(gè)位點(diǎn)的基因型和等位基因數(shù)據(jù)納入后續(xù)分析。

2.3 NOS1AP基因型和等位基因頻率分布的比較

使用SHEsis在線軟件對(duì)符合H-W平衡的3個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)的等位基因和基因型頻率進(jìn)行病例-對(duì)照關(guān)聯(lián)分析。結(jié)果顯示：EOS 組與HC 組rs12742393 位點(diǎn)等位基因及基因型頻率分布差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=8.22，df=1，P=0.004；χ2=8.66，df=2，P=0.013）；EOS 組與non-EOS 組，non-EOS 組與HC 組3 個(gè)位點(diǎn)等位基因及基因型頻率分布差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）。詳見(jiàn)表2～4。經(jīng)Bonferroni校正后，EOS 組與HC 組rs12742393 位點(diǎn)等位基因及基因型頻率分布差異仍有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=8.22，df=1，P=0.012；χ2=8.66，df=2，P=0.039），說(shuō) 明NOS1AP 基 因rs12742393位點(diǎn)與EOS的發(fā)病顯著相關(guān)。

表2 EOS組、non-EOS組和HC組rs12742393位點(diǎn)等位基因和基因型的頻率分布Tab 2 Frequency distribution of alleles and genotypes of rs12742393 in EOS group，non-EOS group and HC group

表3 EOS組、non-EOS組和HC組rs4145621位點(diǎn)等位基因和基因型的頻率分布Tab 3 Frequency distribution of alleles and genotypes of rs4145621 in EOS group，non-EOS group and HC group

表4 EOS組、non-EOS組和HC組rs1415263位點(diǎn)等位基因和基因型的頻率分布Tab 4 Frequency distribution of alleles and genotypes of rs1415263 in EOS group，non-EOS group and HC group

2.4 最優(yōu)遺傳模型的預(yù)測(cè)

分析rs12742393位點(diǎn)在顯性、隱性、超顯性和共顯性4 個(gè)不同遺傳模型下所得的P 值和AIC 值，結(jié)果發(fā)現(xiàn)共顯性和顯性遺傳模型AIC 值最小，其值為1 290.10，但是同等情況下顯性遺傳模型P 值為0.004，共顯性遺傳模型P值為0.014，說(shuō)明顯性遺傳模型為最優(yōu)遺傳模型（表5）。

表5 rs12742393位點(diǎn)最優(yōu)遺傳模型的預(yù)測(cè)Tab 5 Prediction of rs12742393 locus optimal genetic model

2.5 NOS1AP基因編碼RNA和蛋白質(zhì)的二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)

利用RNAfold在線軟件對(duì)NOS1AP基因的初級(jí)轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物二級(jí)結(jié)構(gòu)進(jìn)行預(yù)測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)NOS1AP基因rs12742393位點(diǎn)為C 堿基（RNA 上為G）時(shí)，較A 堿基（RNA 上為U）具有更大的自由能，同時(shí)在多態(tài)性位點(diǎn)附近的空間結(jié)構(gòu)也發(fā)生一些改變，包括位點(diǎn)在內(nèi)的環(huán)狀結(jié)構(gòu)由1個(gè)小環(huán)變成了1個(gè)大環(huán)，下游的2個(gè)大環(huán)變成了2個(gè)小環(huán)（圖2）。表明野生型與突變型RNA 二級(jí)結(jié)構(gòu)明顯不同，突變型所需自由能更大，更不穩(wěn)定。因此rs12742393位點(diǎn)C危險(xiǎn)等位基因會(huì)影響NOS1AP基因RNA二級(jí)結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性。

圖2 RNAfold在線軟件對(duì)NOS1AP基因編碼RNA二級(jí)結(jié)構(gòu)的預(yù)測(cè)示意圖Fig 2 Schematic diagram of the secondary structure of RNA of NOS1AP gene predicted by RNAfold online software

NOS1AP 蛋白、主要組織相容性復(fù)合體（major histocompatibility complex，MHC）-Ⅰ復(fù)合物和MHC-Ⅱ復(fù)合物在中樞神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)元生長(zhǎng)和發(fā)育中發(fā)揮重要作用。NOS1AP 蛋白對(duì)于MHC 分子結(jié)合配體發(fā)揮重要銜接作用。蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)軟件發(fā)現(xiàn)rs12742393位點(diǎn)為A堿基時(shí)，其編碼的MHC-Ⅰ復(fù)合物和MHC-Ⅱ復(fù)合物配體結(jié)合區(qū)域α1 結(jié)合NOS1AP 蛋白第50 位氨基酸為色氨酸；當(dāng)為C 堿基時(shí)，MHC-Ⅰ復(fù)合物和MHC-Ⅱ復(fù)合物配體結(jié)合區(qū)域α1 結(jié)合NOS1AP 蛋白第50 位氨基酸為丙氨酸（表6）。氨基酸的不同可能會(huì)影響MHC 復(fù)合物與受體結(jié)合的親和力。二級(jí)結(jié)構(gòu)空間構(gòu)象的組成比例：A 堿基時(shí)，α螺旋17.02%，β折疊28.72%，β轉(zhuǎn)角88.51%，無(wú)規(guī)卷曲45.74%；C 堿基時(shí)，α 螺旋15.96%，β 折疊30.85%，β 轉(zhuǎn)角8.51%，無(wú)規(guī)卷曲44.68%。蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)的空間構(gòu)象主要依靠α 螺旋的氫鍵的作用力。當(dāng)NOS1AP 基因rs12742393 位點(diǎn)為C 堿基時(shí)，α 螺旋比例下降，從而導(dǎo)致蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性下降。因此，軟件預(yù)測(cè)發(fā)現(xiàn)NOS1AP 位點(diǎn)多態(tài)性會(huì)影響其RNA 和蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性以及MHC復(fù)合物與配體結(jié)合的親和力。

表6 DNAstar在線軟件對(duì)NOS1AP基因翻譯的氨基酸序列的預(yù)測(cè)Tab 6 Translated amino acid sequence of NOS1AP gene predicted by DNAstar online software

3 討論

NOS1AP 基因位于1 號(hào)染色體，包含10 個(gè)外顯子［9］。既往研究［10］發(fā)現(xiàn)精神分裂癥在神經(jīng)發(fā)育過(guò)程中存在各種障礙，包括樹(shù)突分支的變化、樹(shù)突回縮或缺失、棘的數(shù)量或形態(tài)的變化。而NOS1AP 蛋白對(duì)神經(jīng)元發(fā)育過(guò)程中樹(shù)突的生長(zhǎng)和棘的發(fā)育起著重要的作用［11］。因此，NOS1AP基因多態(tài)性與精神分裂癥的關(guān)聯(lián)研究值得關(guān)注。

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)EOS 組和HC 組之間NOS1AP 基因rs12742393 位點(diǎn)的等位基因和基因型頻率分布存在差異，表明NOS1AP 基因rs12742393 位點(diǎn)與EOS 存在顯著關(guān)聯(lián)，但是與non-EOS關(guān)聯(lián)性不明顯；而rs4145621和rs1415263位點(diǎn)與EOS 和non-EOS 的發(fā)病均無(wú)顯著關(guān)聯(lián)。同時(shí)SNPstats在線軟件分析發(fā)現(xiàn)rs12742393位點(diǎn)最優(yōu)遺傳模型為顯性遺傳模型，說(shuō)明A/A 基因型患者較A/C、C/C 基因型患者EOS 發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)降低（OR=0.67，95%CI=0.51～0.87）。本研究與國(guó)內(nèi)外諸多研究結(jié)果存在異同。Wratten等［12］的研究納入24 個(gè)歐裔加拿大精神分裂癥家系，檢測(cè)NOS1AP 基因60 個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)與精神分裂癥的連鎖不平衡的后驗(yàn)概率 （posterior probability of linkage disequilibrium，PPLD），結(jié)果發(fā)現(xiàn)3 個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)PPLD＞40% （rs12742393 為 41.90%， rs4145621 為 44.50%，rs1415263 為49.70%）。Ramirez 等［13］在22 個(gè)凱爾特人和1 個(gè)德國(guó)人中進(jìn)行NOS1AP 基因與精神分裂癥的關(guān)聯(lián)研究，發(fā)現(xiàn)rs12742393 位點(diǎn)及另外4 個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)（rs4557949、rs11584803、rs4145621、rs12084492）的單倍型的連鎖不平衡與精神分裂癥的發(fā)病顯著相關(guān)。Brzustowicz 等［14］在24 個(gè)加拿大家族精神分裂癥家系樣本中檢查了1q22 染色體最強(qiáng)連鎖的區(qū)域，以尋找連鎖不平衡的證據(jù)。該研究通過(guò)D1S1653 和D1S1677 之間5.4 Mbp 區(qū)域的14 個(gè)微衛(wèi)星和15 個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)與精神分裂癥的關(guān)聯(lián)分析，發(fā)現(xiàn)精神分裂癥與2 個(gè)微衛(wèi)星和6 個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)之間存在連鎖不平衡（P＜0.05）；與精神分裂癥具有顯著連鎖不平衡的多態(tài)性位點(diǎn)均屬于NOS1AP 基因，使NOS1AP 基因成為1q22 上與精神分裂癥易感性顯著相關(guān)的基因，但未發(fā)現(xiàn)任何精神分裂癥相關(guān)變異存在于NOS1AP 基因外顯子，均存在于非編碼區(qū)。Puri 等［15］選擇英國(guó)450 例精神分裂癥和450 例對(duì)照樣本檢測(cè)NOS1AP基因與精神分裂癥的相關(guān)性，結(jié)果沒(méi)有發(fā)現(xiàn)與精神分裂癥相關(guān)的等位基因或單倍型的證據(jù)。分析Puri等［15］的研究與國(guó)內(nèi)外其他研究的不同，原因可能為：①不同種族的人群等位基因的頻率存在差異。rs12742393 A等位基因的頻率在高加索地區(qū)的人群中約為40%，在亞洲人群中約為70%，而在非洲人群中約為80%［16］。rs1415263、rs4145621位點(diǎn)在不同種族的人群中頻率也存在顯著差異。②精神分裂癥可能是多基因遺傳性疾病，單個(gè)基因的作用比較微弱，多個(gè)基因的微效作用共同作用導(dǎo)致疾病的發(fā)生［17］。

通過(guò)二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)軟件發(fā)現(xiàn)，rs12742393位點(diǎn)的多態(tài)性可能影響NOS1AP 基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物二級(jí)結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性。蛋白質(zhì)軟件預(yù)測(cè)發(fā)現(xiàn)rs12742393 位點(diǎn)堿基變異會(huì)改變氨基酸序列，可能導(dǎo)致蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性或MHC 復(fù)合物配體與受體結(jié)合的親和力受到影響。經(jīng)預(yù)測(cè)，NOS1AP基因上的rs12742393位點(diǎn)多態(tài)性可能會(huì)影響轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物序列和蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)的空間穩(wěn)定性，進(jìn)而影響基因的表達(dá)。本研究與國(guó)外某項(xiàng)研究有共同之處。Wratten等［12］用包含每個(gè)NOS1AP 多態(tài)性位點(diǎn)的等位基因變異體、NOS1AP 啟動(dòng)子的熒光素酶報(bào)告基因載體轉(zhuǎn)染2 種人類神經(jīng)細(xì)胞系（SK-N-MC 和PFSK-1），結(jié)果發(fā)現(xiàn)在2 種細(xì)胞中攜帶rs12742393 A 等位基因的質(zhì)粒表達(dá)水平顯著高于攜帶C 等位基因的質(zhì)粒表達(dá)水平，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。該多態(tài)性位點(diǎn)等位基因的變異改變了核蛋白結(jié)合區(qū)域的DNA，從而改變了轉(zhuǎn)錄因子與其結(jié)合區(qū)域的親和力，進(jìn)而影響蛋白的表達(dá)水平。細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)也證明，轉(zhuǎn)錄因子與其結(jié)合區(qū)域的親和力改變會(huì)影響基因的表達(dá)水平。

綜上所述，本研究支持NOS1AP 基因作為漢族人群EOS 的易感基因，且rs12742393 位點(diǎn)多態(tài)性可能會(huì)影響轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物和蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性。然而研究仍存在一些局限性：①未包括NOS1AP 基因所有標(biāo)簽多態(tài)性位點(diǎn)，在今后的研究中可適當(dāng)增加位點(diǎn)，在漢族人群中更加全面地評(píng)估NOS1AP 基因與精神分裂癥的相關(guān)性。②僅采用二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)軟件來(lái)分析rs12742393 位點(diǎn)變異對(duì)轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物和蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)的影響，未來(lái)需繼續(xù)深入開(kāi)展細(xì)胞學(xué)或動(dòng)物學(xué)研究以驗(yàn)證預(yù)測(cè)結(jié)果，并進(jìn)一步探索NOS1AP基因及其轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物在精神分裂癥發(fā)生過(guò)程中的病理生理機(jī)制。