郭鵬波 王彥紅 章波 張小慢

急性呼吸道感染是全世界嬰幼兒發(fā)病和死亡的重要病因，約有30%的病例是由病毒引起[1]。在我國兒科門診中，急性呼吸系統(tǒng)病毒感染性疾病占大部分[2]。此外，肺炎支原體感染和肺炎衣原體感染在臨床表現(xiàn)上與病毒感染相似，均可導致發(fā)熱、咳嗽、乏力、頭痛、打噴嚏、流鼻涕等臨床癥狀，臨床醫(yī)生很難鑒別，因其病原體的特殊性，治療上與病毒存在很大不同，不予區(qū)分的治療就會耽誤病情。因此，明確鑒別病原體具有重要意義，可以協(xié)助醫(yī)生選擇特異性藥物，提高治療的針對性和時效性。呼吸道病原體的流行有一定的地域、季節(jié)、年齡分布特點。本研究還可以幫助相關人員了解鄭州地區(qū)急性呼吸道感染患兒病原體流行情況，為臨床診治和疾病預防控制提供參考。

資料與方法

一、研究對象

2019年3月-2020年2月鄭州兒童醫(yī)院急性呼吸道感染住院患兒共11299 例，其中男孩6638例，女孩4661例，0～3(不含)歲6306例，3～6歲3231例，6歲以上1762例。急性呼吸道感染診斷標準參考《諸福堂實用兒科學(第8版)》[3]。

二、標本采集與檢測

采集患兒咽部分泌物、痰液或肺泡灌洗液，置于VTM運送培養(yǎng)基(青島海博生物技術有限公司)內(nèi)，立即送到實驗室，4℃保存，并于兩天內(nèi)檢測。采用臺灣圓點公司的TANBead核酸提取試劑盒提取總核酸，基于毛細管電泳的多重PCR法檢測12種呼吸道病原體，包括甲型流感病毒H1N1(以下簡稱H1N1)、甲型流感病毒H3N2(以下簡稱H3N2)、乙型流感病毒(InfB)、腺病毒(HADV)、博卡病毒(Boca)、鼻病毒(HRV)、副流感病毒(HPIV)、肺炎衣原體(Ch)、偏肺病毒(HMPV)、肺炎支原體(MP)、冠狀病毒(HCOV)和呼吸道合胞病毒(HRSV)。該試劑盒購自寧波海爾施基因科技有限公司，具體操作按照試劑盒操作要求。

三、統(tǒng)計方法

采用SPSS19.0軟件進行分析。計數(shù)資料用例數(shù)和百分率(% ) 表示，兩組間差異比較采用卡方檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

結 果

一、核酸檢測結果

鄭州兒童醫(yī)院急性呼吸道感染住院患兒標本11299份，檢測結果陽性8742例，總體陽性率為77.37%[95%Cl：(0.7660,0.7814)]，其中，單純感染6943例(79.42%)，混合感染1799例(20.58%)。陽性標本中HRV陽性的標本最多，2859份，陽性率25.3%；其次為MP，2047份，陽性率18.12%；其他依次為HRSV，15.78%(1783/11299)；H3N2，9.05%(1023/11299)；HADV，8.66%(978/11299)；HPIV，7.22%(816/11299)；InfB，3.27%(370/11299)；HMPV，3.27%(369/11299)；Boca，2.02%(228/11299)；HCOV，1.95%(220/11299)；Ch，0.41%(46/11299)；H1N1，0.11%(13/11299)。陽性標本的病原體構成百分比(見圖1)所示。

圖1 陽性標本的病原體構成百分比

二、不同性別患兒病原體檢出情況

僅HRV和MP的陽性檢出率有統(tǒng)計學意義，其他的病原體陽性檢出率無明顯差異(見表1)。

表1 鄭州地區(qū)不同性別患兒病原體檢查陽性例數(shù)[n(%)]

三、不同年齡段患兒的病原體檢出情況

依據(jù)就學階段，將急性呼吸道感染患兒分為三組，0～3(不含)歲組、3～6歲組、大于6歲組。0～3(不含)歲組患兒病原體檢出率前4位的是:HRSV、HRV、HPIV、MP。0～3(不含)歲組患兒HRSV陽性檢出率明顯高于其他年齡組，差異有統(tǒng)計學意義(χ2=565.9，P<0.05)。3～6歲組患兒病原體檢出率前4位的是:HRV、MP、HADV、H3N2。大于6歲組患兒病原體檢出率前4位的是: MP、H3N2 、HRV、 HADV。大于6歲組MP陽性檢出率明顯高于其他年齡組，差異有統(tǒng)計學意義(χ2=1105.5，P<0.05)(見表2)。

表2 鄭州地區(qū)不同年齡段兒童的陽性例數(shù)[n(%)]

四、12種病原體的感染時間分布

H3N2、HRSV全年散發(fā)，冬季為高發(fā)季節(jié)。MP主要在秋季高發(fā)。HADV、HPIV、HRV、HCOV全年都有發(fā)生，夏季檢出率明顯高于其他季節(jié)。InfB全年可有發(fā)生，高發(fā)季節(jié)為冬春季。HMPV、Ch、H1N1、Boca全年散發(fā)，無明顯季節(jié)性差異。(見圖2)。

圖2 陽性檢出率時間分布圖

討 論

本研究以引發(fā)兒童急性呼吸道感染的12種呼吸道病原體為檢測對象，以病原體中的高度保守序列為靶區(qū)域，同時加入多種引物進行RNA/DNA擴增；采用毛細管電泳方法對不同片段大小的擴增產(chǎn)物進行分離，得到檢測結果；同時檢測樣品中的人RNA和人DNA作為內(nèi)參，可以在試驗中檢測標本質量，保證檢測結果的有效性；本檢測含逆轉錄PCR內(nèi)參，用于核酸提取、擴增和毛細管電泳等所有試驗流程，可以對整個流程進行監(jiān)控，便于查找檢測失敗的原因。整個檢測過程耗時短、機械化程度高，4 h之內(nèi)就可以完成 8個樣本的檢測，人為操作時間不超過半小時。

不同地區(qū)急性呼吸道感染兒童非細菌性病原體總陽性率有一定差異。鄭州地區(qū)2019年3月-2020年2月急性呼吸道感染住院兒童非細菌性病原體總陽性率為77.37%，高于長春地區(qū)2017年1月-2018年2月的總陽性率62.82%[4]。中國疾病預防控制中心的監(jiān)測資料顯示大陸的流感流行模式主要有兩種，南方地區(qū)主要在夏季流行，北方地區(qū)則在冬季流行[5]，本研究顯示，H3N2在2019年12月-2020年1月呈現(xiàn)爆發(fā)態(tài)勢，檢測結果的季節(jié)分布特點與北京地區(qū)報道一致[6]。Zhang等[7]報道在全球溫帶地區(qū)，HRSV在寒冷干燥的環(huán)境中致病性最強。 我們的研究中，HRSV在鄭州地區(qū)的陽性率在2019年12月到來年1月達到高峰，與Zhang等[7]、謝菲等[8]報道一致。 兒童HADV感染有明顯的時間分布特點，北方地區(qū)冬春季節(jié)發(fā)病率高，而南方以春夏季高發(fā)[9-11]，本研究顯示HADV全年可發(fā)，夏季的陽性率稍微高于其他季節(jié)，考慮鄭州地處南北方交界處，急性呼吸道感染患兒可來自于南方和北方地區(qū)，所以HADV全年都有發(fā)生，季節(jié)差異相對不明顯。HRV在急性呼吸道感染患兒中陽性率較高，是常見的呼吸道病原體，本研究中HRV的陽性率與流行情況和成都地區(qū)大致相同[12],總體陽性率25.3%,每年夏季高發(fā)，但是鄭州的高發(fā)季稍微提前，可能與鄭州地區(qū)7月平均氣溫較高有關。HCOV的陽性率比劉軍等[13]報道的稍低，具體原因有待探討。HMPV、Ch、Boca、H1N1全年散發(fā)，陽性率與季節(jié)因素關系不大。

鄭州地區(qū)急性呼吸道感染患兒病原體陽性率與性別的相關性總體上不明顯，僅HRV和MP的陽性率在不同性別的分布差異有統(tǒng)計學意義，與蔣華芳等[14]報道的有所不同，具體原因有待探討。

此外，鄭州地區(qū)急性呼吸道感染患兒病原體流行情況與年齡有關。0～3(不含)歲組患兒病原體檢出率前4位的是:HRSV、HRV、HPIV、MP。3～6歲組患兒病原體檢出率前4位的是:HRV、MP、HADV、H3N2。大于6歲組患兒病原體檢出率前4位的是: MP、H3N2 、HRV、 HADV。H3N2在3～6歲患兒和大于6歲患兒中檢出率較高，考慮與外界接觸機會增多，增加感染機會有關。 MP主要通過飛沫傳播，還可通過接觸傳播，全年可發(fā)，夏末秋初為高發(fā)季，患兒以6～15歲兒童居多。本研究中MP的檢出率隨著年齡增長呈現(xiàn)增高趨勢，主要感染6歲以上兒童，與瑞典報道一致[15]。HADV在3～6歲組患兒中檢出率最高，既與北京地區(qū)的報道[16]不同，也與蘇州地區(qū)[10]不同。HMPV、Boca、HCOV的檢出率大體上與患兒年齡呈負相關，隨著年齡增長，感染率呈下降趨勢。可能是由于低齡兒童免疫功能尚未發(fā)育完善，免疫力較低，而隨著年齡增長，免疫功能逐漸發(fā)育完善，免疫力提高，抵御病原體的能力增強。Ch、H1N1的檢出率與患兒年齡的關系不大，差異無統(tǒng)計學意義。

鄭州地區(qū)急性呼吸道感染兒童最常見的病原體是HRV，12種呼吸道病原體的陽性率隨月份變化呈現(xiàn)不同的特點；甲型流感病毒H1N1型和肺炎衣原體(Ch)的陽性率與兒童年齡無關，其他病原體的陽性率與兒童年齡相關。急性呼吸道感染在兒童中發(fā)病率高，并且可重復感染，分析鄭州地區(qū)急性呼吸道感染兒童的病原體流行情況對臨床診療有重要意義，可以幫助臨床醫(yī)生有針對性的采取預防措施、減少檢查項目、開具特異性的抗生素，提高診療效果，縮短診療時間。

本研究尚有不足之處：第一，缺乏急性呼吸道感染住院兒童細菌感染的分析數(shù)據(jù)；第二，所有標本來自同一醫(yī)院，未能理想的反應鄭州地區(qū)急性呼吸道感染住院兒童的病原體流行情況。