曹 森 耿方靜 巴良杰 馬 超 吉 寧 王 瑞 譚國霞

(1貴陽學(xué)院,貴州貴陽 550005;2貴州省果品加工工程技術(shù)研究中心,貴州貴陽 550005)

枇杷(EriobotryajaponicaLindl.)為薔薇科枇杷屬植物,其果實(shí)不僅具有較高的營養(yǎng)價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值,還有止咳潤肺、健胃清熱等保健功效,是我國南方特有的珍稀水果[1-2]。但由于枇杷果皮薄、含水率高,采收期處于高溫多濕的環(huán)境,易出現(xiàn)褐變、長霉、腐爛等現(xiàn)象[3-4],常溫貨架期短,不耐貯藏,阻礙了枇杷產(chǎn)業(yè)的健康可持續(xù)發(fā)展。

目前枇杷保鮮主要采取低溫貯藏復(fù)合化學(xué)保鮮劑處理技術(shù)[5],何志剛等[6]研究貯藏溫度及氣體成分對(duì)枇杷的保鮮效果,發(fā)現(xiàn)6～8℃為枇杷適宜的貯藏溫度。1-甲基環(huán)丙烯(1-methylcyclopropene,1-MCP)作為乙烯受體抑制劑,能夠減少果蔬組織對(duì)乙烯的敏感性,從而推遲果蔬成熟和衰老[7]。由于1-MCP具有高效、安全等優(yōu)點(diǎn),已廣泛應(yīng)用于果蔬采后貯藏的相關(guān)研究[8]。馬佳佳等[9]報(bào)道1-MCP處理減緩了冷藏過程中枇杷營養(yǎng)物質(zhì)的下降速度,延緩了枇杷的褐變及衰老進(jìn)程。但果實(shí)采后病害也會(huì)加速縮短枇杷的貯藏期和貨架期,而目前關(guān)于采后病害抑制的研究較少。60Co放射源產(chǎn)生的γ射線可降低果蔬中的微生物數(shù)量,延緩果實(shí)的代謝速度,從而確保果蔬貯藏品質(zhì),延長果實(shí)貯藏期。目前,已有1-MCP和60Co-γ技術(shù)在果蔬貯藏保鮮中的相關(guān)報(bào)道,且效果顯著[10]。但1-MCP結(jié)合60Co-γ輻照處理對(duì)枇杷果實(shí)貯藏品質(zhì)影響的研究尚鮮見,本研究通過1-MCP結(jié)合60Co-γ輻照對(duì)枇杷進(jìn)行復(fù)合處理,在低溫(6℃)貯藏下,探討復(fù)合處理對(duì)枇杷貯藏保鮮的有效性,以期為枇杷貯藏保鮮提供新的技術(shù)支持和理論參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料與試劑

枇杷(大五星),貴州省開陽縣實(shí)驗(yàn)基地;1-MCP,美國陶氏益農(nóng)公司;PE 20保鮮膜(厚度0.02 mm),國家農(nóng)產(chǎn)品保鮮工程技術(shù)研究中心。

1.2 主要儀器與設(shè)備

精準(zhǔn)控溫保鮮庫(±0.5℃,相對(duì)濕度90%±5%),國家農(nóng)產(chǎn)品保鮮工程技術(shù)研究中心;60Co-γ靜態(tài)輻照源,貴州省農(nóng)科院輻照中心;TA.XT.Plus質(zhì)構(gòu)儀,英國SMS公司;PBIDansensor便攜頂空分析儀,丹麥丹圣公司;GC-14氣相色譜儀,日本島津公司;PAL-1型迷你數(shù)顯折射計(jì),日本ATAGO;pHS-25型數(shù)顯酸度計(jì),上海虹益儀器儀表有限公司;TGL-16A臺(tái)式高速冷凍離心機(jī),長沙平凡儀器儀表有限公司;UV-2550紫外分光光度計(jì),日本Shimazhu公司。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 果實(shí)采收與處理 2019年5月24日上午,在貴州省開陽縣實(shí)驗(yàn)基地采收八到九成熟的枇杷用冷鏈車運(yùn)至(20±2℃,運(yùn)輸途中盡可能避免顛簸,運(yùn)輸時(shí)間為90 min)實(shí)驗(yàn)室,挑選無病蟲害、無機(jī)械損傷、顏色一致的枇杷分裝于襯有PE 20保鮮膜的周轉(zhuǎn)筐內(nèi),分裝后的枇杷果實(shí)分4組進(jìn)行不同處理(每組3個(gè)平行,每個(gè)平行120個(gè)果實(shí)):對(duì)照組(CK)、1μL·L-11-MCP熏蒸組、1.5 kGy60Co-γ輻照組、1μL·L-11-MCP熏蒸復(fù)合1.5 kGy60Co-γ輻照組。1-MCP熏蒸溫度20±1℃,熏蒸時(shí)間10 h。1.5 kGy60Co-γ輻照處理用重鉻酸銀劑量計(jì)進(jìn)行劑量跟蹤,實(shí)測(cè)劑量為1.53 kGy。處理結(jié)束后立刻進(jìn)行低溫貯藏,貯藏溫度為6±0.5℃,所有自發(fā)氣調(diào)保鮮膜均為扎口方式。貯藏期間,每隔10 d對(duì)4組枇杷鮮果各指標(biāo)進(jìn)行分析檢測(cè),貯藏時(shí)間40 d。

1.3.2 腐爛指數(shù)測(cè)定 依據(jù)鄭小林等[11]的方法測(cè)定。根據(jù)枇杷表面霉變及腐爛程度共計(jì)5級(jí),其中,0級(jí):無生霉及腐敗;1級(jí):生霉及腐爛面積≤1/4;2級(jí):1/4＜生霉及腐爛面積≤1/2;3級(jí):1/2＜生霉及腐爛面積≤3/4;4級(jí):3/4＜生霉及腐爛面積≤1。按照公式計(jì)算腐爛指數(shù):

1.3.3 木質(zhì)素含量測(cè)定 木質(zhì)素含量根據(jù)Femenia等[12]的方法測(cè)定。

1.3.4 硬度測(cè)定 參照曹森等[13]的方法,采用質(zhì)構(gòu)儀(P/2探頭)對(duì)帶皮枇杷果實(shí)赤道中間位置進(jìn)行測(cè)定,穿刺深度為6 mm,測(cè)前速度為2 mm·s-1,測(cè)中速度為1 mm·s-1,測(cè)后速度為2 mm·s-1。

1.3.5 呼吸強(qiáng)度和乙烯生成速率的測(cè)定 呼吸強(qiáng)度采用靜置法測(cè)定[14]。乙烯生成速率依據(jù)張鵬等[15]的方法測(cè)定。

1.3.6 相對(duì)電導(dǎo)率的測(cè)定 參照周冉冉等[14]的方法,略有改動(dòng)。隨機(jī)取8個(gè)果實(shí),用內(nèi)徑10 mm的打孔器取16個(gè)果肉連皮圓柱。先用去離子水洗滌3次,再加入50 mL蒸餾水震蕩20 min,測(cè)定其電導(dǎo)率;煮沸10 min殺死細(xì)胞后冷卻至室溫,再測(cè)定電導(dǎo)率。按照公式計(jì)算枇杷果實(shí)的相對(duì)電導(dǎo)率:

1.3.7 可滴定酸含量及可溶性固形物含量的測(cè)定可滴定酸 (titratable acid,TA)含量參照GB/T 12456-2008[16]進(jìn)行測(cè)定?？扇苄怨绦挝?total soluble solid,TSS)含量采用折光儀法,用迷你數(shù)顯折射儀進(jìn)行測(cè)定。

1.3.8 苯丙氨酸解氨酶和脂氧合酶活性的測(cè)定 苯丙氨酸解氨酶(phenylalanineammonialyase,PAL)活性參照蘇苗等[17]的方法測(cè)定,脂氧合酶(lipoxygenase,LOX)活性定參照王寶春[18]的方法測(cè)定。

1.3.9 多酚氧化酶和過氧化物酶活性的測(cè)定 多酚氧化酶(polyphenol oxidase,PPO)活性測(cè)定采用鄰苯二酚比色法[19],過氧化物酶(peroxidase,POD)活性采用愈創(chuàng)木酚比色法測(cè)定[19]。

1.4 數(shù)據(jù)分析

采用OriginPro 2017軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析;采用SPSS 19.0 Duncan氏新復(fù)極差法進(jìn)行差異顯著性分析(P＜0.05為差異顯著)。

2 結(jié)果與分析

2.1 枇杷貯藏期腐爛指數(shù)的變化

腐爛指數(shù)的變化能夠直觀反映貯藏期間枇杷的貯藏效果。由圖1可知,整個(gè)貯藏期間,CK組枇杷的腐爛指數(shù)均高于其他組,且1-MCP+60Co-γ組均低于其他處理組。貯藏10 d時(shí),不同組的枇杷腐爛指數(shù)無顯著差異(P＞0.05)。貯藏期20 d時(shí),不同組枇杷的腐爛指數(shù)從小到大依次為1-MCP+60Co-γ組＜60Co-γ組＜1-MCP組＜CK組,貯藏30～40 d時(shí),單獨(dú)使用1-MCP處理的枇杷腐爛指數(shù)低于單獨(dú)使用60Co-γ處理組。在貯藏期40 d時(shí),1-MCP組、60Co-γ組、1-MCP+60Coγ組的腐爛指數(shù)分別為22.86%、25.72%、17.95%,均顯著低于CK組(36.24%,P＜0.05)。因此,1-MCP熏蒸、60Co-γ輻照及二者復(fù)合處理均能夠抑制枇杷貯藏期間腐爛指數(shù)的增加,且復(fù)合處理對(duì)枇杷腐爛指數(shù)的抑制效果最好。貯藏前期,60Co-γ處理效果好于1-MCP處理,可能與60Co-γ處理能夠降低枇杷表面的微生物有關(guān)[20]。貯藏后期1-MCP處理效果反而好于60Co-γ處理,可能是由于1-MCP能夠更好地抑制果實(shí)的衰老進(jìn)程[21]。

2.2 枇杷貯藏期硬度和木質(zhì)素含量的變化

由圖2可知,枇杷在貯藏期間,木質(zhì)素含量和硬度均呈上升趨勢(shì),這與尚艷雙等[22]的研究結(jié)果一致。貯藏10 d時(shí),不同組枇杷果實(shí)的木質(zhì)素含量及硬度均無顯著差異(P＞0.05),可能是由于貯藏時(shí)間短,不同處理組的枇杷果實(shí)衰老程度相差不大。從貯藏10 d開始,CK組的木質(zhì)素含量和硬度均開始快速上升。貯藏30～40 d內(nèi),不同組枇杷的木質(zhì)素含量從小到大依次為1-MCP+60Co-γ組＜1-MCP組＜60Co-γ組＜CK組,此時(shí)不同組枇杷的硬度大小關(guān)系和木質(zhì)素含量一致。貯藏40 d時(shí),1-MCP組、60Co-γ組、1-MCP+60Co-γ組枇杷的木質(zhì)素含量分別為1.87%、2.13%和1.56%,分別比CK組低0.34、0.08、0.65個(gè)百分點(diǎn)。說明1-MCP+60Co-γ組能更好地抑制枇杷木質(zhì)素含量和硬度的上升。有研究表明低溫貯藏能夠降低枇杷腐爛率,但會(huì)導(dǎo)致枇杷果肉木質(zhì)化,口感變差[23],這也可能是貯藏期間枇杷硬度上升的主要原因。所以抑制枇杷木質(zhì)素含量的上升,保持適宜的口感是解決冷藏枇杷果肉木質(zhì)化的關(guān)鍵問題。

2.3 枇杷貯藏期呼吸強(qiáng)度和乙烯生成速率的變化

呼吸強(qiáng)度是反映果實(shí)貯藏效果的重要指標(biāo)。乙烯影響果蔬的呼吸作用,也是調(diào)控果蔬成熟與衰老的關(guān)鍵因子。由圖3可知,枇杷果實(shí)的呼吸強(qiáng)度在貯藏0～20 d時(shí),不同處理間無顯著差異(P＞0.05)。貯藏30～40 d時(shí),CK組枇杷果實(shí)的呼吸強(qiáng)度顯著高于其他處理組(P＜0.05),而其乙烯生成速率與1-MCP組以及60Co-γ組無顯著差異(P＞0.05),1-MCP+60Co-γ組枇杷的乙烯生成速率低于其他處理組。在貯藏30～40 d時(shí),不同組枇杷果實(shí)的呼吸強(qiáng)度和乙烯生成速率從小到大依次為1-MCP+60Co-γ組＜60Co-γ組＜1-MCP組＜CK組。說明輻照處理和1-MCP處理均可以降低枇杷果實(shí)的呼吸強(qiáng)度和乙烯生成速率,這與曹森等[24]研究輻照結(jié)合1-MCP對(duì)藍(lán)莓呼吸強(qiáng)度和乙烯生成速率結(jié)果相一致。比較發(fā)現(xiàn),1-MCP結(jié)合60Co-γ處理對(duì)維持果實(shí)的呼吸強(qiáng)度和乙烯生成速率的作用效果優(yōu)于單獨(dú)60Co-γ或1-MCP處理。

2.4 枇杷貯藏期相對(duì)電導(dǎo)率的變化

由圖4可知,枇杷果實(shí)的相對(duì)電導(dǎo)率在貯藏期間呈上升趨勢(shì),主要是由于隨著枇杷果實(shí)細(xì)胞衰老,膜透性增加,電解質(zhì)外滲[25]。貯藏10～20 d,不同組的枇杷果實(shí)電導(dǎo)率從小到大依次為1-MCP+60Co-γ組＜1-MCP組＜60Co-γ組＜CK組。在貯藏30 d時(shí),1-MCP組、60Co-γ組、1-MCP+60Co-γ組、CK組的枇杷相對(duì)電導(dǎo)率分別為52.31%、49.43%、43.85%和61.24%。貯藏期40 d時(shí),1-MCP組、60Co-γ組和1-MCP+60Co-γ組的枇杷電導(dǎo)率分別比CK組低12.50、14.53、24.42個(gè)百分點(diǎn),且存在顯著差異(P＜0.05),但3個(gè)處理組間無顯著差異(P＞0.05)。因此,不同處理均能夠抑制枇杷果實(shí)相對(duì)電導(dǎo)率的上升,其中1-MCP聯(lián)合60Co-γ處理效果更好。

2.5 枇杷貯藏期TA含量和TSS含量的變化

TA和TSS是構(gòu)成枇杷果實(shí)品質(zhì)的重要物質(zhì)[26]。由圖5可知,枇杷果實(shí)的TA和TSS含量在整個(gè)貯藏期間呈下降趨勢(shì)。在貯藏10 d時(shí),不同組枇杷果實(shí)TA含量和TSS含量均無顯著差異(P＞0.05)。在貯藏20～30 d期間,1-MCP+60Co-γ組及60Co-γ組枇杷果實(shí)的TA含量和TSS含量均高于其他處理組。貯藏30～40 d時(shí),CK組枇杷果實(shí)的TA和TSS含量均低于其他處理組。貯藏40 d時(shí),不同組枇杷果實(shí)的TA含量從低到高依次為CK組＜1-MCP組＜60Co-γ組＜1-MCP+60Co-γ組,而此時(shí)各組枇杷果實(shí)的TSS含量大小關(guān)系與TA含量一致,且CK組TA和TSS含量與60Co-γ組、1-MCP+60Co-γ組均存在顯著差異(P＜0.05),而與1-MCP組無顯著差異(P＞0.05)。從貯藏期開始至貯藏40 d時(shí),1-MCP組、60Co-γ組、1-MCP+60Co-γ組、CK組的枇杷果實(shí)TA含量分別降低0.24、0.20、0.16和0.25個(gè)百分點(diǎn),TSS含量分別降低了1.40、1.22、1.07和1.54個(gè)百分點(diǎn)。由此可見,1-MCP、60Co-γ和1-MCP+60Co-γ處理均可減少枇杷貯藏期間TA和TSS的消耗,其中,1-MCP結(jié)合60Co-γ處理效果更好。

2.6 枇杷貯藏期酶活性的變化

由圖6可知,整個(gè)貯藏期間,枇杷果實(shí)的PAL、LOX、PPO和POD活性總體均呈上升趨勢(shì)。貯藏10 d時(shí),不同處理組枇杷果實(shí)的PAL、LOX及POD活性均無顯著差異(P＞0.05),而CK組枇杷果實(shí)的PPO活性顯著高于其他組(P＜0.05)。貯藏30 d時(shí),不同組枇杷果實(shí)的4種酶活性從低到高依次為1-MCP+60Co-γ組＜1-MCP組＜60Co-γ組＜CK組。貯藏40 d時(shí),1-MCP組、60Co-γ組和1-MCP+60Co-γ組枇杷果實(shí)的PAL活性分別比CK組低11.34%、8.21%和13.03%;LOX活性分別比CK組低3.81%、2.09%、6.03%;PPO活性分別比CK組低4.25%、1.84%、7.96%;POD活性分別比CK組低4.60%、3.35%、6.94%,其中CK組枇杷果實(shí)的PAL活性與其他組間存在顯著差異(P＜0.05);CK組的PPO活性與1-MCP組和1-MCP+60Co-γ組均有顯著差異(P＜0.05),但與60Co-γ組無顯著差異(P＞0.05);而不同組枇杷果實(shí)的LOX活性和POD活性均無顯著差異(P＞0.05)。由此可見,60Co-γ輻照和1-MCP處理均能夠不同程度地抑制枇杷貯藏期酶活性的上升,且在貯藏期后期,單獨(dú)使用1-MCP優(yōu)于單獨(dú)使用輻照處理,二者聯(lián)合使用效果最好。

3 討論

1-MCP作為果蔬保鮮劑,可通過抑制乙烯和受體的結(jié)合與信號(hào)傳導(dǎo),延緩果蔬的生理代謝,從而提高果蔬的貯藏品質(zhì)[7]。Xie等[27]研究表明,1-MCP可以推遲梨果實(shí)在貯藏過程中乙烯合成量和呼吸強(qiáng)度峰值的時(shí)間,并有效降低果實(shí)的乙烯合成量和呼吸強(qiáng)度;馬佳佳等[21]報(bào)道1-MCP處理能夠維持枇杷在冷藏過程中的營養(yǎng)物質(zhì),從而推遲枇杷褐變與其衰老進(jìn)程。本研究結(jié)果表明,單獨(dú)使用1-MCP處理能夠保持枇杷果實(shí)的貯藏品質(zhì),這與前人研究結(jié)果相一致。并且關(guān)于貯藏期枇杷腐爛指數(shù)、木質(zhì)素和硬度的變化,單獨(dú)使用1-MCP優(yōu)于單獨(dú)60Co-γ輻照處理。

枇杷貯藏期間酶活性的變化也可以反映其貯藏效果。PAL與果蔬抗病抗逆有關(guān),影響組織呈色及褐變[28]。LOX在果蔬膜脂氧化過程中起重要作用,影響果蔬的衰老[13]。PPO能催化多酚類氧化成醌類化合物,從而導(dǎo)致果蔬發(fā)生褐變[13]。POD也是影響果實(shí)衰老的重要指標(biāo)[13]。本研究表明輻照和1-MCP處理均能夠不同程度抑制枇杷貯藏期酶活性的上升,其中在貯藏期后期,單獨(dú)使用1-MCP優(yōu)于單獨(dú)使用輻照處理,并且二者聯(lián)合使用效果最好,這與曹森等[24]研究60Co-γ輻照結(jié)合1-MCP在藍(lán)莓上的酶活性作用效果一致,但其相關(guān)機(jī)理仍需進(jìn)一步深入探究。

陳曦等[29]研究表明,適宜劑量的60Co-γ輻照處理可以延長園藍(lán)藍(lán)莓果實(shí)的貯藏期,維持其更好的貯藏品質(zhì)。本試驗(yàn)結(jié)果表明,與CK相比,單獨(dú)使用輻照處理能夠延緩果實(shí)的生理代謝,這與前人研究輻照處理在其他果蔬保鮮上的作用結(jié)果相一致[29-30]。且本研究還發(fā)現(xiàn),單獨(dú)使用輻照處理對(duì)抑制枇杷果實(shí)TA含量和TSS含量的下降優(yōu)于單獨(dú)使用1-MCP。另外,采后病害影響枇杷的貯藏期,并且貯藏期間枇杷往往出現(xiàn)木質(zhì)化使果實(shí)品質(zhì)劣變[5]。本研究發(fā)現(xiàn),1μL·L-11-MCP和1.5 kGy60Co-γ輻照復(fù)合處理能更好地抑制果實(shí)腐爛指數(shù)和木質(zhì)素含量的上升,貯藏40 d時(shí),1 μL·L-11-MCP和1.5 kGy60Co-γ輻照復(fù)合處理的枇杷腐爛指數(shù)僅為17.95,說明二者復(fù)合處理對(duì)枇杷貯藏保鮮具有更好的效果,這可能由于1-MCP能夠影響果實(shí)乙烯的生成[6],60Co-γ輻照處理可以降低果實(shí)表面的微生物[9],從而達(dá)到延長枇杷貯藏期,保持枇杷較好貯藏品質(zhì)的效果。至于相關(guān)機(jī)理還有待進(jìn)一步探索。

4 結(jié)論

本研究發(fā)現(xiàn),1μL·L-11-MCP和1.5 kGy60Co-γ輻照復(fù)合處理對(duì)自發(fā)氣調(diào)包裝枇杷的保鮮效果最好,能夠有效抑制果實(shí)腐爛指數(shù)和木質(zhì)素含量的上升,保持枇杷果實(shí)更好的硬度,降低枇杷的呼吸強(qiáng)度、乙烯生成速率和相對(duì)電導(dǎo)率,延緩枇杷TA和TSS含量的下降,抑制枇杷果實(shí)PAL、LOX、PPO和POD活性的上升。貯藏40 d時(shí),1-MCP組、60Co-γ組、1-MCP+60Coγ組、CK組枇杷果實(shí)的腐爛指數(shù)分別為22.86%、25.72%、17.95%和36.24%。本研究結(jié)果有助于降低采后枇杷果實(shí)的劣變,為采后枇杷的貯藏保鮮提供了參考依據(jù)。