吳肖升，劉 洋，吳葆輝

1.衡水市精神病醫(yī)院，河北 衡水 053000；2.衡水市人民醫(yī)院，河北 衡水 053000

乳腺癌為臨床最常見(jiàn)惡性腫瘤之一，其患者中約99%為女性，男性患者僅占1%左右，但近年男性乳腺癌發(fā)病率呈逐漸升高趨勢(shì)[1]。迄今為止男性乳腺癌尚未引起醫(yī)患重視，存在漏診、誤診現(xiàn)象，嚴(yán)重影響患者預(yù)后，盡早檢出對(duì)改善患者預(yù)后至關(guān)重要[2]。超聲是臨床早期篩查乳腺癌的首選影像學(xué)方法，彩色多普勒超聲(color Doppler flow imaging, CDFI)可通過(guò)清晰顯現(xiàn)血流方向、速度等信息對(duì)腫瘤進(jìn)行量化評(píng)估，進(jìn)而為腫瘤良惡性判斷提供依據(jù)[3]。此外，近年來(lái)研究顯示CXC型趨化因子配體1(CXC-motif chemokine ligand 1，CXCL1)、GRB相關(guān)蛋白2(GRB-associated binding protein 2，Gab2)、微血管密度(micro vessel density，MVD)與惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[4-5]?；诖?，本研究探究了CDFI鑒別男性乳腺良惡性腫瘤價(jià)值及與CXCL1、Gab2、MVD的相關(guān)性，旨在為男性乳腺癌的早期診斷、治療提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2015年1月～2019年12月期間收治的18例男性乳腺惡性腫瘤患者作為研究組，均經(jīng)超聲引導(dǎo)下細(xì)針穿刺活檢確診，納入同期的41例男性良性乳腺腫瘤及50例健康體檢男性分別作為良性對(duì)照組和健康對(duì)照組。對(duì)比三組研究對(duì)象的婚姻狀況、年齡、體質(zhì)量、乳腺癌家族史、吸煙及飲酒情況，均無(wú)顯著差異(P>0.05)。詳見(jiàn)表1。

表1 各組一般資料對(duì)比

1.2 選例標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：①男性，年齡≥18歲；②自主行為能力良好，可配合完成研究；③無(wú)精神系統(tǒng)疾?。虎芗韧鶡o(wú)腫瘤手術(shù)史；⑤研究對(duì)象知曉本研究，已簽署同意書(shū)。

排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他惡性腫瘤患者；②血液系統(tǒng)疾病患者；③自身免疫性疾病患者；④?chē)?yán)重心腦血管疾病、肝腎功能障礙患者；⑤嚴(yán)重感染性疾病患者。

1.3 方法

CDFI檢查方法：采用美國(guó)通用公司生產(chǎn)的HDI 3500型彩色多普勒顯像儀進(jìn)行檢測(cè)，探頭頻率4～10 MHz?；颊呷⊙雠P位，雙臂上舉，充分暴露乳房及腋窩，以乳頭為中心作扇形及縱橫掃查，探頭中心頻率8 MHz，觀察病灶的大小、形態(tài)、與周?chē)M織的關(guān)系、質(zhì)地及活動(dòng)度，并與健側(cè)乳房作對(duì)比；掃查雙側(cè)腋窩有無(wú)異常淋巴結(jié)；觀察乳腺回聲，記錄腺體大小、有無(wú)腫塊及腫塊的大小、邊緣、形態(tài)、內(nèi)部回聲及血供情況，并實(shí)施多點(diǎn)取樣，對(duì)平均流速、舒張末期流速、收縮期流速峰值等進(jìn)行記錄，記錄CDFI參數(shù)，包括搏動(dòng)指數(shù)(pulse index，PI)、阻力指數(shù)(resistance index，RI)、收縮期峰值血流速度(peak systolic velocity，PSV)。并利用彩色多普勒及頻譜多普勒功能觀察病灶內(nèi)部及周邊的血流狀況?；颊哔Y料及圖像均由圖文工作站保留。

實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)檢測(cè)方法：術(shù)中取研究組患者的腫瘤組織標(biāo)本，由專(zhuān)業(yè)檢測(cè)師經(jīng)細(xì)胞裂解、氯仿溶解、高速離心取無(wú)色水相、沉淀RNA、樣品cRNA合成、目標(biāo)基因擴(kuò)增等步驟，擴(kuò)增增殖基因CXCL1、侵襲基因Gab2?；虮磉_(dá)量經(jīng)電腦熒光聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)曲線(xiàn)讀取。并采用SP免疫組化法檢測(cè)腫瘤組織中MVD表達(dá)水平，兔抗人單克隆抗體購(gòu)自北京中杉公司，采用國(guó)際常用的Weidner改進(jìn)式方法測(cè)量MVD水平，記錄5個(gè)高倍視野內(nèi)的微血管數(shù)，取其平均數(shù)作為最終MVD值。

超聲引導(dǎo)下細(xì)針穿刺活檢的方法：確定乳腺腫塊位置，選定穿刺點(diǎn)，局部皮膚常規(guī)消毒，左手固定腫塊，右手持10 mL注射器、7號(hào)針頭，頂壓下快速抽吸數(shù)次，解除負(fù)壓退針。腫瘤組織學(xué)活檢標(biāo)本均勻涂薄片23張，于95%乙醇內(nèi)固定，HE染色，光學(xué)顯微鏡下閱片、診斷?；颊叩慕M織學(xué)活檢標(biāo)本由質(zhì)量分?jǐn)?shù)10%的甲醛溶液固定，常規(guī)石蠟包埋、切片，采用免疫組織化學(xué)染色確認(rèn)分型。

1.4 觀察指標(biāo)

(1)三組研究對(duì)象的CDFI參數(shù)(PI、RI、PSV)。(2)研究組不同臨床特征患者的CDFI參數(shù)，臨床特征包括年齡、腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期、腫瘤部位、腫瘤直徑、腫瘤類(lèi)型，腫瘤情況均參照《腫瘤病理診斷規(guī)范(乳腺癌)》[6]中相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)合超聲引導(dǎo)下細(xì)針穿刺活檢結(jié)果進(jìn)行評(píng)估。(3)探究CDFI參數(shù)診斷男性乳腺惡性腫瘤的價(jià)值。(4)以研究組患者PI、RI、PSV平均值作為分界點(diǎn)，將大于平均值的患者作為高PI、RI、PSV患者，小于平均值的患者作為低PI、RI、PSV患者，比較不同CDFI參數(shù)患者的CXCL1、Gab2、MVD水平。(5)探究CDFI參數(shù)與CXCL1、Gab2、MVD的相關(guān)性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 三組研究對(duì)象的CDFI參數(shù)

三組研究對(duì)象的PI、RI、PSV比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；兩組間比較，研究組PI、RI、PSV高于良性對(duì)照組、健康對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。詳見(jiàn)表2。

表2 三組研究對(duì)象的CDFI參數(shù)

2.2 不同臨床特征患者的CDFI參數(shù)

將研究組患者按臨床特征進(jìn)行分組，不同腫瘤分化程度、淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移、不同臨床分期、不同腫瘤直徑組間PI、RI、PSV水平存在顯著差異(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表3 研究組不同臨床特征患者的CDFI參數(shù)

2.3 CDFI參數(shù)診斷男性乳腺惡性腫瘤的價(jià)值

繪制PI、RI、PSV診斷男性乳腺惡性腫瘤的ROC曲線(xiàn)(見(jiàn)圖1～2)，顯示PI單一診斷的曲線(xiàn)下面積(area under the curve，AUC)為0.816，95%CI為0.693～0.905，截?cái)嘀?1.43，對(duì)應(yīng)診斷敏感度為66.67%、特異度為87.80%；RI單一診斷的AUC為0.786，95%CI為0.658～0.881，截?cái)嘀?0.77，對(duì)應(yīng)診斷敏感度為66.67%、特異度為92.86%；PSV單一診斷的AUC為0.745，95%CI為0.615～0.850，截?cái)嘀?20.27 cm·s-1，對(duì)應(yīng)診斷敏感度為55.56%、特異度為87.80%；PI、RI、PSV聯(lián)合診斷的AUC為0.854，95%CI為0.738～0.933，統(tǒng)計(jì)值Z=6.898，最佳診斷敏感度為77.78%、特異度為80.49%。

圖1 CDFI參數(shù)單一診斷的ROC曲線(xiàn)

圖2 CDFI參數(shù)聯(lián)合診斷的ROC曲線(xiàn)

2.4 研究組不同CDFI參數(shù)患者的CXCL1、Gab2、MVD水平

以研究組患者PI、RI、PSV平均值(PI平均值為1.74，RI平均值為0.79，PSV平均值為22.45 cm·s-1)作為分界點(diǎn)，將大于平均值的患者作為高PI、RI、PSV患者，小于平均值的患者作為低PI、RI、PSV患者，結(jié)果證實(shí)研究組高PI、RI、PSV患者的CXCL1、Gab2、MVD水平高于低PI、RI、PSV患者(P<0.05)。見(jiàn)表4。

表4 研究組不同CDFI參數(shù)的患者的CXCL1、Gab2、MVD 水平

2.5 CDFI參數(shù)與CXCL1、Gab2、MVD相關(guān)性

相關(guān)性分析表明，研究組患者的PI、RI、PSV與CXCL1、Gab2、MVD呈正相關(guān)(P<0.05)。見(jiàn)表5。

表5 CDFI參數(shù)與CXCL1、Gab2、MVD相關(guān)性

3 討論

超聲在乳腺癌篩查方面占據(jù)重要地位，具有經(jīng)濟(jì)、實(shí)惠、安全、可重復(fù)性高等特點(diǎn)，相對(duì)于其它檢查具有不可替代的優(yōu)勢(shì)，患者受檢率極高，既能及時(shí)發(fā)現(xiàn)乳腺病灶，對(duì)病灶性質(zhì)作出初步判斷，又能動(dòng)態(tài)隨訪(fǎng)觀察[7,8]。但常規(guī)超聲受檢查者的主觀性影響較大，無(wú)法對(duì)病變嚴(yán)重程度作出量化評(píng)估，具有一定局限性。

CDFI較常規(guī)超聲分辨率更高，可清晰顯示腫瘤形態(tài)、大小、位置等情況，同時(shí)可對(duì)腫瘤內(nèi)部血供進(jìn)行準(zhǔn)確評(píng)估，從而鑒別腫瘤良惡性[9]。本研究發(fā)現(xiàn)，男性乳腺惡性腫瘤患者PI、RI、PSV明顯高于良性乳腺腫瘤患者及健康體檢者，與陳海濤等[10]針對(duì)女性乳腺惡性腫瘤的研究結(jié)果相近。乳腺惡性腫瘤能促進(jìn)血管生成因子的合成、釋放，以促進(jìn)新生血管形成，為腫瘤增殖提供氧氣與營(yíng)養(yǎng)，所以乳腺惡性腫瘤血供較良性腫瘤和正常乳腺組織更加豐富，且惡性腫瘤內(nèi)血管狹窄、扭曲，靜脈回流受阻，血流速度緩慢[11,12]。因此乳腺惡性腫瘤CDFI檢查的結(jié)果表現(xiàn)為PI、RI、PSV明顯升高，可據(jù)此對(duì)乳腺惡性腫瘤進(jìn)行診斷。本研究通過(guò)ROC曲線(xiàn)分析發(fā)現(xiàn)，PI、RI、PSV聯(lián)合診斷男性乳腺惡性腫瘤價(jià)值的AUC高達(dá)0.854，最佳診斷敏感度77.78%、特異度80.49%，對(duì)男性乳腺惡性腫瘤早期檢出具有重要指導(dǎo)作用。

本研究結(jié)果還顯示，不同分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期、腫瘤直徑的男性乳腺惡性腫瘤患者的PI、RI、PSV存在顯著差異，因此我們推測(cè)CDFI參數(shù)在評(píng)估男性乳腺惡性腫瘤惡性生物學(xué)特征方面具有一定作用。本研究中測(cè)得男性乳腺惡性腫瘤的PI平均值為1.74，RI平均值為0.79，PSV平均值為22.45 cm·s-1，與牛秋云[13]研究結(jié)果中女性乳腺癌患者RI平均值(0.78±0.10)、PSV平均值(22.46±5.17)cm·s-1及侯麗紅[14]報(bào)道的女性乳腺癌患者的PI平均值(1.71±0.35)數(shù)據(jù)相近，證實(shí)我們的研究數(shù)據(jù)具有一定可靠性。以本研究中CDFI參數(shù)平均值作為分界值，發(fā)現(xiàn)隨著男性乳腺惡性腫瘤PI、RI、PSV值升高，其腫瘤組織中CXCL1、Gab2、MVD表達(dá)水平亦逐漸升高，二者存在明顯正相關(guān)關(guān)系。CXCL1屬于趨化因子家族的成員，被認(rèn)為是一種腫瘤增殖基因[15]。Kim等[16]報(bào)道指出，口腔鱗狀細(xì)胞癌患者CXCL1表達(dá)明顯升高，其可通過(guò)自分泌環(huán)誘導(dǎo)癌相關(guān)成纖維細(xì)胞成熟，促進(jìn)癌細(xì)胞增殖。楊庭松等[17]通過(guò)一項(xiàng)對(duì)胃癌患者的研究發(fā)現(xiàn)，CXCL1可能通過(guò)調(diào)節(jié)MMP-3蛋白表達(dá)，發(fā)揮促進(jìn)癌細(xì)胞的遷移和侵襲作用。Gab2是一種與乳腺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移相關(guān)的侵襲基因，其編碼的蛋白參與細(xì)胞內(nèi)各種受體激活后的下游調(diào)節(jié)，臨床已有研究證實(shí)，Gab2在卵巢癌[18]、膠質(zhì)瘤[19]中的表達(dá)異常升高，且有報(bào)道[20]指出通過(guò)檢測(cè)Gab2基因表達(dá)情況可衡量乳腺癌細(xì)胞侵襲活性。而MVD是目前用以衡量腫瘤新生血管程度的常用標(biāo)志物，其表達(dá)水平越高，提示腫瘤組織內(nèi)新生血管數(shù)量越多，而新生血管是惡性腫瘤增殖、轉(zhuǎn)移的基礎(chǔ)，其數(shù)量與腫瘤增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移等惡性生物學(xué)行為相關(guān)[21]。崔艷婷等[22]報(bào)道顯示，通過(guò)檢測(cè)乳腺癌患者癌組織中MVD表達(dá)情況，可評(píng)估其淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)。喻宏等[23]研究也指出，MVD值與三陰乳腺癌患者的淋巴轉(zhuǎn)移及臨床分期密切相關(guān)，可作為判斷患者的疾病進(jìn)展及預(yù)后的重要指標(biāo)。結(jié)合上述分析及本研究結(jié)果可知，CDFI參數(shù)可在一定程度上反映男性乳腺惡性腫瘤患者腫瘤增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移能力。

綜上可知，采用CDFI可對(duì)男性乳腺惡性腫瘤進(jìn)行輔助診斷，且CDFI參數(shù)可在一定程度上反映CXCL1、Gab2、MVD表達(dá)情況，有助于臨床評(píng)估腫瘤增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)。本研究創(chuàng)新之處在于明確了CDFI在鑒別男性乳腺良惡性腫瘤方面的價(jià)值及與CXCL1、Gab2、MVD表達(dá)的相關(guān)性，后續(xù)研究中我們將進(jìn)一步探究CDFI在男性乳腺惡性腫瘤療效評(píng)估方面的作用，以充分發(fā)揮其臨床應(yīng)用價(jià)值。