劉靈婕，林曉煜，王秋榮，葉 坤，王志勇

(1.集美大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院，福建 廈門 361021；2.農(nóng)業(yè)農(nóng)村部東海海水健康養(yǎng)殖重點實驗室，福建 廈門 361021)

0 引言

魚粉因其蛋白質(zhì)含量高，氨基酸配比較為均衡，且具適口性好、易于消化吸收等優(yōu)點，一直以來是魚類飼料中的優(yōu)質(zhì)蛋白原料；魚油則因富含其他油脂所缺乏的高度不飽和脂肪酸(HUFA)，是海水養(yǎng)殖魚類攝入必需脂肪酸的重要來源。二者在水產(chǎn)養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)發(fā)展中扮演著重要角色。近年來，隨著水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的迅速發(fā)展，傳統(tǒng)海水魚類飼料中高比例魚油和魚粉的添加量使得飼料成本大幅提升，直接導(dǎo)致了養(yǎng)殖經(jīng)濟效益的縮減。為了應(yīng)對魚粉、魚油短缺局面以及節(jié)約飼料成本，擺脫水產(chǎn)飼料對魚油、魚粉的過度依賴，國內(nèi)外營養(yǎng)學(xué)者進行了大量有關(guān)魚類飼料中魚油魚粉替代的研究[1-6]。

大黃魚(Larimichthyscrocea)是我國當前育苗量和養(yǎng)殖量最大的海水經(jīng)濟魚類，有我國“海水國魚”之稱，研究者也在大黃魚養(yǎng)殖實驗中做了諸多嘗試。相關(guān)結(jié)果表明，利用豆粕、小麥蛋白粉等植物蛋白源，或肉骨粉、血粉等動物蛋白源均可以替代大黃魚飼料中的部分魚粉，但替代超過一定水平則會對大黃魚的生長與健康狀態(tài)造成較嚴重的不良影響[7-11]。在魚粉含量不低于45%(基礎(chǔ)飼料中魚粉所占比)的情況下，使用植物油部分替代大黃魚飼料中的魚油對大黃魚生長無顯著影響，但會顯著影響大黃魚肌肉脂肪酸組成[12-13]。而目前已證實的魚類HUFA生物合成關(guān)鍵酶主要有Δ6-Fad、Δ5-Fad、Elovl5、Elovl4、Elovl2等[14-15]，推測上述關(guān)鍵酶活力低下或基因表達的缺失可能是造成魚類自身合成HUFA能力不足的原因。為了解大黃魚對低魚粉低魚油飼料的耐受性和適應(yīng)程度，本研究利用無魚油無魚粉飼料(fish meal and fish oil free diet,FMFOFD)飼養(yǎng)大黃魚幼魚，觀察和測定了不同個體間生長差異情況、體組織脂肪酸組成，生長差異個體中HUFA合成相關(guān)基因表達水平，以期為選育出飼料轉(zhuǎn)化率高且節(jié)省飼料中魚油魚粉用量的大黃魚品系提供依據(jù)和參考資料。

1 材料與方法

1.1 研究飼料的制備

本研究用的無魚粉無魚油飼料(配方見表1)是以酪蛋白為蛋白源(河南明瑞化工有限公司，純度：92%～95%)，以大豆油(益海嘉里(安徽)糧油工業(yè)有限公司)、亞麻籽油(內(nèi)蒙古錫林郭勒盟紅井源油脂有限責(zé)任公司)、豬油(精煉食用豬油，廈門禾昌晟生物科技有限公司)為脂質(zhì)源配制而成的。所有飼料原料經(jīng)粉碎后過60目篩，按原料量由少到多逐級混合均勻，待與油脂充分混合后再加水攪拌，使其充分浸透，然后用雙螺桿擠條機制作成直徑約為2 mm的顆粒飼料，經(jīng)60 ℃烘箱烘干1 h，再待自然風(fēng)干后封口保存于-20 ℃冰箱中備用。另外，對照組采用福建天馬科技集團股份有限公司生產(chǎn)的健馬牌大黃魚配合飼料(commercial diet,CMD，粗蛋白質(zhì)量分數(shù)為43.38%，粗脂肪為11.23%)飼養(yǎng)。

表1 飼料配方與營養(yǎng)組成Tab.1 Formulationandproximatecompositionsofexperimentaldietforlargeyellowcroaker飼料成分Ingredients質(zhì)量分數(shù)Massfraction/%酪蛋白Caseinprotein40.0小麥粉Wheatflour20.0明膠Gelatin10.0預(yù)糊化淀粉Pregelatinizedstrach8.5豬油Lardoil6.0亞麻籽油Linseedoil4.0大豆油Soybeanoil2.0多維Multivitamin2.0多礦Multimineral2.0磷酸二氫鈣Monocalciumphosphate2.0氯化膽堿Cholinechloride2.0硫代甜菜堿Dimethylpropiothetin0.5?；撬酺aurine1.0粗蛋白Crudeprotein46.16粗脂肪Crudefat13.81粗灰分Crudeash5.60

1.2 實驗魚處理

實驗用的大黃魚幼魚由寧德市金玲水產(chǎn)科技有限公司提供。實驗開始前，先將大黃魚幼魚從海上網(wǎng)箱移入室內(nèi)水泥池(3 m×3 m×1.5 m)中暫養(yǎng)1周，期間投喂健馬牌大黃魚配合飼料進行馴化，直至能完全攝食配合飼料。按體重大小將幼魚分成6個不同的實驗組后，移入2 m×1 m×1 m(水深0.8 m)的小池中進行無魚粉無魚油飼料飼養(yǎng)實驗；余下(未作分選)的幼魚作為對照組繼續(xù)用商品飼料CMD喂養(yǎng)。

1.3 飼養(yǎng)管理和飼養(yǎng)條件

幼魚暫養(yǎng)馴化和正式實驗期間均每天投喂兩次(8:30、15:30)，飼料顆粒大小根據(jù)魚體大小進行調(diào)整，投喂至幼魚不再攝食則停止投餌。實驗期間，海水的溫度為(25±2)℃，鹽度為30～35，溶解氧維持在5 mg/L以上，每天吸污(換水量為100%)。

1.4 樣品采集和處理

飼養(yǎng)實驗結(jié)束時，先對實驗魚饑餓處理24 h，再用丁香酚進行麻醉后才分別測量魚體重和體長。剪取每尾大黃魚的胸鰭，置于95%的酒精中，-20 ℃保存，用于DNA的提取；解剖魚體取腦、肝臟、胃、腸和肌肉組織，置于RNA保護液中，-80 ℃保存，用于RNA 的提??；取內(nèi)臟團、肌肉和肝臟組織，分別用錫箔紙包好后用自封袋封裝，-20 ℃保存，用于日后營養(yǎng)成分分析。

1.5 樣品測定及數(shù)據(jù)分析

樣品的粗蛋白含量采用凱氏定氮法測定，粗脂肪采用Folch氯仿-甲醇法[16]測定。組織樣品中脂肪酸含量的測定方法為：將提取的總脂肪，采用三氟化硼進行脂肪酸甲酯化，然后用安捷倫7850氣相色譜儀對脂肪酸進行分析。儀器條件設(shè)置為：前進樣口250 ℃；柱箱250 ℃；柱流量1.25 mL/min；進樣量1 μL；分流比為50∶1。梯度升溫程序為：50 ℃，2 min；再5 ℃/min，從50 ℃上升到270 ℃；270 ℃，2 min。采用面積歸一法進行脂肪酸含量的定量分析。

1.6 熒光定量PCR

無魚粉無魚油飼料喂養(yǎng)的實驗組生長快個體、生長慢個體和以普通飼料喂養(yǎng)的對照組大黃魚各10尾，分別取其腦、肝、肌肉、胃、腸組織樣品進行分析。

1)RNA的提取。RNA提取試劑盒購買自北京全式金生物技術(shù)有限公司。取50 mg左右組織進行總RNA的提取，1%瓊脂糖凝膠電泳檢測其完整性后用超微量分光光度計測定RNA最終濃度及純度。

2)qRT-PCR反應(yīng)。用DNase Ⅰ對提取的大黃魚RNA樣品進行處理后，用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒GoScriptTM Reverse Transcription System(Promega,USA)進行下一步的處理。PCR反應(yīng)程序為：25 ℃，5 min;42 ℃，90 min;70 ℃，15 min。反應(yīng)結(jié)束后置于-80 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

3)引物設(shè)計與合成。根據(jù)已經(jīng)發(fā)表的大黃魚基因序列，設(shè)計特異性引物，以β-actin為內(nèi)參基因。所有引物(見表2)均由北京華大基因有限公司合成。

表2 本研究使用的qRT-PCR引物序列和退火溫度

PCR反應(yīng)體系共包含正向引物(10 μmol/L)0.5 μL，反向引物(10 μmol/L)0.5 μL，大黃魚cDNA模板4 μL，SYBR Green Realtime PCR Master Mix Ⅰ Gene 10 μL，SYBR Green Realtime PCR Master Mix Ⅱ H20 Grade 5 μL。反應(yīng)條件為：95 ℃ 10 min；95 ℃ 20 s，各基因退火溫度20 s，72 ℃ 25 s(45個循環(huán))；81 ℃熒光采集5 s。熔解曲線的反應(yīng)條件為：95 ℃ 15 s，60 ℃ 1 min，95 ℃ 15 s。反應(yīng)結(jié)束后，由羅氏定量PCR儀系統(tǒng)自帶軟件繪制基因的溶解曲線和計算擴增效率，分析獲得各個樣品的CP值，并采用2-ΔΔCT法以β-actin的表達量來對樣品進行標準化數(shù)據(jù)處理?；虮磉_水平等于各組織表達平均值±各組織表達標準誤差平均值(mean±m(xù)ean of standard error，M±SEM)。

1.7 數(shù)據(jù)分析

數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0進行統(tǒng)計處理,結(jié)果用平均值±標準差(Means±SD)表示。對數(shù)據(jù)進行單因素方差分析(one-way ANOVA)，顯著性水平為 0.05，若差異顯著用LSD法進行多重比較。

2 結(jié)果

2.1 無魚粉無魚油飼料飼養(yǎng)的大黃魚的生長與存活率

用無魚粉無魚油飼料喂養(yǎng)的大黃魚的生長和存活情況見表3。其中第2組(初始體重為2.00～2.25 g)由于在實驗期間受到病害感染，在實驗開始的第40天出現(xiàn)大量死亡，至第42天全部死亡。由表3可見，用無魚粉無魚油飼料喂養(yǎng)的大黃魚幼魚仍有部分個體能夠正常存活并以較快的速度生長。各組內(nèi)幼魚的初始體重差異不大，最大個體與最小個體體重差別不超過10%，但結(jié)束時則體重差異很大，當時間超過60 d后，各組最大個體體重均達到最小個體的3倍以上，其中1、3、6三組最大個體體重均達到最小個體的4.2倍以上(見表3)。

表3 大黃魚幼魚生長與存活結(jié)果

除實驗組2之外的其他實驗組均有觀察到部分實驗魚因不能適應(yīng)實驗飼料而陸續(xù)死亡，這些死亡個體并未發(fā)現(xiàn)被病原體感染的癥狀，解剖可以觀察到其肝臟與正常肝臟組織相比顏色較白且易碎。實驗結(jié)束時對部分魚進行解剖，發(fā)現(xiàn)生長快的個體外部形態(tài)與內(nèi)部構(gòu)造都正常，與用普通商品飼料喂養(yǎng)的個體無異，但生長最慢(尤其是第6組中最終體重比初始體重還小)的個體，盡管外部形態(tài)看不到明顯異常，但其肝臟也出現(xiàn)明顯的發(fā)白、易碎癥狀。

2.2 無魚粉無魚油飼料飼養(yǎng)的大黃魚的肌肉脂肪酸組成

實驗組4(初始體重4.25～4.75 g)中生長速度不同的3類個體的肌肉脂肪酸組成與含量見表4。從表4中可見，用商品飼料飼養(yǎng)的大黃魚的肌肉中∑SFA和HUFA的含量顯著高于用無魚粉無魚油飼料飼養(yǎng)的大黃魚(P<0.05)，而∑PUFA含量則顯著低于無魚粉無魚油組(P<0.05)。用無魚粉無魚油飼料飼養(yǎng)的大黃魚生長快個體肌肉中，∑MUFA、HUFA含量和DHA/EPA比例低于生長慢及中等個體；DHA含量顯著低于生長慢及中等個體(P<0.05)；而∑PUFA含量則較高，其中EPA含量顯著高于生長慢個體(P<0.05)。

3) 由于港口費率的不同，各港口城市投資港口的產(chǎn)出效率有所差異。當競爭者的投資能力低下時，降低港口使費并不是好的策略。

表4 大黃魚肌肉脂肪酸組成

2.3 大黃魚HUFA合成相關(guān)基因的表達水平

用實時熒光定量PCR技術(shù)檢測了無魚粉無魚油飼料喂養(yǎng)的第4組(4.25～4.75 g)中極大(生長快)、極小(生長慢)個體和以普通飼料喂養(yǎng)的對照組大黃魚腦、肝、腸、胃和肌肉中Δ-6Fad、Elovl1、Elovl5、Elovl6四個與HUFA合成相關(guān)基因的表達情況。

2.3.1 Δ6-Fad基因

大黃魚Δ6-Fad各組織表達結(jié)果如圖1所示。其主要在腦和肝臟中表達，而以腦中表達量較多，在腸中也有痕量表達，在胃與肌肉中未檢測到其表達。與商品飼料飼養(yǎng)的大黃魚(對照組)相比，無魚粉無魚油飼料飼養(yǎng)的大黃魚幼魚，生長快個體的Δ6-Fad的表達量顯著升高，尤其是在腦中表達量約為對照組的5.5倍(P<0.05)，肝臟中Δ6-Fad的表達量約為對照組的1.8倍(P>0.05)；生長慢的個體Δ6-Fad的表達量也比對照組高，但在腦和腸中的表達水平與對照組差異不顯著(P>0.05)，在肝臟中的表達水平與對照組差異顯著(P<0.05)。無魚粉無魚油飼料飼養(yǎng)的大黃魚幼魚生長快與生長慢的個體相比，前者腦中Δ6-Fad的表達量約為后者的3.3倍，差異顯著(P<0.05)；在肝中的表達量生長快的則略低于生長慢的個體，但差異不顯著(P>0.05)。

2.3.2Elovl5基因

大黃魚各組織Elovl5的表達量如圖2所示。其在腦、肝臟、胃、腸和肌肉中都有表達。商品飼料飼養(yǎng)的大黃魚以腦中表達量較高，其次是肝、胃、腸，肌肉中表達量最少。與對照組大黃魚相比，無魚粉無魚油飼料飼養(yǎng)的大黃魚幼魚，生長快的個體肝臟與肌肉中Elovl5的表達量都顯著升高(提高到2倍以上，P<0.05)，胃與腸中的表達量也有升高但差異不顯著(P>0.05)，腦中Elovl5的表達量則與對照組基本一致，其表達量大小順序是：肝>腦>胃>腸>肌肉；而生長慢的個體檢測的5個組織中Elovl5的表達量都高于對照組，其中以胃中升高最顯著(P<0.01)，肝和肌肉中升高的幅度也達到顯著水平(P<0.01)，腦和腸中的表達水平雖比對照組高但差異不顯著(P>0.05)，其表達量大小順序是：腦>肝>胃>肌肉>腸。無魚粉無魚油飼料飼養(yǎng)的大黃魚幼魚生長快與生長慢的個體相比，前者以肝臟中表達量最高且兩者之間差異顯著(P<0.05)，后者則是腦中的表達量最高。

大黃魚各組織Elovl6基因的表達量見圖3。其在腦、肝臟、胃、腸和肌肉中都有表達，但表達量都很低。與對照組相比，無魚粉無魚油飼料飼養(yǎng)的大黃魚幼魚各組織中Elovl6基因的表達量均顯著升高(P<0.05)，除肌肉組織外，其他各組織中的升高幅度都達到20倍以上，特別是在腦和肝臟中的表達量很高。尤其是生長快的個體，肝臟與腦中Elovl6的表達量均高于生長慢個體，其中肝臟中兩者之間的差異顯著(P<0.05)。生長快個體Elovl6的表達量大小順序是：肝>腦>胃≈腸>肌肉，以肝臟表達量最高；而生長慢的個體Elovl6表達量大小順序則是：腦>肝>胃≈腸>肌肉，以腦中表達量最高。

2.3.4Elovl1基因

大黃魚各組織Elovl1基因表達量如圖4所示，其在腦、肝臟、胃、腸和肌肉中都有表達。對照組大黃魚Elovl1基因以腦中表達量最高，其次是肝臟、腸、肌肉，胃中表達量最低。與對照組相比，無魚粉無魚油飼料飼養(yǎng)的大黃魚幼魚除了肌肉以外其余4種組織中Elovl1基因的表達量都有不同程度的升高：生長快的個體腦中Elovl1的表達量升高到3倍以上，胃中的表達量升高20倍以上，腸中表達量升高的幅度也達到顯著性差異水平(P<0.05)，肝臟的表達量也有明顯升高但與對照組差異不顯著；生長慢個體各組織(肌肉除外)Elovl1的表達量雖有升高，但與對照組比較差異都不顯著(P>0.05)。

3 討論

3.1 無魚油無魚粉飼料對不同大黃魚幼魚生長和存活的影響

本研究對體重介于1.75～5.75 g的1925尾大黃魚幼魚，進行了無魚粉無魚油飼料喂養(yǎng)實驗，其中第2組(2.00～2.25 g)幼魚在飼養(yǎng)至第6周時突然暴發(fā)嚴重的細菌性疾病而大量死亡，至第42天存活個體只剩下11.7%且活力明顯不佳，因而提前中斷該組實驗。其余各組經(jīng)過9～10周實驗，都得到了相似的結(jié)果，即：各組都有部分幼魚因為不能適應(yīng)所用的飼料而死亡，死亡的個體肝臟普遍發(fā)生了明顯的病變；各組存活的個體變得大小差異很大，各組最大個體體重是同組最小個體的2.8倍至4.6倍(見表3)；有些個體幾乎完全沒有生長，甚至實驗結(jié)束時體重比實驗初始時還小，這些生長慢或沒生長甚至負生長的個體肝臟也呈貧血狀，色淡、易碎，產(chǎn)生了異常，而生長快的個體則肝臟形態(tài)和顏色都表現(xiàn)正常。即使是中途中斷了實驗的第2組，第42天時仍存活的個體之間大小也出現(xiàn)顯著的差異，最大最小個體間體重差別(極差)已由實驗起始時的0.25 g擴大為1.46 g，最大與最小個體間的體重比由1.125(2.25 g/2.00 g)上升為1.82(3.24 g/1.78 g)。

上述結(jié)果說明，同樣的飼料對不同的個體飼養(yǎng)的效果是不一樣的，大黃魚不同個體之間對無魚粉無魚油飼料的適應(yīng)性差異是非常大的。造成這種差異的原因，可能與不同個體間的營養(yǎng)感知[16]、對特定飼料的消化吸收能力(即飼料轉(zhuǎn)化率)，以及長鏈多不飽和脂肪酸和高不飽和脂肪酸的合成能力等因素有關(guān)，也與個體間的食物偏好性和營養(yǎng)需求差異有關(guān)[17]。魚粉和魚油是構(gòu)成大黃魚配合飼料成本的主要部分，隨著養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展，魚粉和魚油供應(yīng)不足在未來可能成為制約肉食性海洋水產(chǎn)動物養(yǎng)殖規(guī)模進一步擴大的因素。從本研究的結(jié)果看，利用養(yǎng)殖對象個體之間的遺傳差異，選育出對魚粉魚油需求量低，甚至完全不需要添加魚粉魚油的“耐粗飼”品系，從而降低養(yǎng)殖成本，減少對魚油魚粉的需求，這是完全可能的，并具有巨大的意義，值得引起充分重視。本研究也提示魚類(及其他肉食性水產(chǎn)動物)營養(yǎng)與飼料研究者，在進行營養(yǎng)與飼料的相關(guān)研究時，需要充分考慮研究對象群體及個體之間的遺傳差異。

3.2 無魚粉無魚油飼料對大黃魚幼魚肌肉脂肪酸組成的影響

與對照組大黃魚脂肪酸組成相比較，可以發(fā)現(xiàn)攝食無魚粉無魚油飼料大黃魚肌肉的ΣSFA、ΣHUFA、DHA、EPA、AA含量明顯較低，ΣPUFA含量較高，但ΣMUFA含量變化不明顯。這與李經(jīng)奇等[12]用亞麻籽油和豆油替代魚油對大黃魚肌肉脂肪酸組成影響的研究結(jié)果一致。一般魚體的脂肪酸組成與飼料的脂肪酸組成正相關(guān)，攝食無魚粉無魚油飼料大黃魚幼魚魚體中PUFA含量高的原因與飼料中使用亞麻籽油和大豆油替代魚油有關(guān)。亞麻籽油中含有豐富的LA、ARA、ALA，導(dǎo)致實驗魚體中的LA、ARA含量明顯升高，這在大菱鲆[18]的亞麻籽油替代魚油的實驗中也得到證實。

在脊椎動物中HUFA的生物合成是通過脂肪酸去飽和酶(Fads)和延長酶(Elovl)催化完成的。經(jīng)過連續(xù)的去飽和及延長反應(yīng)，將LA和ALA合成為DHA和EPA等高度不飽和脂肪酸[19]。海水魚類的高不飽和脂肪酸合成調(diào)控機制與大多數(shù)脊椎動物一致。但不同魚類的HUFA合成能力差異明顯，一般認為淡水魚類和溯河洄游的鮭鱒魚類能夠依靠自身的作用將LA和ALA轉(zhuǎn)化為HUFA，而在對海水魚類如真鯛、大菱鲆等HUFA合成機制的研究中發(fā)現(xiàn)，由于關(guān)鍵性的去飽和酶活性較低或極低，使其將LA和ALA轉(zhuǎn)化為HUFA的效率極低而不能滿足自身需要[20-21]。另外，海水魚的天然食物中富含HUFA，不需要自身額外合成，導(dǎo)致相關(guān)HUFA合成基因的表達量降低、功能退化甚至消失[22-23]，推測這是導(dǎo)致攝食無魚粉無魚油飼料大黃魚魚體EPA、DHA等HUFA明顯低于對照組的原因。同時對4.25～4.75 g組內(nèi)大黃魚體重極端大和極端小的個體脂肪酸含量的相互比較也可以發(fā)現(xiàn)，大黃魚生長較快的個體中ALA、ARA和PUFA含量均明顯高于生長較慢個體，提示脂肪酸的吸收利用效率與大黃魚的生長密切相關(guān)，但飼料中缺乏HUFA的情況是否在一定程度上激發(fā)了大黃魚自身的HUFA合成能力，還需要結(jié)合大黃魚HUFA合成相關(guān)基因的表達情況作進一步探討。

3.3 無魚粉無魚油飼料對生長差異大黃魚幼魚HUFA合成相關(guān)基因表達的影響

本研究采用熒光定量PCR方法，對攝食無魚粉無魚油飼料生長快和生長慢的大黃魚，以及攝食商品飼料大黃魚組織中的4種脂肪酸合成酶基因表達情況進行了比較分析，結(jié)果顯示4個基因在攝食無魚粉無魚油飼料大黃魚幼魚特定組織中的表達量都有不同程度的提高，特別是生長快的個體其Δ6-Fad和Elovl5表達水平的升高較顯著，這與李經(jīng)奇等[12]的研究結(jié)果一致。在有關(guān)海水魚類Δ6-Fad的營養(yǎng)調(diào)控研究[24]中發(fā)現(xiàn)，金頭鯛(Sparusaurata)Δ6-Fad的兩種轉(zhuǎn)錄本都被富含HUFA的飼料所抑制；相反，用菜籽油和豆油完全替代魚油飼喂金頭鯛幼魚，不僅顯著提高了魚體的18:2n-9和18:3n-6含量，而且Δ6-FadmRNA的表達量也提高了6倍。在對大西洋鮭(Salmosalar)的研究[25]中發(fā)現(xiàn)，大豆油組魚肝細胞Δ5-Fad和Δ6-Fad基因的相對表達量均顯著高于魚油組[31]，Δ6-Fad是魚類HUFA生物合成的第一限速酶[26]，提示富含十八碳脂肪酸的植物油可能比富含DHA和EPA的魚油更能促進魚體對特定脂肪酸如HUFA的去飽和過程。

Elovl5碳鏈延長酶基因在海水魚類中廣泛存在，在從C18至C20 PUFA合成中碳鏈的延長酶發(fā)揮重要作用，且一般認為海水魚中Elovl5的活性較高。有研究[27]表明n-3HUFA對大黃魚Elovl5和Elovl4基因的表達有抑制作用。本研究的商品飼料中由于添加了大量魚粉和魚油，含有充足的HUFA可供直接吸收利用，不需要魚類自身合成，因此對照組中這些基因的表達量較低，而實驗組中HUFA合成相關(guān)基因的表達量上升也證實了大黃魚自身具有一定的HUFA合成能力，且相關(guān)基因受外界營養(yǎng)條件的影響和調(diào)控。

此外，本研究的結(jié)果顯示攝食無魚粉無魚油飼料大黃魚幼魚組織中Elovl1和Elovl6的表達量也顯著上升。目前海水魚類研究較多的是Elovl5、Elovl2等延長酶基因，關(guān)于Elovl1和Elovl6的報道甚少。Elovl1主要催化形成C12:0、C14:0、C16:0[28]，Elovl6在C18:0和C18:1的催化生成中起重要作用[29]。本研究在無魚粉無魚油飼料中延長酶的作用底物充足，因此Elovl1和Elovl6基因表達量顯著增加，進一步證實了營養(yǎng)條件會影響HUFA合成基因的表達，相關(guān)基因的表達又促進了魚類對特定脂肪酸的吸收利用。上述基因表達模式的差異可能與實驗魚個體出現(xiàn)的生長差異密切相關(guān)，但是否是引起魚體生長差異的主要原因以及其作用機理如何，后續(xù)需要利用基因組學(xué)結(jié)合分子生物學(xué)手段加以深入研究。

4 結(jié)論

本研究以混合油脂(m(大豆油)∶m(亞麻籽油)∶m(豬油)=2∶1∶1)替代魚油，明膠和酪蛋白替代魚粉制成的無魚粉無魚油配合飼料，對大黃魚幼魚進行為期70 d的養(yǎng)殖。結(jié)果表明：攝食無魚粉無魚油飼料的大黃魚幼魚能夠正常存活，但不同個體之間的生長差異顯著；ΣHUFA、DHA、EPA、AA含量明顯較低，ΣPUFA含量較高；生長快與生長慢個體的Δ6-Fad、Elovl5、Elovl6和Elovl1的表達模式即組織表達譜均存在明顯的差異，生長快個體腦中Δ6-Fad和Elovl1、肝中Elovl5和Elovl6的表達量顯著高于生長慢個體。這說明大黃魚幼魚早期營養(yǎng)調(diào)控可以有效調(diào)節(jié)魚體HUFA合成能力以及對飼料中營養(yǎng)物質(zhì)的利用率。本研究結(jié)果為今后改善大黃魚幼魚飼料配方，降低飼料成本，提高養(yǎng)殖效益具有重要的意義。