徐路瓊，賀坤華，徐銀霞，胡映峰，保晶艷，馬麗瓊

云南省曲靖市第一人民醫(yī)院輸血科，云南曲靖 655000

影響ABO血型正反定型不相符的因素很多，其中不規(guī)則抗體是最復(fù)雜的影響因素之一[1]。所有p表型人血清中均含有抗-PP1Pk抗體(又稱抗-Tja抗體),該抗體能結(jié)合補(bǔ)體造成溶血,與非p表型的A、B、O紅細(xì)胞均表現(xiàn)強(qiáng)烈的溶血反應(yīng),使ABO正反定型不一致[2-4]。孕婦做血型鑒定時，發(fā)現(xiàn)1例患者ABO血型正反不符，在其血清中檢測到抗-Tja抗體，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 患者，女，25歲，彝族，云南曲靖人，無輸血史?；颊叩?次懷孕產(chǎn)檢時血型報告為B型，其余各項(xiàng)產(chǎn)檢指標(biāo)均正常，懷孕8周時自然流產(chǎn)，未引起重視?，F(xiàn)第2次懷孕,孕12周來本院產(chǎn)檢，卡氏法血型鑒定時發(fā)現(xiàn)ABO血型正定型為B型，反定為O型。

1.2儀器與試劑 ABO、Rh血型檢測卡、抗-A/抗-B血型定型試劑、0.2 mol/L 2-巰基乙醇(2-Me)、不規(guī)則抗體檢測試劑(批號20170802)、抗球蛋白檢測卡均由長春博迅生物技術(shù)有限責(zé)任公司生產(chǎn)；抗體鑒定譜細(xì)胞(批號20171020)由江蘇中濟(jì)萬泰生物醫(yī)藥有限公司生產(chǎn)；人源抗-Tja抗體、人p表型紅細(xì)胞均由云南省昆明市血液中心提供；單克隆抗-P1由上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司生產(chǎn)。KA-2200型日本久保田離心機(jī)；TD-A型醫(yī)用離心機(jī)、FYQ型免疫微柱孵育器(長春博研科學(xué)儀器有限責(zé)任公司)；SSW-600-2S型電熱恒溫水槽(上海博訊實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠)。

1.3方法

1.3.1患者及親屬血型鑒定 采用試管法復(fù)查患者ABO血型,檢測患者紅細(xì)胞上H表面抗原，參照血站技術(shù)操作規(guī)程(2012版)進(jìn)行操作[5]?；颊哂H屬血型鑒定采用微柱凝膠法檢測,按操作手冊及試劑說明書進(jìn)行操作。

1.3.2不規(guī)則抗體篩查與鑒定 患者血清和乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)抗凝血漿分別用微柱凝膠法和鹽水法進(jìn)行不規(guī)則抗體篩查，選擇抗篩結(jié)果陽性介質(zhì)進(jìn)行譜細(xì)胞鑒定，并比較血清用2-Me處理前后的結(jié)果來判斷抗體的特性。

1.3.3p表型確認(rèn) 患者紅細(xì)胞與人源抗-Tja抗體、患者血清與人p表型紅細(xì)胞在鹽水介質(zhì)中反應(yīng)，立即離心判斷結(jié)果P1Pk血型結(jié)果。

1.3.4抗體效價測定 用生理鹽水倍比稀釋患者EDTA-K2抗凝血漿，加入4%O型正常獻(xiàn)血員紅細(xì)胞懸液，測定IgM性質(zhì)的抗體效價。200 μL血漿與200 μL 2-Me混合，37 ℃水浴箱孵育15 min取出，用生理鹽水倍比稀釋，取50 μL加入抗人球蛋白卡中，加入同體積0.8%O型正常獻(xiàn)血員紅細(xì)胞懸液,混勻后放入37 ℃免疫微柱孵育器15 min后離心，測定IgG性質(zhì)的抗體效價。

2 結(jié) 果

2.1血型鑒定 患者ABO血型正反定型不符，正定型為B型，反定型為O型，懷疑血漿中存在不規(guī)則抗體。見表1。

表1 患者ABO血型鑒定結(jié)果

2.2抗體篩查實(shí)驗(yàn) 患者血清與抗體篩查細(xì)胞在鹽水介質(zhì)中有凝集并溶血，EDTA-K2抗凝血漿與抗篩細(xì)胞在鹽水及微柱凝膠法有凝集無溶血。見表2。

表2 抗體篩查實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.3不規(guī)則抗體特異性鑒定 患者血清與11人份譜細(xì)胞在鹽水介質(zhì)立即離心均呈陽性，2次離心后呈現(xiàn)部分溶血，在37 ℃放置10 min，呈現(xiàn)完全溶血。將血清以2-Me滅活I(lǐng)gM抗體后，鹽水介質(zhì)下均陰性，微柱凝膠法檢測和所有譜細(xì)胞呈現(xiàn)強(qiáng)度一致的凝集。見表3。

表3 患者不規(guī)則抗體鑒定結(jié)果

2.4p表型確認(rèn)試驗(yàn) 患者紅細(xì)胞與人源抗-Tja抗體反應(yīng)呈陰性，患者血清與人p表型紅細(xì)胞反應(yīng)呈陰性，試劑OC呈陽性。

2.5抗體效價測定 患者血漿中IgM抗-Tja抗體效價為8；IgG抗-Tja抗體效價為16。見表4。

表4 抗-Tja抗體效價測定結(jié)果

2.6患者親屬血型鑒定 患者哥哥ABO血型正定為B型，反定為O型，正反定型不符，經(jīng)血清學(xué)鑒定患者哥哥為B型p血型?；颊吒赣H和丈夫?yàn)镺型，母親為B型，均為P2型,見表5。

表5 患者親屬血型鑒定結(jié)果

2.7交叉配血情況 患者血清和患者哥哥血標(biāo)本用鹽水介質(zhì)、微柱凝膠卡交叉配血主次側(cè)無凝集無溶血，和其他親屬及庫存血交叉配血試驗(yàn)均不相合,全部是主側(cè)陽性,次側(cè)陰性。

3 討 論

人類紅細(xì)胞P1Pk血型系統(tǒng)舊稱P血型系統(tǒng)，2011年國際輸血協(xié)會確認(rèn)該系統(tǒng)有3個抗原，分別是P1、PK、NOR，將該系統(tǒng)編號為003[6-7]。人P1Pk血型系統(tǒng)缺乏所有抗原時成為罕見的p表型[8]。所有p表型的個體血清中均存在抗體，這種抗體可凝集除p表型之外的所有紅細(xì)胞，并能結(jié)合補(bǔ)體造成溶血[9]，當(dāng)抗體經(jīng)過胎盤，可導(dǎo)致妊娠早期女性的習(xí)慣性流產(chǎn)，因此具有重要的臨床意義。

該患者血清與抗體篩選試劑混勻后立即離心有凝集及溶血，而血漿與抗體篩選試劑混勻后立即離心有凝集無溶血，說明患者血清中存在IgM性質(zhì)的抗體，該抗體具有補(bǔ)體活性；患者血清與譜細(xì)胞混勻后立即離心均出現(xiàn)2+凝集，將血清以2-Me滅活I(lǐng)gM抗體后，立即離心譜細(xì)胞均陰性，微柱凝膠法檢測和所有譜細(xì)胞呈現(xiàn)強(qiáng)度一致的凝集，說明該抗體IgM和IgG混合；綜合以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果懷疑存在抗-Tja抗體[10]，患者紅細(xì)胞與人源抗-Tja抗體反應(yīng)呈陰性，進(jìn)一步證實(shí)該患者為p表型。

含有高頻抗原抗體的患者供血困難，目前可通過自體輸血、親戚互助獻(xiàn)血和求助稀有血型庫等途徑解決。p表型為常染色體隱性遺傳，在其親屬中可能找到相配合的血液[10]。家系調(diào)查發(fā)現(xiàn)患者和其哥哥均為B型，p血型，進(jìn)一步證實(shí)p表型可經(jīng)常在同代中出現(xiàn)[11]。本例擬采用患者自身輸血和其哥哥互助獻(xiàn)血相結(jié)合的方法進(jìn)行術(shù)前備血。

患者于第1次產(chǎn)檢建檔立卡時醫(yī)生只要求鑒定ABO和RHD血型，未做抗體篩查，ABO正反定型不符也沒有引起檢測者的重視，報告為B型，患者懷孕8周時自然流產(chǎn)。因此，為防止漏診或誤診,不規(guī)則抗體篩查有必要列入孕婦產(chǎn)檢項(xiàng)目，特別是對不明原因引起的習(xí)慣性流產(chǎn)患者,需作紅細(xì)胞抗體篩查試驗(yàn),可排除可能由紅細(xì)胞抗體引起的流產(chǎn)，對預(yù)防和治療ABO血型系統(tǒng)以外的新生兒溶血病具有重要的臨床意義。對于該孕婦，產(chǎn)科醫(yī)師和患者溝通，通過監(jiān)測抗體效價水平、大腦中動脈血流峰值等指標(biāo)，指導(dǎo)臨床治療。