楊亞旭 張芳

【摘 要】目的：探究痛風(fēng)濕熱蘊(yùn)結(jié)型患者外周血淋巴細(xì)胞亞群特點(diǎn)。方法：選取2019年1月至2019年12月在南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院風(fēng)濕免疫科門診就診的濕熱蘊(yùn)結(jié)型痛風(fēng)患者96例，健康體檢者50例。通過流式細(xì)胞分析儀檢測(cè)外周抗凝血淋巴細(xì)胞中總T淋巴細(xì)胞、輔助/誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞、抑制/細(xì)胞毒T細(xì)胞、NK細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞等細(xì)胞數(shù)量。結(jié)果：濕熱蘊(yùn)結(jié)型痛風(fēng)組患者淋巴細(xì)胞、抑制/細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞與對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）;女性痛風(fēng)患者總T淋巴細(xì)胞、輔助/誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞明顯低于男性患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。排泄不良型患者NK細(xì)胞明顯低于生成過多型及混合型，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）;排泄不良型痛風(fēng)患者B淋巴細(xì)胞明顯低于混合型，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。結(jié)論：不同性別患者淋巴細(xì)胞亞群分析具有差異;不同尿酸排泄類型濕熱蘊(yùn)結(jié)型痛風(fēng)患者間T淋巴細(xì)胞無(wú)明顯差異，但排泄不良型患者B淋巴細(xì)胞、NK細(xì)胞數(shù)目明顯低于另外2種類型。

【關(guān)鍵詞】 痛風(fēng);濕熱蘊(yùn)結(jié)型;尿酸排泄;淋巴細(xì)胞亞群

痛風(fēng)（gout）是一種慢性炎癥性疾病，主要由于嘌呤代謝失衡、血清尿酸升高而引起關(guān)節(jié)復(fù)發(fā)性炎癥和功能障礙，全世界范圍內(nèi)患病率近年來持續(xù)上升。美國(guó)國(guó)家健康和營(yíng)養(yǎng)檢查調(diào)查，經(jīng)醫(yī)生診斷上報(bào)的痛風(fēng)患病率從26.4‰（1988年至1994年）上升到37.6‰（2007年至2010年）[1]。如果不進(jìn)行有效干預(yù)，反復(fù)發(fā)作可導(dǎo)致慢性痛風(fēng)，最終可導(dǎo)致關(guān)節(jié)損傷、畸形、殘疾[2-3]。世界衛(wèi)生組織2010年全球疾病負(fù)擔(dān)研究表明，1990年至2010年，痛風(fēng)的傷殘調(diào)整生命年（DALYs）延長(zhǎng)了1倍[4]。淋巴細(xì)胞亞群可以有效反映機(jī)體的免疫功能情況，先天性免疫途徑在痛風(fēng)的發(fā)病中至關(guān)重要。淋巴細(xì)胞依據(jù)其表面標(biāo)志物及生物學(xué)功能大致分為T淋巴細(xì)胞（CD3+細(xì)胞）、B淋巴細(xì)胞（CD3-CD19+細(xì)胞）和NK細(xì)胞（CD3-CD16+/56+細(xì)胞）3個(gè)亞群，此外T淋巴細(xì)胞還可以進(jìn)一步分為輔助/誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞（CD3+CD4+細(xì)胞）和抑制/細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞（CD3+CD8+細(xì)胞）[5]。痛風(fēng)的中醫(yī)證型主要分為濕熱蘊(yùn)結(jié)證、濕瘀阻痹證、濕熱夾瘀證、脾虛濕阻證、肝腎陰虛證5型。郭澤瑩等[6]對(duì)

172例痛風(fēng)患者進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析后發(fā)現(xiàn)，濕熱蘊(yùn)結(jié)證比例達(dá)41.9%。目前，對(duì)淋巴細(xì)胞亞群分析的關(guān)注度越來越高，但對(duì)于痛風(fēng)與淋巴細(xì)胞亞群的闡述較少，故本文主要分析濕熱蘊(yùn)結(jié)型痛風(fēng)患者的淋巴細(xì)胞亞群特點(diǎn)。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2019年1月至2019年12月在江蘇省中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院風(fēng)濕免疫科門診就診的濕熱蘊(yùn)結(jié)型痛風(fēng)患者96例為痛風(fēng)組，男88例，女8例;平均年齡（52.53±17.32）歲;平均病程（5.81±4.59）年;平均尿酸水平（494.07±109.1）μmol·L-1[男（495.26±107.98）μmol·L-1，女（492.88±143.11）μmol·L-1];其中尿酸生成過多型5例（5.21%），排泄不良型80例（83.33%），混合型11例（11.46%）。同時(shí)選取50例健康體檢者為對(duì)照組，男34例，女16例;平均年齡（51.40±18.07）歲。所有痛風(fēng)患者均滿足2015年美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)（ACR）/歐洲抗風(fēng)濕病聯(lián)盟（EULAR）痛風(fēng)診斷標(biāo)準(zhǔn)[7]及2012年《中醫(yī)病證診斷療效標(biāo)準(zhǔn)》中痛風(fēng)濕熱蘊(yùn)結(jié)型診斷標(biāo)準(zhǔn)[8]。排除合并其他免疫性疾病或代謝性疾病者;合并嚴(yán)重的心、肝、肺、腎等臟器功能損害，惡性腫瘤，有病毒感染者，妊娠及哺乳期婦女;近2周有感染性疾病者。

1.2 研究方法 用抗凝采血管采集患者空腹靜脈血2 mL。使用美國(guó)貝克曼公司FC-500流式細(xì)胞分析儀檢測(cè)各部分細(xì)胞比例?？俆淋巴細(xì)胞為CD3+T細(xì)胞，輔助/誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞為CD3+CD4+細(xì)胞，抑制/細(xì)胞毒T細(xì)胞為CD3+CD8+細(xì)胞，NK細(xì)胞為CD3-CD16+/56+細(xì)胞，B淋巴細(xì)胞為CD3-CD19+細(xì)胞。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 24.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料符合正態(tài)分布以表示，2組間比較采用t檢驗(yàn)，多組間進(jìn)行單因素方差分析，組間進(jìn)行多重比較;不符合正態(tài)分布者轉(zhuǎn)化為正態(tài)分布后行統(tǒng)計(jì)分析。以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 濕熱蘊(yùn)結(jié)型痛風(fēng)患者與對(duì)照組淋巴細(xì)胞亞群比較 濕熱蘊(yùn)結(jié)型痛風(fēng)組患者的淋巴細(xì)胞、抑制/細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。總T淋巴細(xì)胞、輔助/誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞、NK細(xì)胞2組間比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。見表1。

2.2 不同性別濕熱蘊(yùn)結(jié)型痛風(fēng)患者淋巴細(xì)胞亞群比較 女性痛風(fēng)患者總T淋巴細(xì)胞、輔助/誘導(dǎo)細(xì)胞淋巴細(xì)胞明顯低于男性患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。淋巴細(xì)胞、抑制/細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞、NK細(xì)胞2組間比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。見表2。

2.3 不同尿酸排泄類型患者淋巴細(xì)胞亞群比較 排泄不良型痛風(fēng)患者NK細(xì)胞明顯低于生成過多型及混合型，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）;其他細(xì)胞組間比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。見表3。

2.4 不同尿酸排泄類型患者B淋巴細(xì)胞及NK細(xì)胞組間多重比較 排泄不良型痛風(fēng)患者B淋巴細(xì)胞與混合型比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。排泄不良型痛風(fēng)患者NK細(xì)胞與生成過多型及混合型比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。見表4。

3 討 論

痛風(fēng)是炎癥性關(guān)節(jié)炎的最常見原因，發(fā)達(dá)國(guó)家和發(fā)展中國(guó)家的發(fā)病率和患病率均在增加[9]。2017年全球痛風(fēng)估計(jì)為744萬(wàn)例（發(fā)病率0.097%），患病率為0.54%，造成128萬(wàn)DALYs（占所有DALYs的0.051%）。痛風(fēng)的患病人群男性均高于女性，引起的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)也呈線性增加[10]。痛風(fēng)屬中醫(yī)學(xué)“痹病”“白虎病”“歷節(jié)風(fēng)”范疇。張有為等[11]發(fā)現(xiàn)，濕熱蘊(yùn)結(jié)證痛風(fēng)占56.99%，提示濕熱蘊(yùn)結(jié)是臨床痛風(fēng)的常見中醫(yī)證型。體內(nèi)尿酸水平的平衡主要依靠尿酸生成和排泄來維持。尿酸的排泄主要通過腸道和腎臟，腎小球?yàn)V過、重吸收和分泌是個(gè)復(fù)雜的過程。一般情況下，約90%的腎小球?yàn)V過尿酸鹽被重吸收回血液中，只有10%左右被排泄。但是，大多數(shù)痛風(fēng)患者的尿酸排泄效率低下，導(dǎo)致高尿酸血癥。超過90%的痛風(fēng)患者屬于尿酸排泄不良型[12]。

T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)細(xì)胞免疫，反映了機(jī)體總體細(xì)胞的免疫狀態(tài)，B淋巴細(xì)胞介導(dǎo)體液免疫，NK細(xì)胞介導(dǎo)固有免疫。NK細(xì)胞屬于固有淋巴樣細(xì)胞，其主要功能是為生物體提供針對(duì)感染、自體轉(zhuǎn)化細(xì)胞和同種異體細(xì)胞產(chǎn)生快速免疫反應(yīng)[13-14]。輔助/誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞輔助機(jī)體完成各種免疫活動(dòng)，Th17細(xì)胞和Treg細(xì)胞是其中兩種亞型，Th17細(xì)胞通過分泌白細(xì)胞介素（IL）-17、IL-6等多種炎癥因子介導(dǎo)炎癥反應(yīng)，而Treg分泌IL-10等抑炎因子發(fā)揮抑制自身免疫應(yīng)答的作用，在機(jī)體受病毒侵襲時(shí)第一時(shí)間進(jìn)行防御和消滅[15]。抑制/細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞可抑制機(jī)體的免疫應(yīng)答，只有兩者保持動(dòng)態(tài)平衡才能維持機(jī)體正常的細(xì)胞免疫[16]。NK細(xì)胞不需要用抗原引發(fā)即可完全發(fā)揮功能，通過識(shí)別主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ類分子或直接與細(xì)胞表面配體結(jié)合從而直接殺死靶細(xì)胞。NK細(xì)胞是最早到達(dá)組織炎癥部位并通過釋放大量包括γ干擾素等細(xì)胞因子來對(duì)抗感染、腫瘤等免疫應(yīng)答的固有免疫細(xì)胞[17]。

本研究發(fā)現(xiàn)，痛風(fēng)患者輔助/誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞、NK細(xì)胞略低于對(duì)照組，而B淋巴細(xì)胞、抑制/細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞略高于對(duì)照組，可見痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎疾病發(fā)展也與整體免疫失衡相關(guān)。余文戈等[18]同樣發(fā)現(xiàn)，痛風(fēng)患者體內(nèi)NK細(xì)胞數(shù)量較正常對(duì)照組明顯減少，考慮可能與其參與體內(nèi)炎癥反應(yīng)有關(guān);同時(shí)發(fā)現(xiàn)，痛風(fēng)患者CD4+T細(xì)胞較正常對(duì)照組升高，考慮可能與巨噬細(xì)胞釋放出抗原信息傳遞給CD4+

T細(xì)胞有關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)，痛風(fēng)濕熱蘊(yùn)結(jié)型患者輔助/誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞較對(duì)照組略減少;平時(shí)臨床觀察發(fā)現(xiàn)，男性吸煙患者輔助/誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞較正常組減少。痛風(fēng)患者常合并不良飲食及煙酒等生活習(xí)慣，此結(jié)果可能也與此有關(guān)，但具體原因仍需后期進(jìn)一步明確。痛風(fēng)濕熱蘊(yùn)結(jié)型患者抑制/細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞明顯高于對(duì)照組，考慮痛風(fēng)使免疫功能調(diào)節(jié)發(fā)生障礙，抑炎因子分泌量隨之減少，使得機(jī)體處于免疫抑制狀態(tài)。排泄不良型患者NK細(xì)胞含量較另外2組下降更加明顯，具體原因是否與患者血尿酸水平、飲食生活習(xí)慣、病程、是否合并痛風(fēng)石等相關(guān)，仍需后續(xù)進(jìn)一步研究明確。劉炳等[19]對(duì)四川宜賓健康成人外周淋巴細(xì)胞亞群進(jìn)行分析后發(fā)現(xiàn)，不同地區(qū)患者在年齡、性別間存在差異。本研究也發(fā)現(xiàn)，不同性別患者在淋巴細(xì)胞亞群間存在差異。但此次研究濕熱蘊(yùn)結(jié)型痛風(fēng)女性患者、混合型、生成過多型患者樣本量較少，仍需后續(xù)大樣本繼續(xù)研究。

參考文獻(xiàn)

[1] JURASCHEK SP，MILLER ER，GELBER AC.Body mass index，obesity，and prevalent gout in the United States in 1988—1994 and 2007—2010[J].Arthritis Care Res（Hoboken），2013，65（1）：127-132.

[2] 李丹，張劍勇.痛風(fēng)現(xiàn)代流行病學(xué)及降尿酸藥物研究進(jìn)展[J].風(fēng)濕病與關(guān)節(jié)炎，2016，5（4）：73-76.

[3] PASCART T，NORBERCIAK L，EA HK，et al.Patients with early-onset gout and development of earlier severe joint involvement and metabolic comorbid conditions：results from a cross-sectional epidemiologic survey[J].Arthritis Care Res，2019，71（7）：986-992.

[4] SMITH E，HOY D，CROSS M，et al.The global burden of gout：estimates from the global burden of disease 2010 study[J].Ann Rheum Dis，2014，73（8）：1470-1476.

[5] 周建光，楊梅，曹海濤，等.淋巴細(xì)胞亞群的檢測(cè)在臨床的應(yīng)用[J].東南國(guó)防醫(yī)藥，2015，17（3）：298-300，321.

[6] 郭澤瑩，張劍勇，張燕英，等.嶺南地區(qū)痛風(fēng)危險(xiǎn)因素與中醫(yī)證型相關(guān)性分析[J].中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2018，24（1）：57-59，63.

[7] NEOGI T，JANSEN TL，DALBETH N，et al.2015 Gout classification criteria：an American College of Rheumatology/European League Against Rheumatism collaborative initiative[J].Ann Rheum Dis，2015，74（10）：1789-1798.

[8] 國(guó)家中醫(yī)藥管理局.中醫(yī)病證診斷療效標(biāo)準(zhǔn)[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2012：46.

[9] WEIFENG ZHU，YAN DENG，XIAODONG ZHOU.Multiple Membrane Transporters and Some Immune Regulatory Genes are Major Genetic Factors to Gout[J].

Open Rheumatol J，2018，24（12）：94-113.

[10] CAMILLA MATTIUZZI，GIUSEPPE LIPPI.Recent updates on worldwide gout epidemiology[J].Clin Rheumatol，2019，39（4）：1061-1063.

[11] 張有為，楊軍琪，李小宏.痛風(fēng)患者的中醫(yī)證型及發(fā)病特點(diǎn)[J].臨床醫(yī)學(xué)研究與實(shí)踐，2018，3（36）：136-138.

[12] PEREZ-RUIZ F，CALABOZO M，PIJOAN JI，et al.Effect of urate-lowering therapy on the velocity of size reduction of tophi in chronic gout[J].Arthritis Rheum，2002，47（4）：356-360.

[13] ALEXANDER J DAVIES，SIMON RINALDI，MICHAEL COSTIGAN，et al.Cytotoxic Immunity in Peripheral Nerve Injury and Pain[J].Front Neurosci，2020，12（14）：142.

[14] DEL ZOTTO G，MARCENARO E，VACCA P，et al.Markers and function of human NK cells in normal and pathological conditions[J].Cytometry B Clin Cytom，2017，92（2）：100-114.

[15] 吳翠萍，趙利.外周血T淋巴細(xì)胞亞群變化特點(diǎn)及血清因子表達(dá)水平的研究[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2018，15（4）：523-525.

[16] 李亞波，林云，鄒映東，等.惡性腫瘤患者免疫功能與抗核抗體的關(guān)系研究[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2019，16（1）：48-50.

[17] S?BASTIEN VIEL，R?MI PESCARMONA，ALEXANDRE BELOT，et al.A Case of Type 2 Hypersensitivity to Rasburicase Diagnosed with a Natural Killer Cell Activation Assay[J].Front Immunol，2018，21（9）：110.

[18] 余文戈，管金菊.痛風(fēng)患者外周血淋巴細(xì)胞亞群分布異常的臨床研究[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2019，29（14）：1721-1723.

[19] 劉炳，郭欣，鄭凡，等.四川省宜賓地區(qū)健康成人外周血淋巴細(xì)胞亞群參考區(qū)間的建立[J].現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2019，34（5）：101-105.

收稿日期：2020-03-21;修回日期：2020-05-01