李建英，劉春麗，尚陸娥，楊珍福，羅孝坤，劉紹雄**

（1.云南省供銷(xiāo)合作社科學(xué)研究所，云南 昆明 650221；2.中華全國(guó)供銷(xiāo)合作總社昆明食用菌研究所，云南 昆明 650221）

羊肚菌（Morchella spp.）是一種珍貴的食（藥）用菌，隸屬于子囊菌門(mén)（Ascomycota） 盤(pán)菌綱（Discomycetes） 盤(pán)菌目（Pezizales） 羊肚菌科（Morchellaceae），是羊肚菌屬（Morchella） 真菌的統(tǒng)稱(chēng)。因其形似羊肚狀而得名，又稱(chēng)羊肚蘑、蜂窩磨、包谷菌等[1-4]。

羊肚菌具有較高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值，市場(chǎng)需求量大，野生資源較少，是人工栽培食用菌產(chǎn)業(yè)中的熱門(mén)栽培品種。據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，2012年全國(guó)羊肚菌栽培面積約200 hm2[5]，2018年～2019年達(dá)到8 000 hm2～9 333 hm2[6]，發(fā)展趨勢(shì)迅猛。羊肚菌栽培發(fā)展快速，但其產(chǎn)量不穩(wěn)定、重現(xiàn)性差等問(wèn)題尚未解決，成為產(chǎn)業(yè)發(fā)展過(guò)程中的“隱疾”，又由于其較高的成本投入，因此羊肚菌栽培存在著較大的風(fēng)險(xiǎn)。造成羊肚菌產(chǎn)量不穩(wěn)定的原因有很多，環(huán)境條件無(wú)法完全人為控制，對(duì)其生活史了解不夠清楚，與其他微生物間的相互作用尚不明確等，都可能是影響羊肚菌產(chǎn)量的重要因素。

在之前的研究中，發(fā)現(xiàn)一些霉菌、黑腐皮殼菌等對(duì)羊肚菌菌絲生長(zhǎng)、出菇有一定促進(jìn)作用[7-8]，但都缺乏精確的數(shù)據(jù)支撐。朱斗錫[9]研究中羊肚菌生長(zhǎng)中發(fā)現(xiàn)了“伴生菌”，認(rèn)為在特定的條件下形成菌核（sclerotium）促進(jìn)羊肚菌的萌發(fā)，但也沒(méi)有列出確切的研究證據(jù)。羊肚菌是否具有自己的伴生菌，在自身生長(zhǎng)過(guò)程中產(chǎn)生作用，通過(guò)影響子實(shí)體產(chǎn)生來(lái)影響羊肚菌的產(chǎn)量，目前尚未可知。但在羊肚菌栽培過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，大棚中一般都有盤(pán)菌出現(xiàn)，被稱(chēng)為羊肚菌的出菇標(biāo)志，且盤(pán)菌科和羊肚菌科同屬于盤(pán)菌目，在分類(lèi)地位上較為接近。如果盤(pán)菌是羊肚菌的伴生菌，兩者在相同環(huán)境中就會(huì)協(xié)同生長(zhǎng)。

鑒于此，通過(guò)統(tǒng)計(jì)10個(gè)羊肚菌栽培大棚中盤(pán)菌生長(zhǎng)情況和羊肚菌產(chǎn)量，并對(duì)盤(pán)菌菌絲和羊肚菌菌絲進(jìn)行拮抗試驗(yàn)研究，探索其作為羊肚菌伴生菌的可能性。

1 材料和方法

1.1 供試菌種

羊肚菌101、中菌羊肚菌1號(hào)、晉寧羊肚菌3號(hào)，3個(gè)品種均為羊肚菌屬中的六妹羊肚菌（Morchella sextelata），由中華全國(guó)供銷(xiāo)合作總社昆明食用菌研究所菌種與資源研究中心提供。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 羊肚菌栽培

按照羊肚菌常規(guī)栽培方法進(jìn)行羊肚菌栽培。10個(gè)羊肚菌大棚，栽培3個(gè)羊肚菌品種（1號(hào)～4號(hào)4個(gè)大棚為羊肚菌101，5號(hào)～9號(hào)5個(gè)大棚為中菌羊肚菌1號(hào)，10號(hào)大棚為晉寧羊肚菌3號(hào)）。栽培方式為作畦撒播，每畝菌種使用量為150 kg～250 kg，播種完成后覆土2 cm～4 cm，保證將菌種全部覆蓋，后進(jìn)行覆膜，起到保濕、保溫、防雨的作用，同時(shí)能夠減少雜草的生長(zhǎng)。

播種后10 d，播種廂面布滿菌絲，出現(xiàn)菌霜（大量白色的分生孢子）時(shí)放置營(yíng)養(yǎng)袋，放置營(yíng)養(yǎng)袋時(shí)將袋子一側(cè)劃口后緊貼廂面，用量為3袋/m2。菌絲生長(zhǎng)階段需土壤含水量約20%，出菇前澆2次重水，期間間隔15 d，保證水分充足。

1.2.2 羊肚菌產(chǎn)量和盤(pán)菌統(tǒng)計(jì)

每個(gè)大棚中隨機(jī)圈出1 m2的5個(gè)樣方進(jìn)行羊肚菌產(chǎn)量統(tǒng)計(jì)，計(jì)算平均數(shù)；再按照每個(gè)大棚實(shí)際栽培面積250 m2，計(jì)算出各個(gè)大棚中的羊肚菌產(chǎn)量。

盤(pán)菌產(chǎn)量按照肉眼可見(jiàn)的密度來(lái)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，并測(cè)量其圓盤(pán)形態(tài)大小，對(duì)子實(shí)體樣品進(jìn)行ITS序列測(cè)定和比對(duì)分析。

1.2.3 拮抗試驗(yàn)

1） 菌絲分離

采用組織分離的方法，在接種室無(wú)菌操作臺(tái)中進(jìn)行無(wú)菌操作，切取小塊羊肚菌子實(shí)體在75%的酒精中浸泡2 min，在滅菌的純凈水中浸泡清洗3次～5次，放置在吸水紙上洗干水分后接種到PDA培養(yǎng)基中，放置在24℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)，7 d后即獲得羊肚菌菌絲培養(yǎng)物。應(yīng)用同樣的方法獲得盤(pán)菌菌絲培養(yǎng)物。

2） 拮抗試驗(yàn)

在接種室無(wú)菌操作臺(tái)中分別?。?.5×0.5） cm2大小的羊肚菌菌絲和盤(pán)菌菌絲培養(yǎng)物，接種在同一個(gè)PDA平板中，24℃培養(yǎng)箱中進(jìn)行對(duì)峙培養(yǎng)，對(duì)峙雙方為羊肚菌和其大棚中產(chǎn)生的對(duì)應(yīng)盤(pán)菌。觀察盤(pán)菌和羊肚菌菌絲的拮抗反應(yīng)。

2 結(jié)果與分析

2.1 盤(pán)菌與羊肚菌產(chǎn)量的相關(guān)性

在10個(gè)羊肚菌栽培大棚中產(chǎn)生了4種形態(tài)的盤(pán)菌，圓盤(pán)形態(tài)和ITS測(cè)序結(jié)果見(jiàn)圖1、表1，羊肚菌產(chǎn)量和盤(pán)菌數(shù)量統(tǒng)計(jì)結(jié)果見(jiàn)表2。

表1 盤(pán)菌形態(tài)和序列測(cè)定結(jié)果Tab.1 Morphology of Peziza spp.and sequence determination results

由圖1、表1可知，在10個(gè)大棚中栽培了同屬于六妹羊肚菌（M.sextelata） 的3個(gè)不同羊肚菌品種，10個(gè)大棚產(chǎn)生了4種不同形態(tài)的盤(pán)菌。根據(jù)ITS序列在NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)中的比對(duì)結(jié)果，將盤(pán)菌1型鑒定到盤(pán)菌目，盤(pán)菌2型和盤(pán)菌3型鑒定到盤(pán)菌屬，盤(pán)菌4型鑒定到多變盤(pán)菌種（P.varia），且4個(gè)不同類(lèi)型的盤(pán)菌ITS序列差異較大，確定為不同的種。10個(gè)大棚中都是六妹羊肚菌，產(chǎn)生了4種不同類(lèi)型的盤(pán)菌，說(shuō)明羊肚菌和盤(pán)菌間不存在種間生長(zhǎng)特異性。1個(gè)羊肚菌大棚會(huì)產(chǎn)生多種盤(pán)菌，說(shuō)明盤(pán)菌的產(chǎn)生與羊肚菌的品種、環(huán)境條件都沒(méi)有特異性關(guān)系。

表2 盤(pán)菌生長(zhǎng)情況和羊肚菌產(chǎn)量統(tǒng)計(jì)Tab.2 Statistics of the Peziza spp.and the yield of Morchella sextelata

由表2可見(jiàn)，所有羊肚菌栽培大棚中都自發(fā)產(chǎn)生了盤(pán)菌，但羊肚菌產(chǎn)量和盤(pán)菌的數(shù)量之間沒(méi)有相關(guān)性。栽培羊肚菌的產(chǎn)地基本都會(huì)產(chǎn)生盤(pán)菌，兩者之間應(yīng)該是存在著一些聯(lián)系，但盤(pán)菌是否是羊肚菌出菇的關(guān)鍵還未可知，還需要做更多的分析研究。

2.2 盤(pán)菌與羊肚菌的拮抗反應(yīng)

盤(pán)菌菌絲和羊肚菌菌絲拮抗試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 盤(pán)菌和羊肚菌的拮抗作用Tab.3 Antagonistic action of Peziza spp.and Morchella sextelata

由表3可知，分離得到的4個(gè)盤(pán)菌，菌絲與羊肚菌菌絲間都不存在拮抗反應(yīng)，且在試驗(yàn)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，盤(pán)菌和羊肚菌菌絲都能正常生長(zhǎng)，并不存在任何一方生長(zhǎng)緩慢、受抑制的情況。

3 結(jié)論

羊肚菌栽培大棚中基本都會(huì)自發(fā)產(chǎn)生盤(pán)菌，且通過(guò)拮抗試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，盤(pán)菌菌絲和羊肚菌菌絲之間不存在拮抗反應(yīng)，雙方都能在同一培養(yǎng)基中快速生長(zhǎng)，滿足了作為伴生菌的生長(zhǎng)特性。

通過(guò)統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)，羊肚菌產(chǎn)量和盤(pán)菌的數(shù)量之間沒(méi)有相關(guān)性，盤(pán)菌滿足了作為羊肚菌伴生菌的生長(zhǎng)條件，但盤(pán)菌是否作為羊肚菌伴生菌，盤(pán)菌和羊肚菌之間是否存在互利共生，是否對(duì)羊肚菌子實(shí)體的產(chǎn)生有影響，還需要做更多的研究。且在研究過(guò)程中發(fā)現(xiàn)盤(pán)菌子實(shí)體抗感染能力較弱，極易被霉菌感染，之后傳染周?chē)难蚨蔷?，影響羊肚菌產(chǎn)量，如果作為伴生菌，就需要對(duì)其抗感染性進(jìn)行進(jìn)一步的研究。