魏 方，趙霏霏，楊銀鳳*

(1.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 獸醫(yī)學(xué)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010018；2.內(nèi)蒙古自治區(qū)基礎(chǔ)獸醫(yī)學(xué)重點實驗室，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010018)

防御素是一類富含半胱氨酸的兩親性帶正電荷的內(nèi)源性小分子多肽，是先天免疫系統(tǒng)的效應(yīng)分子，具有有效的抗細菌、真菌和病毒等微生物活性[1]，并廣泛存在于植物、昆蟲和脊椎動物等生物界中。脊椎動物身體內(nèi)的防御素基于其結(jié)構(gòu)和二硫鍵連接方式不同可以進一步分為α-防御素、β-防御素和θ-防御素3種類型[2]。其中，β-防御素已被廣泛研究，其由上皮細胞和免疫細胞群產(chǎn)生，具有廣譜的抗菌功效，可作用于革蘭陽性菌和革蘭陰性菌以及真菌和包膜病毒，進一步調(diào)節(jié)微生物和宿主之間的串?dāng)_和維持黏膜系統(tǒng)健康及動態(tài)平衡[1-3]。因此，利用防御素生物學(xué)特性代替抗生素治療微生物感染將成為一種新的治療方法。

酵母相關(guān)產(chǎn)物存在于我們?nèi)粘Ｉ畹姆椒矫婷媲曳N類繁多。其除了作為食品添加劑和護膚成分被應(yīng)用于食品和化妝品方面，還作為飼料添加劑被應(yīng)用于養(yǎng)殖動物飼料中，對動物健康和生產(chǎn)起積極作用。2013年農(nóng)業(yè)部將釀酒酵母培養(yǎng)物、釀酒酵母提取物和釀酒酵母細胞壁3種釀酒酵母相關(guān)產(chǎn)物從《飼料添加劑品種目錄》轉(zhuǎn)入《飼料原料目錄》，可見其在動物養(yǎng)殖業(yè)中占有重要位置。釀酒酵母培養(yǎng)物是以釀酒酵母為菌種，經(jīng)固體發(fā)酵、濃縮、干燥等處理后獲得的天然發(fā)酵產(chǎn)品，其主要有效成分為釀酒酵母細胞胞外代謝產(chǎn)物，含有甘露聚糖、維生素、蛋白質(zhì)、氨基酸、核苷酸和肽等多種物質(zhì)，具有免疫調(diào)節(jié)功能。釀酒酵母提取物是以釀酒酵母為菌種，經(jīng)液體發(fā)酵后獲得菌體，再經(jīng)自溶或機械破碎等處理方法使菌體破碎后，分離獲得可溶性組分并濃縮干燥所得產(chǎn)品，其主要成分為釀酒酵母細胞胞內(nèi)物質(zhì)。關(guān)于釀酒酵母培養(yǎng)物和提取物的研究主要是其被試驗動物攝入后對試驗動物生產(chǎn)、健康和胃腸道菌群及形態(tài)等方面的影響，而有關(guān)其與防御素表達的關(guān)系研究報道卻是很少見到。近年來，相關(guān)研究表明，飼喂酵母培養(yǎng)物對哺乳期犢牛和斷奶仔豬的生長性能、腸道健康和機體免疫均有促進作用[4-5]。劉明等[6]在研究酵母提取物對斷奶仔豬生產(chǎn)性能、腹瀉發(fā)生率和腸道形態(tài)影響中發(fā)現(xiàn)，與對照組相比，添加酵母提取物組斷奶仔豬在飼養(yǎng)后半階段日增重顯著增加，并在試驗第1，2，4周腹瀉發(fā)生率顯著降低，且腸絨毛生長也得以促進。胡勝蘭[7]在類似研究中發(fā)現(xiàn)，短期日糧添加富含核苷酸的酵母提取物雖然對斷奶仔豬生長性能無顯著性影響，但腎質(zhì)量顯著提高，且改善了腸道益生菌增殖并抑制致病菌生長；甚至能夠在非潔凈環(huán)境中上調(diào)炎性細胞因子進而提高斷奶仔豬腸道免疫應(yīng)答。本課題組研究團隊之前進行了釀酒酵母菌、釀酒酵母菌細胞壁及其組分甘露聚糖和β-葡聚糖對SBD-1表達影響的研究，發(fā)現(xiàn)它們均可不同程度誘導(dǎo)SBD-1表達[8-11]。然而，關(guān)于釀酒酵母培養(yǎng)物和提取物對SBD-1表達影響的研究尚未見相關(guān)報道。

本試驗采用qPCR技術(shù)檢測釀酒酵母培養(yǎng)物和提取物在不同質(zhì)量濃度、不同時間段刺激ORECs后，SBD-1 mRNA的表達變化。為從益生菌胞外代謝產(chǎn)物和胞內(nèi)物質(zhì)與上皮細胞防御素表達關(guān)系的角度研究防御素發(fā)揮免疫作用的途徑和機制提供一定的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料綿羊瘤胃組織塊取自內(nèi)蒙古自治區(qū)呼和浩特市北亞屠宰場屠宰的健康綿羊。取幾塊瘤胃組織塊用提前準(zhǔn)備好的滅菌生理鹽水洗去內(nèi)容物后，放入滅菌生理鹽水中帶回實驗室進行下一步操作。

1.2 綿羊瘤胃上皮細胞(ORECs)原代培養(yǎng)從瘤胃組織上剝離黏膜層，將黏膜層轉(zhuǎn)至超凈工作臺用含青、鏈霉素的PBS緩沖液清洗數(shù)遍，直到溶液澄清為止。然后利用胰蛋白酶連續(xù)消化法，在37℃條件下，連續(xù)消化黏膜層6次，消化時間依次為30，20，15，10，8，5 min，每次消化完成后，倒置顯微鏡下觀察消化液，使用200目篩子過濾收集含有較多圓而亮細胞的消化液并用含20%胎牛血清的DMEM/F12終止消化。最后一次消化液收集完成后，1 600 r/min離心8 min棄去上清液，用PBS緩沖液重懸細胞沉淀，離心棄去上清后，用完全培養(yǎng)基混勻細胞并裝入細胞培養(yǎng)瓶，放在37℃、5%CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)4 d后更換培養(yǎng)基，之后每隔2 d更換1次培養(yǎng)基。當(dāng)單層細胞匯合生長大約鋪滿瓶底80%以上時，即可將細胞消化傳代擴大培養(yǎng)用于后續(xù)試驗。

1.3 釀酒酵母培養(yǎng)物和提取物溶液配制

1.3.1釀酒酵母培養(yǎng)物溶液配制 釀酒酵母培養(yǎng)物溶液由達農(nóng)威益康XP(達農(nóng)威生物發(fā)酵工程技術(shù)(深圳)有限公司)提供，為淺橙色粗粉溶于PBS溶液制成。稱取0.6 g達農(nóng)威益康XP放入30 mL PBS溶液中，渦旋將其充分混合并在搖床上室溫溫育1 h，使大部分粉末溶解。然后，2 400 r/min離心10 min除去剩余的固體，收集上清液，在超凈工作臺中使用0.22 μm過濾器無菌過濾上清液，得到20 g/L 釀酒酵母培養(yǎng)物溶液備用。

1.3.2釀酒酵母提取物溶液配制 釀酒酵母提取物溶液由YEAST EXTRACT(OXOID公司產(chǎn)品，為淺橙色粉末)溶于PBS溶液制成。配制方法同1.3.1。

1.4 釀酒酵母培養(yǎng)物和提取物刺激ORECs的試驗設(shè)計每孔加入200 mg/L釀酒酵母培養(yǎng)物的DMEM/F12培養(yǎng)基刺激ORECs 作為刺激組，同時用DMEM/F12培養(yǎng)基作為空白對照組，放置于37℃溫箱刺激2 h后，棄去培養(yǎng)基，用PBS清洗3次，再重新加入DMEM/F12培養(yǎng)基，繼續(xù)誘導(dǎo)培養(yǎng)6，12，18，24，30 h后分別提取各組ORECs總RNA。然后利用qPCR技術(shù)檢測SBD-1 mRNA 的表達量，以篩選出釀酒酵母培養(yǎng)物誘導(dǎo)ORECs SBD-1 mRNA 表達的最佳時間；每孔加入不同質(zhì)量濃度(0，100，200，300，400 mg/L)釀酒酵母培養(yǎng)物的DMEM/F12培養(yǎng)基刺激ORECs，置于37℃溫箱刺激2 h后，棄去培養(yǎng)基，用PBS清洗3次，再重新加入DMEM/F12培養(yǎng)基，繼續(xù)誘導(dǎo)培養(yǎng)最佳時間后提取各組ORECs總RNA。然后利用qPCR技術(shù)檢測SBD-1 mRNA 的表達量，以篩選出釀酒酵母培養(yǎng)物誘導(dǎo)ORECs SBD-1 mRNA 表達的最佳質(zhì)量濃度。釀酒酵母提取物對ORECs的刺激試驗設(shè)計同釀酒酵母培養(yǎng)物。

1.5 MTT法檢測釀酒酵母培養(yǎng)物和提取物對ORECs的毒性作用消化收集生長狀態(tài)良好的ORECs，調(diào)整細胞懸液濃度以每孔2×104個接種于96孔板，以含不同質(zhì)量濃度(0，100，200，300，400 mg/L)釀酒酵母培養(yǎng)物的DMEM/F12培養(yǎng)基刺激ORECs 2 h后繼續(xù)誘導(dǎo)培養(yǎng)30 h；棄去培養(yǎng)基，用PBS清洗3次，每孔加入10 μL MTT溶液(5 g/L)和100 μL DMEM/F12培養(yǎng)基， 37℃、5% CO2培養(yǎng)4 h后，終止培養(yǎng)；使用DMSO溶解，使用多功能酶標(biāo)儀(SynergyTMH4，Biotek)在490 nm處檢測各孔的密度。釀酒酵母提取物對ORECs毒性作用的檢測同釀酒酵母培養(yǎng)物。

1.6 細胞RNA提取和反轉(zhuǎn)錄根據(jù)RNA提取試劑盒(Axygen公司產(chǎn)品)說明書操作，提取ORECs總RNA，使用多功能酶標(biāo)儀檢測所提RNA在260，280 nm波長下的吸光度(D值)，并分析其純度和濃度。然后將所提RNA按照反轉(zhuǎn)錄試劑盒(TaKaRa，RR047A)進行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，將得到的cDNA保存于-20℃?zhèn)溆谩?/p>

1.7 實時熒光定量PCR(qPCR)內(nèi)參基因β-actin和目的基因SBD-1各自的基因特異性引物的設(shè)計與合成均由上海生工生物有限公司完成(表1)。以cDNA為模板，參照張曼等[10]qPCR試驗方法檢測目的基因SBD-1相對表達量。每個樣品均進行3次重復(fù)反應(yīng)。

1.8 統(tǒng)計分析分別使用SPSS軟件和GraPhPad Prism 5軟件對試驗相關(guān)數(shù)據(jù)結(jié)果進行統(tǒng)計學(xué)分析和圖片制作。試驗結(jié)果均用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。其中P<0.01表示差異極顯著，P<0.05表示差異顯著。

表1 引物序列及擴增片段大小

2 結(jié)果

2.1 ORECs原代培養(yǎng)及傳代培養(yǎng)ORECs生長狀態(tài)如圖1所示，原代細胞培養(yǎng)4 d后顯微鏡下觀察，可見或大或小的貼壁細胞團均勻分布(圖1 A)；培養(yǎng)8 d后觀察到上皮細胞生長狀態(tài)良好，呈現(xiàn)鵝卵石鋪路狀單層匯合貼滿細胞培養(yǎng)瓶底，此時可使用胰蛋白酶消化細胞進行傳代培養(yǎng)(圖1 B)。細胞傳代培養(yǎng)2 d時顯微鏡下觀察(圖1 C)，上皮細胞單層匯合生長連成片狀，細胞間仍有空隙可供細胞繼續(xù)生長，與原代上皮細胞生長相比，傳代細胞生長速度加快；傳代培養(yǎng)4 d后(圖1 D)，上皮細胞緊湊排列、密集生長，幾乎鋪滿細胞培養(yǎng)瓶底。

圖1 ORECs原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)(100×) A.原代培養(yǎng)4 d的ORECs；B.原代培養(yǎng)8 d的ORECs；C.傳代培養(yǎng)2 d的ORECs；D.傳代培養(yǎng)4 d的ORECs

2.2 釀酒酵母培養(yǎng)物和提取物對ORECs的毒性作用本試驗設(shè)置5個質(zhì)量濃度梯度(0，100，200，300，400 mg/L)的釀酒酵母培養(yǎng)物和提取物分別刺激ORECs 2 h，誘導(dǎo)培養(yǎng)30 h后，再利用MTT法檢測各孔中上皮細胞存活率，以確定釀酒酵母培養(yǎng)物和提取物對ORECs毒性的影響，結(jié)果如圖2所示。不同質(zhì)量濃度釀酒酵母提取物和培養(yǎng)物刺激上皮細胞后，細胞存活率同對照相比無顯著性差異(圖2)，表明100，200，300，400 mg/L質(zhì)量濃度釀酒酵母提取物和培養(yǎng)物對上皮細胞無毒性。

2.3 β-actin和SBD-1基因qPCR擴增結(jié)果

2.3.1β-actin和SBD-1基因qPCR擴增產(chǎn)物特異性檢測 以所提RNA反轉(zhuǎn)錄所得的cDNA為模板，使用上海生工生物工程有限公司設(shè)計合成的目的基因SBD-1和內(nèi)參基因β-actin引物進行qPCR擴增反應(yīng)。其擴增曲線如圖3 A，B所示，可見擴增效果良好。溶解曲線如圖3 C，D所示，觀察發(fā)現(xiàn)目的基因SBD-1和內(nèi)參基因β-actin溶解曲線分別在84℃和88.5℃處出現(xiàn)單一溶解峰，均未有雜峰出現(xiàn)，且單一溶解峰所處的Tm值同合成引物預(yù)期產(chǎn)物Tm值相同，表明qPCR擴增產(chǎn)物為單一且具有特異性的產(chǎn)物。

圖2 釀酒酵母培養(yǎng)物和提取物對ORECs活性影響 A.不同質(zhì)量濃度釀酒酵母提取物對ORECs活性影響；B.不同質(zhì)量濃度釀酒酵母培養(yǎng)物對ORECs活性影響

圖3 β-actin和SBD-1基因qPCR擴增曲線及溶解曲線 A.SBD-1基因qPCR擴增曲線;B.β-actin基因qPCR擴增曲線;C.SBD-1基因qPCR溶解曲線;D.β-actin基因qPCR溶解曲線

2.3.2β-actin和SBD-1基因qPCR擴增產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳鑒定 利用1%瓊脂糖凝膠電泳法分析鑒定β-actin和SBD-1基因qPCR擴增產(chǎn)物，試驗結(jié)果如圖4所示，分別在約208 bp和133 bp處可見特異性單一條帶且無二聚體出現(xiàn)，特異性單一條帶大小同設(shè)計引物的理論片段大小一致,證明qPCR擴增產(chǎn)物確實為β-actin和SBD-1基因的擴增產(chǎn)物。

2.4 釀酒酵母培養(yǎng)物和提取物刺激ORECs誘導(dǎo)SBD-1表達

2.4.1釀酒酵母培養(yǎng)物刺激ORECs 對SBD-1 mRNA表達的影響 為了確定釀酒酵母培養(yǎng)物對ORECs SBD-1 mRNA表達的影響，本試驗首先用200 mg/L釀酒酵母培養(yǎng)物刺激ORECs 2 h后繼續(xù)誘導(dǎo)培養(yǎng)ORECs 6，12，18，24，30 h，同時設(shè)置未刺激組為空白對照。觀察到除了誘導(dǎo)培養(yǎng)12 h組SBD-1 mRNA表達與未刺激組無顯著性差異以外(P>0.05)，其他組SBD-1 mRNA表達均極顯著高于未刺激組(P<0.01)，且誘導(dǎo)培養(yǎng)ORECs 6 h時SBD-1 mRNA的表達量達到最大(圖5 A)。然后用不同質(zhì)量濃度(0，100，200，300，400 mg/L)的釀酒酵母培養(yǎng)物刺激ORECs 2 h，誘導(dǎo)培養(yǎng) 6 h，發(fā)現(xiàn)不同質(zhì)量濃度釀酒酵母培養(yǎng)物刺激細胞均能誘導(dǎo)SBD-1 mRNA表達且顯著高于對照組(P<0.01)，其中400 mg/L質(zhì)量濃度釀酒酵母培養(yǎng)物刺激組SBD-1 mRNA表達量最大，200 mg/L質(zhì)量濃度釀酒酵母培養(yǎng)物刺激組SBD-1 mRNA表達量次之(圖5 B)。由此可知，400 mg/L質(zhì)量濃度釀酒酵母培養(yǎng)物刺激誘導(dǎo)ORECs 6 h后，SBD-1 mRNA表達量達到最大。

圖4 β-actin(A)和SBD-1(B)基因qPCR擴增產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳 M.DL2000 DNA Marker;A1～A4.β-actin 基因qPCR擴增產(chǎn)物;B1～B4.SBD-1基因qPCR擴增產(chǎn)物

2.4.2釀酒酵母提取物刺激ORECs 對SBD-1 mRNA表達的影響 為了確定釀酒酵母提取物對ORECs SBD-1 mRNA表達的影響，本試驗首先用200 mg/L釀酒酵母提取物刺激ORECs 2 h后繼續(xù)誘導(dǎo)培養(yǎng)ORECs 6，12，18，24，30 h，同時設(shè)置未刺激組為空白對照。結(jié)果如圖5C所示，與未刺激組相比，誘導(dǎo)培養(yǎng)6,24,30 h組SBD-1 mRNA表達量均極顯著升高(P<0.01)，且誘導(dǎo)培養(yǎng)ORECs 6 h時SBD-1 mRNA的表達量達到最高(圖5 C)。接著用不同質(zhì)量濃度(0，100，200，300，400 mg/L)的釀酒酵母提取物刺激ORECs 2 h，誘導(dǎo)培養(yǎng) 6 h，發(fā)現(xiàn)不同質(zhì)量濃度酵母提取物刺激細胞均能誘導(dǎo)SBD-1 mRNA表達，但僅200 mg/L質(zhì)量濃度釀酒酵母提取物刺激組SBD-1 mRNA表達量極顯著高于對照組(P<0.01，圖5 D)。由此可知，200 mg/L質(zhì)量濃度釀酒酵母提取物刺激誘導(dǎo)ORECs 6 h后，SBD-1 mRNA表達量達到最高。

2.5 最佳誘導(dǎo)條件下釀酒酵母提取物和培養(yǎng)物誘導(dǎo)ORECs SBD-1表達的比較結(jié)合本試驗研究結(jié)果綜合考慮，釀酒酵母培養(yǎng)物和提取物兩者均能夠誘導(dǎo)ORECs SBD-1 mRNA表達，且有各自不同的最佳誘導(dǎo)時間和質(zhì)量濃度。到底具體哪種物質(zhì)誘導(dǎo)ORECs SBD-1 mRNA表達效果最好？這個問題引起作者的好奇心。所以本課題組針對這一問題做了相關(guān)試驗研究，分別用2種物質(zhì)在各自的最佳刺激質(zhì)量濃度和時間條件下誘導(dǎo)培養(yǎng)ORECs,然后提取細胞總RNA，經(jīng)qPCR擴增反應(yīng)，結(jié)果見圖6。與對照組相比，釀酒酵母培養(yǎng)物刺激組SBD-1 mRNA表達量顯著升高(P<0.05)，而釀酒酵母提取物刺激組SBD-1 mRNA表達量極顯著升高(P<0.01)，表明釀酒酵母提取物誘導(dǎo)效果優(yōu)于釀酒酵母培養(yǎng)物。

3 討論

近年來，隨著動物集約化養(yǎng)殖和舍飼養(yǎng)殖規(guī)模的不斷擴大，養(yǎng)殖動物機體抵抗力下降，群體感染疾病風(fēng)險增加?？股仉m然能夠預(yù)防疾病和促進動物生長，但由于其在動物體內(nèi)殘留和耐藥菌產(chǎn)生等缺點，迫切需要尋找抗生素替代品。防御素作為小型陽離子兩性親和肽，是機體自身分泌的一類抗微生物肽，也是機體先天免疫系統(tǒng)的功能效應(yīng)物質(zhì)，能夠趨化免疫細胞，參與免疫調(diào)節(jié)反應(yīng)[12]，同時還具有抗細菌、抗真菌和抗病毒活性，是被公認的抗生素有效替代品之一。最近幾年，關(guān)于誘導(dǎo)調(diào)控動物胃腸道黏膜上皮細胞內(nèi)β-防御素表達的研究引起了研究人員的極大興趣。相關(guān)研究表明，益生菌與體外培養(yǎng)的胃腸道上皮細胞共培養(yǎng)數(shù)小時后，能夠有效誘導(dǎo)防御素表達，并且部分益生菌菌種與防御素表達水平之間存在濃度-時間依賴關(guān)系[13-16]。此外，中草藥提取分子、維生素D、短鏈脂肪酸和膽汁酸等也被發(fā)現(xiàn)對動物機體產(chǎn)生防御素有積極作用，從而改善機體胃腸道免疫和預(yù)防疾病感染[1，17-19]。因此，益生菌和中草藥提取物等物質(zhì)可作為誘導(dǎo)劑有效誘導(dǎo)宿主體內(nèi)防御素表達。利用誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)防御素表達這一方法很有可能在不久將來成為一種新的治療方法，以替代抗生素治療感染和微生態(tài)失調(diào)引發(fā)的疾病。

圖5 釀酒酵母培養(yǎng)物和提取物對ORECs SBD-1 mRNA表達的影響(**.P<0.01) A.釀酒酵母培養(yǎng)物處理ORECs不同時間對SBD-1 mRNA表達影響；B.不同質(zhì)量濃度釀酒酵母培養(yǎng)物處理ORECs對SBD-1 mRNA表達影響；C.釀酒酵母提取物處理ORECs不同時間對SBD-1 mRNA表達影響；D.不同質(zhì)量濃度釀酒酵母提取物處理ORECs對SBD-1 mRNA表達影響

圖6 釀酒酵母培養(yǎng)物和提取物誘導(dǎo)ORECs SBD-1 mRNA表達的比較 *.P<0.05；**.P<0.01

釀酒酵母培養(yǎng)物和提取物分別是釀酒酵母細胞胞外代謝產(chǎn)物和胞內(nèi)提取物，有不少體內(nèi)試驗研究報道，酵母培養(yǎng)物和酵母提取物被哺乳動物、禽類和蝦攝入后，能夠改善攝入者生長性能，促進胃腸道對營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收，并增強機體非特異性免疫和降低死亡率[20-23]。張洪勤等[24]使用地塞米松建立免疫損傷小鼠模型，并用酵母提取物治療后發(fā)現(xiàn)，小鼠胸腺細胞凋亡被抑制。在體外細胞試驗中，JENSEN等[25]的研究結(jié)果表明酵母培養(yǎng)物(益康XP)能夠活化NK細胞和NKT細胞，并誘導(dǎo)B淋巴細胞上的CD80和CD86表達。然而，有關(guān)酵母培養(yǎng)物和酵母提取物與防御素表達的關(guān)系卻少見報道。為了解釀酒酵母培養(yǎng)物和提取物質(zhì)量濃度和誘導(dǎo)時間與防御素表達之間的關(guān)系。本試驗以體外培養(yǎng)的ORECs為研究對象，即可有效避免活體胃腸道內(nèi)復(fù)雜環(huán)境對試驗的影響，又能夠節(jié)約試驗成本。并使用qPCR方法從基因?qū)用鎸BD-1 mRNA表達進行檢測，結(jié)果顯示，釀酒酵母培養(yǎng)物和提取物均能夠誘導(dǎo)SBD-1 mRNA表達，表達量與刺激物及其質(zhì)量濃度、誘導(dǎo)時間有關(guān)。當(dāng)釀酒酵母培養(yǎng)物質(zhì)量濃度為400 mg/L、釀酒酵母提取物質(zhì)量濃度為200 mg/L 分別誘導(dǎo)細胞6 h時SBD-1 mRNA表達量達到最高。這一結(jié)果表明，釀酒酵母培養(yǎng)物和提取物能夠作為誘導(dǎo)劑，誘導(dǎo)上皮細胞內(nèi)防御素表達。但其具體作用機制和作用成分仍不確定，有待進一步研究分析。

本試驗通過體外細胞試驗證明釀酒酵母培養(yǎng)物提取物均能夠誘導(dǎo)SBD-1 mRNA表達，且當(dāng)釀酒酵母培養(yǎng)物質(zhì)量濃度為400 mg/L、釀酒酵母提取物質(zhì)量濃度為200 mg/L分別誘導(dǎo)細胞6 h時SBD-1 mRNA表達量達到最高。其中，釀酒酵母提取物誘導(dǎo)效果優(yōu)于釀酒酵母培養(yǎng)物。