李秋燕 夏志楊 熊小敏

隨著成分輸血技術的不斷提高,機采血小板由于質量較純、采集量較大,得到了較快的發(fā)展和推廣,在臨床應用中極大地降低了輸血傳染疾病的風險,同時也減少了同種免疫反應的發(fā)生,更加便于血小板配型工作的順利開展。但是隨著血小板需求量的不斷增加,即使血小板儲存技術得到了較大的提高,相關設備也更加先進,血小板的儲存時間也進一步延長,但是有研究表明,血小板的儲存時間會對其代謝功能產生一定的影響［1］,本研究對30例單采血小板儲存時間與其代謝功能之間的相關性進行實驗觀察,結果如下。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑 儀器：血小板保存袋和CS3000plus血細胞分離機均為Baxter International 生產。流式細胞儀FACSSalibur 為Becton,Dickinson and Company 生產,保存箱則采用美國Helmer Scientific 血小板恒溫振蕩保存箱。試劑：ACD-2 抗凝劑,血小板洗滌劑由上海市血液中心生產；CD41FITC、MouselgG-1FITC、CD62-PFITC 等由Beckman Couiter 生產。

1.2 樣本 本次選用的血小板樣本來自于30例健康自愿獻血者,根據血站的具體操作流程,通過采用CS3000plus 血細胞分離儀對單采血小板進行了分離,得到了30 袋濃縮血小板懸液,每袋懸液的含量為1 個治療量,每個治療量中含有大約(2.5～3)×1011的血小板含量。將以上血小板放置在溫度設定為22℃的Helmer Scientific 血小板恒溫振蕩保存箱中進行儲存,水平振搖后,保存8 d。

1.3 測定方法 ①通過預試驗對本次研究所采用的血氣分析儀進行定標檢測,要求在預試驗過程中對分析儀進行保養(yǎng)和定標,每日測定參數值,以保證儀器的穩(wěn)定性和實驗結果的可靠性,并適當調整相關的工作參數。預實驗過程中應熟悉掌握分析儀的具體操作流程,并針對實驗中可能出現的問題預先設計解決方案。一旦出現超出檢測范圍的情況,應對pH 值和乳酸含量進行補償,適當調整斜率［2］。②對預實驗中發(fā)現的問題進行總結分析,改進預實驗中影響實驗數據的相關步驟。采用新的專用試劑盒,防止在實驗操作過程中中途更換試劑盒而導致誤差增大,同時每周應進行1 次穩(wěn)定性測試。③采用封口機每次從劑量為20 ml 的血小板中提取1 ml 的血小板樣品,提取時應注意要在生物安全柜中進行。采用血氣分析儀分別在血小板儲存4 h、1 d、2 d、3 d、5 d、7 d 以及8 d 時對其各項血氣指標進行檢測,在檢測過程中應注意盡可能的減少樣品和空氣的直接接觸時間,以確保檢測值的真實性和可靠性。若檢測出的數值超出檢測范圍,需要及時進行補償,并調整斜率,調整完成之后進行重復檢測。在測定期間要注意做好儀器的保養(yǎng)工作,確保儀器的正常穩(wěn)定運行。

1.4 觀察指標 分析比較不同儲存時間點血小板的pH 值和乳酸水平。

1.5 統(tǒng)計學方法 采用SPSS21.0 統(tǒng)計學軟件處理數據。計量資料以均數±標準差(±s)表示,采用t檢驗。P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

隨著血小板儲存時間的延長,pH 值含量在儲存4 h～1 d 呈上升趨勢,而在之后的幾天pH 值呈現穩(wěn)定的下降趨勢,儲存4 h 的pH 值(7.25±0.03)高于儲存8 d 的(6.70±0.41),差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。而乳酸含量則呈現穩(wěn)定的上升趨勢,儲存4 h 乳酸含量(1.95±0.46)mmol/L低于儲存8 d的(30.05±8.05)mmol/L,差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。見表1。

表1 不同儲存時間點血小板的pH 值和乳酸水平比較(±s,n=30)

表1 不同儲存時間點血小板的pH 值和乳酸水平比較(±s,n=30)

注：與8 d 比較,aP＜0.05

3 討論

血小板是人體血液中重要的細胞成分,具有粘附、聚集和釋放細胞因子等重要生理功能,在止血過程中,血小板具有不可替代性,因此血小板在臨床止血以及血小板治療中具有重要價值［3］。隨著惡性腫瘤治療技術的不斷發(fā)展,化療、放療、骨髓移植等方法在臨床中的應用不斷增多,由此所導致的患者出現血小板減少癥的情況也越來越多,再加上很多血液系統(tǒng)疾病引起的血小板減少現象,使得臨床治療中對血小板的需求量逐年增加［4］。但是現階段血小板的保存時間一般僅能達到5 d 左右,使得血小板的臨床應用受到了極大的限制,而且在長時間的保存過程中,血小板的質量也會出現一定程度的損傷,使得其形態(tài)和功能會發(fā)生相應的改變,因此探討血小板的儲存時間對其代謝功能產生的影響具有重要的研究價值［5］。

我國在成分輸血方面已經逐漸克服了技術難關,血小板輸注已經能夠有效應用于腫瘤手術、血液系統(tǒng)疾病、外科手術中。血小板輸注在臨床中的治療效果成為醫(yī)學界普遍關注的問題,而且隨著醫(yī)療技術的不斷進步,要求血小板輸注有更高的質量。目前,血站針對血小板的質量檢測更加偏重于血小板含量,我國就全血和成分血的質量要求作出相關規(guī)定說明,其中要求針對單采血小板的合格標準要求血小板含量在2.5×1011/L 及以上,白細胞混入量要求在5.0×108/L 及以下,紅細胞混入量要求在8.0×109/L 及以下。事實上,血小板計數不會受到時間和存儲溫度的變化影響發(fā)生改變,經血細胞計數儀對血小板進行檢測時,血小板的表現形式為顆粒狀,以此血小板計數的影響因素僅包含血小板的大小和形狀,無法與血小板功能特性取得關聯(lián)。所以,僅對單采血小板計數進行檢測是不夠的,需要同時檢測血小板功能。血小板的代謝率很高,需要較高的能量作為支撐,有氧代謝為其提供了大部分的能量,靜息狀態(tài)下的代謝率是骨骼肌細胞的600%。缺氧狀態(tài)下,糖酵解成為血小板的轉化途徑,最終生成腺苷三磷酸,這樣血小板中的乳酸含量會迅速上升。

在我國關于全血和成分血質量要求規(guī)定中指出,常溫條件下單采血小板的保存時間可以在5 d,對于血小板保存時間做出規(guī)定的原因是血小板在常規(guī)狀態(tài)下保存其功能和形態(tài)可能會發(fā)生轉變,也就是所謂的血小板保存損傷。其中的機制并不是可以簡單闡述的,主要包括保存體系會消耗大量的代謝能量和血小板體外活化引起的。血小板代謝分為能量代謝、花生四烯酸代謝、脂質代謝等,此次針對血小板代謝指標發(fā)生的改變是以血小板能量代謝作為重點研究方向。血小板是在無氧狀態(tài)下儲存的,期間會以糖酵解作為途徑發(fā)生改變,讓乳酸大規(guī)模聚集在一起,在此期間血小板膜會釋放出乳酸脫氫酶,血小板的pH 值無法繼續(xù)維持穩(wěn)定會有所下降,血小板代謝損傷會影響血小板輸注的治療效果,因此需要經過一些特殊處理方法,比如改良保存技術或者可以加入保護劑避免代謝損傷的發(fā)生。有相關研究指出,血小板保存液中的血漿成分無法更好的保護血小板,可以使用人工制備的血小板保護液來替代,以此讓血小板代謝損傷率更低。比如,血小板儲存過程中如果使用不含葡萄糖的保護液,糖酵解反應便不會發(fā)生,乳酸的產生量會顯著降低；也可以在血小板儲存時使用含葡萄糖和具備緩沖能力的保護液,也會讓乳酸反應顯著降低。所以,血小板在儲存過程中發(fā)生的代謝功能損傷、對血小板輸注治療效果的影響或者血小板保護液,上述內容的研究最終與血小板存儲時間對血小板代謝和功能的影響相關聯(lián),有重要的研究意義。

本文實驗研究顯示,隨著血小板儲存時間的延長,pH 值含量在儲存4 h～1 d 呈上升趨勢,而在之后的幾天pH 值呈現穩(wěn)定的下降趨勢,儲存4 h 的pH 值高于8 d,差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。而乳酸含量則呈現穩(wěn)定的上升趨勢,儲存4 h 乳酸含量低于8 d,差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。分析原因可能是由于血小板本身的代謝過程所導致的,血小板代謝過程主要分為兩種,一種是無氧代謝,一種則是有氧代謝［6］。其中無氧代謝主要是指糖酵解,在這過程中葡萄糖不斷的被消耗,而乳酸則不斷產生；有氧代謝則是三羧酸循環(huán),最終會產生一定量的CO2,使得pH 值不斷的發(fā)生改變。因此,隨著儲存時間的不斷延長,血小板pH 值出現下降現象可能是由于血小板在代謝初期氧氣充足,再加上保存袋所具有的通氣性能較好,因此在血小板保存之初透出的CO2大于產生的CO2含量,也就是說血小板丟失了自身所含有的CO2,才會出現短暫的pH值上升現象,而隨著儲存時間的不斷延長,CO2逸出量與代謝生成量達到平衡繼而超出,pH 值才會逐漸的降低。本次研究通過檢測血小板的代謝指標,能夠從代謝功能上反映出血小板儲存質量是否良好,希望能夠為未來血小板體外質量評價體系的構建提供一定的參考價值。

綜上所述,通過對不同儲存時間內單采血小板的pH 值和乳酸含量進行檢測,能夠根據這兩種代謝數值更好的對血小板的儲存質量進行評價,探討血小板保存時間和條件,為提高血小板的儲存質量提供參考依據。