曹 偉, 馮玉婷, 王小媛, 王穎娟, 康 樂, 易海玲,楊 曦, 李青青, 李習(xí)梅, 李 寶, 李 超

(陜西省寶雞市中心醫(yī)院 皮膚科, 陜西 寶雞, 721008)

白癜風(fēng)和暈痣均是臨床常見的脫色性皮膚病，患者皮膚色素脫失均與免疫性黑色素細(xì)胞破壞相關(guān)[1-2]。近些年，隨著對(duì)T淋巴細(xì)胞亞群的深入研究，發(fā)現(xiàn)輔助性T細(xì)胞(Th)1(Th1)、Th2以及Th17、調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞(Treg細(xì)胞)這兩對(duì)相互抑制、相互平衡的T淋巴細(xì)胞及其細(xì)胞因子在諸多自身免疫性皮膚病中發(fā)揮著關(guān)鍵性作用。本研究分析尋常型白癜風(fēng)和暈痣患者外周血Th1、Th2細(xì)胞及Th17、Treg細(xì)胞的流式細(xì)胞學(xué)特征，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年1月—2019年1月本院皮膚科門診收治的進(jìn)展期尋常型白癜風(fēng)患者43例和Ⅰ、Ⅱ階段暈痣患者37例。納入標(biāo)準(zhǔn): ① 臨床及病理確診為進(jìn)展期尋常型白癜風(fēng)及Ⅰ、Ⅱ階段暈痣患者; ② 3個(gè)月內(nèi)未使用糖皮質(zhì)激素及免疫調(diào)節(jié)劑等系統(tǒng)治療，3個(gè)月內(nèi)未應(yīng)用皮損局部治療藥物及光電療法等患者; ③ 患者均簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn): ① 合并其他自身免疫性疾病者; ② 孕婦及哺乳期婦女; ③ 尋常型白癜風(fēng)合并暈痣者。對(duì)照組(n=15)為本院常規(guī)體檢健康人群。

1.2 研究方法

抽取尋常型白癜風(fēng)組、暈痣組及對(duì)照組受試者常規(guī)清晨空腹外周血5 mL, 并即刻進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)檢測。CD3-PE-vio615、CD8-Percp-vio700、IFN-γ-FITC、IL-4-PE、IL-17A-PE、IgG1-FITC、IgG1-PE、CD4-Percp-vio700、CD25-PE、CD127-FITC、IgG2a-FITC、IgG2-PE、刺激劑均購自Beckman Coulter公司，檢測儀器為Beckman Coulter XL，購自美國Beckman Coulter公司。

外周血中Th1細(xì)胞、Th2細(xì)胞、Th17細(xì)胞的檢測: 取外周血500 μL, 加入刺激劑，混勻, 37℃孵育4～6 h; 取50 μL孵育刺激后的樣本，設(shè)同型對(duì)照管和檢測管，共3管，分別加入CD3-PE-vio615、CD8-Percp-vio700, 混勻，室溫避光15 min; 加入A液固定劑100 μL, 孵育5 min; 加入溶血素500 μL, 混勻，室溫避光10 min, 1 500 轉(zhuǎn)/min離心5 min, 棄上清; 加入B液破膜劑500 μL, 孵育10 min, 1 500轉(zhuǎn)/min離心5 min, 棄上清; 同型對(duì)照管和檢測管分別加入同型抗體IgG1-FITC、IgG1-PE和檢測抗體IFN-γ-FITC、IL-4-PE及IL-17A-PE, 混勻，室溫避光25 min; 1×PBS洗滌, 1 500 轉(zhuǎn)/min離心5 min, 棄上清; 加1×PBS 500 μL, 1 h內(nèi)上機(jī)。

外周血中Treg細(xì)胞的檢測: 取外周血50 μL, 設(shè)同型對(duì)照管和檢測管，共2管，分別加入同型抗體IgG2a-FITC、IgG2-PE、CD4-Percp-vio700和檢測抗體CD127-FITC、CD25-PE、CD4-Percp-vio700, 混勻，室溫避光15 min; 加入溶血素500 μL, 混勻，室溫避光15 min; 1×PBS洗滌, 1 500轉(zhuǎn)/min離心5 min, 棄上清; 加1×PBS 500 μL, 1 h內(nèi)上機(jī)。次日采用流式細(xì)胞儀(美國貝克曼公司)檢測各管細(xì)胞比例。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié) 果

2.1 3組受試者一般資料比較

3組性別、年齡分布比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。尋常型白癜風(fēng)組及暈痣組均表現(xiàn)為顏面部高發(fā)，但組間無顯著差異(P>0.05)。尋常型白癜風(fēng)組多部位者比率顯著高于暈痣組多部位者比率(P<0.05)。見表1。

表1 3組受試者一般資料比較

2.2 尋常型白癜風(fēng)組及暈痣組患者外周血Th1、Th2、Th17及Treg細(xì)胞比較

尋常型白癜風(fēng)組、暈痣組及對(duì)照組Th2、Th17細(xì)胞水平及Th17與Treg比值(Th17/Treg)有顯著差異(P<0.05或P<0.01), Th1、Treg細(xì)胞及Th1與Th2比值(Th1/Th2)無顯著差異(P>0.05)。見表2。Th1、Th2、Th17及Treg細(xì)胞檢測值為各細(xì)胞占CD4+T細(xì)胞的百分比。

表2 尋常型白癜風(fēng)組與暈痣組患者外周血Th1、Th2、Th17、Treg細(xì)胞水平比較

3 討 論

尋常型白癜風(fēng)是一種臨床常見的獲得性、漸進(jìn)性、脫色性皮膚病，目前病因尚不明確，其中皮膚黑色素細(xì)胞功能喪失是主要的發(fā)病原因[3-4]。暈痣又稱離心性后天性白斑、Sutton痣，表現(xiàn)為色素痣周圍出現(xiàn)一圈局限性色素脫失暈，發(fā)病率約1%, 多見于青少年[5]。臨床上暈痣常單獨(dú)存在，但也有部分患者合并白癜風(fēng)，其中泛發(fā)型白癜風(fēng)伴發(fā)暈痣比率較高[6]。從免疫學(xué)發(fā)病機(jī)制來看，黑色素細(xì)胞特異性T淋巴細(xì)胞皮膚遷移在白癜風(fēng)及暈痣發(fā)病中都可能起到關(guān)鍵作用[7], 其中Th1/Th2、Th17/Treg細(xì)胞平衡偏移相關(guān)黑色素細(xì)胞破壞機(jī)制的研究越來越受到學(xué)術(shù)界關(guān)注[8]。

Th1/Th2細(xì)胞平衡偏移已在很多自身免疫性疾病中得到證實(shí)，研究[9]發(fā)現(xiàn)Th1細(xì)胞功能相對(duì)亢進(jìn)會(huì)引起糖尿病、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、潰瘍性結(jié)腸炎、皮膚遲發(fā)型超敏反應(yīng)及移植物排斥反應(yīng)、銀屑病等自身免疫性疾病，而Th2細(xì)胞過度應(yīng)答則可以降低機(jī)體的抗感染能力，促進(jìn)抗體過度產(chǎn)生，導(dǎo)致自身免疫性蕁麻疹、特異性皮炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、哮喘等疾病。Th17/Treg細(xì)胞平衡偏移也在免疫性疾病中得到證實(shí)[10]。針對(duì)白癜風(fēng)患者Th17細(xì)胞的研究[11-12]發(fā)現(xiàn)，患者外周血IL-17水平持續(xù)升高，且與疾病活動(dòng)及皮損面積呈正相關(guān)。Klarquist J等[13]發(fā)現(xiàn)白癜風(fēng)患者皮損處、皮損周圍和非皮損處Treg細(xì)胞數(shù)量均顯著減少。

本研究發(fā)現(xiàn): ① 尋常型白癜風(fēng)和暈痣患者在性別、年齡方面無顯著差異，但尋常型白癜風(fēng)患者更易出現(xiàn)多部位受累。顏面部多發(fā)可能與樣本量較少及患者重視程度不同有關(guān)。② 在Th1/Th2細(xì)胞平衡方面, 3組外周血Th1細(xì)胞無顯著差異，暈痣患者Th2細(xì)胞顯著降低，尋常型白癜風(fēng)與暈痣患者外周血Th1/Th2細(xì)胞平衡無顯著差異。③ Th17/Treg細(xì)胞平衡方面，尋常型白癜風(fēng)患者外周血Th17細(xì)胞水平顯著增高，而暈痣患者無明顯變化, 3組Treg細(xì)胞無顯著差異，尋常型白癜風(fēng)患者外周血Th17/Treg細(xì)胞平衡向Th17偏移。

綜上所述，尋常型白癜風(fēng)與暈痣患者外周血Th1、Th2、Th17及Treg細(xì)胞變化存在差異，尋常型白癜風(fēng)患者外周血Th17細(xì)胞增高更為明顯，而暈痣患者外周血Th2細(xì)胞下降更明顯，與普遍認(rèn)為的尋常型白癜風(fēng)及暈痣系Th2型偏移不同。