楊春暉，容新宗

·行業(yè)發(fā)展報告·

病毒滅活技術(shù)及產(chǎn)業(yè)發(fā)展報告

楊春暉，容新宗

610052 成都，中國醫(yī)學科學院北京協(xié)和醫(yī)學院輸血研究所

1 國際病毒滅活技術(shù)及產(chǎn)業(yè)發(fā)展現(xiàn)狀

1.1 產(chǎn)業(yè)規(guī)模和產(chǎn)值

生物制品的原材料主要來源于血液及哺乳動物細胞培養(yǎng)產(chǎn)物。由于其具有病原體傳播的風險，因此在生產(chǎn)過程中需要應用病毒滅活工藝來保障生物安全。不同的制品因工藝的差異也決定了病毒滅活策略的選擇。

血液是一種不可替代的重要的治療資源。血液的采集方式分為成分血和單采血漿。成分血一般由各國的血液中心采集全血后分離，直接輸注給患者。而單采血漿則是單采漿站利用單采技術(shù)從人體內(nèi)收集的血漿，用以制備血漿衍生的醫(yī)療產(chǎn)品。

根據(jù)世界衛(wèi)生組織（WHO）的數(shù)據(jù)[1]，全球每年共采血 1.1 億次，其中血液中心采集約 1 億次，單采血漿 1190 萬次。在 173 個國家中，僅有 50 個國家制備和生產(chǎn)血漿衍生的醫(yī)療產(chǎn)品。2020 年，全球血液市場的規(guī)模達到了 72.01 億美元，預計到 2027 年將達到 102.53 億美元，2020 – 2027 年的年復合增長率為 4.5%。

與我國不同的是，歐美等國家制備血液制品的原料血漿不僅來源于單采血漿，也可來源于回收血漿，即從全血提取血細胞后剩余的血漿。目前成分血的制備，世界多個國家雖然已采用了病毒滅活技術(shù)，但大部分國家并未進行強制的規(guī)定。而血液制品的生產(chǎn)，均規(guī)定了在生產(chǎn)過程中必須應用病毒滅活工藝。

除血液外，在藥物合成過程中，來源于人或哺乳動物的原材料中的內(nèi)源性病毒和其他在生產(chǎn)過程中引入的外來病毒對生物制品的污染是一個主要問題。這些制品包括單克隆抗體、細胞因子、生長因子、干擾素、基因重組蛋白及疫苗等。

隨著生物技術(shù)的進步，生物藥品已改變了之前傳統(tǒng)的臨床治療方式，一些之前無法治療的疾病如慢性病、自身免疫性疾病和腫瘤等在生物藥品的支持下，已獲得了較好的療效。這些因素積極地推動了生物制藥市場的發(fā)展。2017 年全球生物制品行業(yè)（含血液制品）市場規(guī)模為 2549 億美元，每年增長率為 10% 左右[2]。在生物制品領域，根據(jù)美國藥監(jiān)局（FDA）、歐洲藥監(jiān)局（EMA）和國際人用藥品技術(shù)要求協(xié)調(diào)委員會（ICH Q5A）的指導原則，病毒滅活也是不可缺少的要求，且在藥品研發(fā)過程，需要完成多次驗證。

1.2 主要企業(yè)及市場份額

1.2.1 光化學病毒滅活技術(shù) 利用某些化學光敏劑能與病原微生物的核酸或蛋白結(jié)合，在適當波長光照射下，發(fā)生系列光化學及光生物學效應導致病原體失活的方法，多用于成分血病毒滅活。各國應用光化學滅活技術(shù)的情況見表 1。

美國 Cerus 公司研發(fā)的病毒滅活系統(tǒng)為 INTERCEPT Blood System，分為 INTERCEPT Blood System-platelet，INTERCEPT Blood System-plasma 和 INTERCEPT Blood System-red blood cell，該系統(tǒng)以光化學病毒滅活技術(shù)為基礎，其滅活原理是利用補骨脂復合物和 UVA 光照破壞病原體的復制，對多種病毒、細菌及寄生蟲都可進行有效滅活。目前該產(chǎn)品已應用于單人份血漿和血小板的滅活，在美國、瑞士、比利時、冰島、澳大利亞、科威特、斯洛文尼亞和法國等國家每年售出超過 500 萬套耗材。產(chǎn)品在紅細胞中的應用也已進行了臨床 III 期試驗，并已在歐洲提交了 CE 認證申請。隨著 INTERCEPT 系統(tǒng)越來越廣泛的應用，Cerus 公司的產(chǎn)品收入呈現(xiàn)持續(xù)增長的趨勢，2014 – 2018 年，5 年間從 3641.6 萬美元增長到了 6090.8 萬美元[3]。

日本 Terumo BCT 公司生產(chǎn)的病毒滅活系統(tǒng)為 Mirasol pathogen reduction system，其原理與 INTERCEPT 類似，是采用核黃素結(jié)合 UV 光照射滅活病原體?？捎糜跍缁顔稳朔菅獫{和血小板。該產(chǎn)品從2009 年開始投入應用，目前已售往歐洲、中東、拉美、亞太地區(qū)的 20 多個國家。配套的耗材已售出超過 75 萬套[4]。

法國 Macopharma 公司生產(chǎn)的兩種病毒滅活產(chǎn)品分別是 THERAFLEX MB-plasma 和 THERAFLEX UV-Platelets，分別用于血漿和血小板的滅活。THERAFLEX MB-plasma 是利用亞甲藍（methylene blue，MB）結(jié)合可見光照射滅活病原體，1992 年開始應用于臨床，至今已在美國、歐洲、中東、澳大利亞、東南亞等 10 多個國家和地區(qū)使用，產(chǎn)品售出超過 550 萬套。THERAFLEX UV-Platelets 是使用 254 nm 的 UVC 光照結(jié)合血袋振蕩對血小板中的病原體進行滅活，目前在歐洲已獲得了 CE 認證，在美國還在進行臨床 III 期試驗。

1.2.2 有機溶劑/清潔劑病毒滅活技術(shù) 有機溶劑/清潔劑（solvent/detergent，S/D）病毒滅活技術(shù)利用有機溶劑和清潔劑的混合物破壞病毒的脂包膜，可滅活有包膜的病毒，但對無包膜病毒沒有作用?？捎糜谘獫{、血液制品和生物制品。S/D 血漿的應用見表 1[5]。

瑞士 Octapharma 是一家致力于研發(fā)、生產(chǎn)和銷售高品質(zhì)血漿蛋白制品的私營公司，擁有全球最大的獨立血漿分餾器，產(chǎn)品銷售覆蓋全球 118 個國家和地區(qū)。公司在血漿收集設施上進行大量投資，除了在歐洲和美國擁有 120 個血漿中心外，還在奧地利、法國、德國、墨西哥和瑞典擁有7 處研發(fā)設施和 6 處制造設施。該公司創(chuàng)新采用的 S/D 病毒滅活工藝成為血液制品行業(yè)的金標準。其生產(chǎn)的病毒滅活血漿從 1992 年開始投入市場，經(jīng)過不斷的工藝改良，目前最新的產(chǎn)品為 2009 年注冊的 Uniplas?/UniplasLG?。目前工廠每批次匯集 600 ~ 1500 人份的單采血漿，經(jīng)過 24 h 的生產(chǎn)流程，產(chǎn)出 3600 袋病毒滅活血漿。一周可生產(chǎn) 4 ~5 個批次，售往歐洲、美國和澳大利亞等多個國家和地區(qū)[6]。

表1 各國（地區(qū)）滅活血漿應用情況[5]

注：√代表已應用

此外，Octapharma 公司還將 S/D 工藝授權(quán)給南非 Pinetown 的國家生物產(chǎn)品研究所及意大利 Kedrion 公司，生產(chǎn)了 Bioplasma FDP?和 Plasmasafe?品牌的 S/D 滅活血漿。

除了 S/D 滅活血漿外，Octapharma 公司還生產(chǎn)多種經(jīng)過病毒滅活的血液制品，已上市產(chǎn)品包括重組凝血因子 VIII、凝血因子 VIII、凝血因子 IX、血管性血友病因子、靜注免疫球蛋白、皮下注射免疫球蛋白、抗 D 免疫球蛋白、人血白蛋白、凝血酶原復合物、抗凝血酶 III、纖維蛋白原等 14 種。滅活的方法包括 S/D、納濾及加熱等。

根據(jù)公司年報，2019 年 Octapharma 公司年全球銷售收入 22.14 億歐元，較 2018 年增加 4.17 億歐元（23.2%）。

1.2.3 納濾除病毒 納濾是一種通過孔徑大小過濾來濾除病毒的技術(shù)，多用于血液制品和生物制品的病毒去除。2018 年全球病毒濾除的市場規(guī)模為 27 億美元。病毒濾除是生物制品凈化過程中最常用的技術(shù)之一，其目的是達到有效的凈化效果，保證生物制品的安全。得益于生物治療產(chǎn)品如單克隆抗體、干細胞產(chǎn)品、血液成分、生物制劑和疫苗不斷增長的需求，未來幾年全球病毒過濾市場預計呈現(xiàn)增長的趨勢。目前市場上在售的納濾產(chǎn)品見表 2[7]。

日本 Asahi Kasei 是一家涵蓋了材料、住宅和醫(yī)療領域的綜合化工廠家。其醫(yī)療領域的除病毒濾器可應用于血液制品、單克隆抗體、重組蛋白產(chǎn)品及培養(yǎng)基生產(chǎn)過程中的病毒去除。Asahi Kasei 公司從 1989 年開始生產(chǎn) Planova 除病毒濾器，是全球首個生產(chǎn)除病毒濾器的廠家。目前已研發(fā)出 15N、20N、35N、75N 及 BioEX 等不同孔徑大小的除病毒濾器，適用于不同性狀的蛋白產(chǎn)品。隨著除病毒濾器需求的增加，2019 年該公司病毒濾器的銷售額增長了 40%[8]。

美國 Pall 公司是一家專注于過濾、分離與純化的公司，業(yè)務領域涉及了生物醫(yī)藥、工業(yè)、食品和航天等。2015 年被美國 Danaher 公司收購。主要生產(chǎn)多種除病毒濾器、層析柱等，也有低 pH 滅活系統(tǒng)產(chǎn)品，可應用于血液制品、生物藥品及疫苗。近年來，銷售呈增長趨勢，2010 年，Pall 公司生物制藥領域的銷售收入達到 6.2 億美元，2014 年，則達到了 9.92 億美元，客戶主要在歐美和亞洲地區(qū)[9]。

德國 Sartorius 公司生物醫(yī)藥部門專業(yè)生產(chǎn)過濾、發(fā)酵、細胞培養(yǎng)、一次性袋、一次性容器等產(chǎn)品。其病毒濾除產(chǎn)品包括用于單克隆抗體除病毒的Virosart?HF，用于血液制品的 Virosart?HC以及病毒滅活前處理的Virosart?MAX。此外，公司也生產(chǎn)低 pH 病毒滅活產(chǎn)品和層析產(chǎn)品，同時提供病毒滅活效果驗證的服務。2019 年，該公司生物工藝部分的銷售收入達到13.7 億歐元[10]。

德國 Merck 公司是一家綜合的生物制藥公司，病毒濾除屬于其生命科學部門中的生物工藝條件類。此外，公司還生產(chǎn) S/D 滅活試劑、低 pH 滅活試劑和除病毒層析柱等產(chǎn)品，這部分業(yè)務 2019 年銷售額達到了 3000 萬歐元，比2008 年增長了 15.1%[11]。

表2 主要納濾產(chǎn)品供應商及商品[7]

1.3 病毒滅活驗證服務

由于病毒滅活的有效性關(guān)系到生物產(chǎn)品的安全及各種滅活工藝技術(shù)的復雜性，因此對其監(jiān)管也非常嚴格。各國針對生物制品病毒滅活工藝都做出了相應的規(guī)定。歐洲和美國藥監(jiān)局都出臺了對病毒滅活效果驗證的指導原則，其中國際人用藥品注冊技術(shù)協(xié)調(diào)會于 1999 年發(fā)布的《Viral Safety Evaluation of Biotechnology Products Derived from Cell Lines of Human or Animal Origin》是國際通用的病毒滅活驗證指導原則。

病毒滅活效果驗證需要進行病毒的培養(yǎng)及滴度檢測，因此對實驗室安全級別要求很高，大部分生物制品企業(yè)都選擇第三方服務公司進行驗證。根據(jù)市場分析報告，2020 年，全球病毒清除服務市場規(guī)模為2.175億美元，預計到 2026 年底將達到2.443 億美元，2021 – 2026 年的年復合增長率預計為11.4%[12]。

從事病毒滅活驗證服務的公司包括 Charles River、BioReliance（Merck）、Eurofins Scientific、Sartorius、Covance、ViruSure、Texcell、Bioscience Labs、Vironova Biosafety、Mérieux NutriSciences、WuXi AppTec、Syngene、Labor Dr. Merkare 等，其中前三位的公司占據(jù)了整個市場份額的 39.43%，其余公司呈碎片化分布。

1.4 產(chǎn)業(yè)發(fā)展趨勢

全球病毒滅活產(chǎn)業(yè)的主要驅(qū)動力是制藥和生物技術(shù)行業(yè)的需求不斷增加。各個領域新藥物推出數(shù)量的增加以及相關(guān)的藥物審批增加也在推動市場增長。目前，美國是全球生物制品領頭者，擁有最多的生物制藥公司，生物技術(shù)的研發(fā)占據(jù)世界的 80%。而亞太地區(qū)增長速度最快，有望超過歐洲占據(jù)全球第二的位置。

隨著行業(yè)的發(fā)展，進入生物制品行業(yè)的企業(yè)不斷增加，激烈的競爭使生物制藥公司必須降低生產(chǎn)成本，提高效率。越來越多的生物制藥企業(yè)已轉(zhuǎn)向連續(xù)生物生產(chǎn)工藝。生物制藥目前都是以批次生產(chǎn)的方式，即從工藝起點開始，經(jīng)過多個有停頓的中間步驟，最終獲得終產(chǎn)品。連續(xù)生產(chǎn)工藝即連續(xù)生產(chǎn)，理論上中間沒有停留。與之相適應，病毒滅活技術(shù)也向在線持續(xù)的工藝轉(zhuǎn)變。很多公司都開發(fā)了可整合至連續(xù)生產(chǎn)工藝中的病毒滅活產(chǎn)品或定制整體的病毒滅活系統(tǒng)。產(chǎn)品趨向一次性和整體性。如 Pall 公司的Cadence? 低 pH 病毒滅活系統(tǒng)[13]、Sartorius 的FlexAct?低 pH 病毒滅活系統(tǒng)[14]和 Merck 的Mobius?整體病毒滅活方案[11]等。

在血液成分領域，還缺乏適用于紅細胞和全血的病毒滅活技術(shù)。目前，INTERCEPT-red blood cells 和Mirasol 應用于紅細胞和全血的臨床試驗還在進行中，如果獲得批準，將填補這一領域的空白。

除了工藝的進步外，新發(fā)病原體也是病毒滅活領域需要關(guān)注的部分。生物來源材料的多樣性，新的生產(chǎn)工藝的引入以及全球化（包括國際旅行、原材料供應鏈及商業(yè)）使得病毒滅活工藝需要適應多變的狀態(tài)。對原材料進行滅活處理可從源頭上降低病毒傳播的風險。

2 國內(nèi)病毒去除/滅活驗證行業(yè)發(fā)展研究

2.1 生物制品病毒污染事件回顧

2.1.1 血液制品病毒污染事件 病毒污染是威脅治療用生物制品用藥安全的重要風險之一，尤其是對于血漿來源的血液制品。20 世紀 80 ~ 90 年代，世界各地有許多患者由于使用了被病毒污染的血液或血液制品而感染了各種血源性病毒，部分事件見表 3。

這些血液制品病毒污染惡性事件造成嚴重后果的同時，也促成了血液制品病毒安全保障的提升，旨在提高血液安全的各種政策法規(guī)陸續(xù)頒布出臺，多種病毒滅活與去除技術(shù)被引入血液制品制造過程。正如歐洲血液制品指南中所描述：20 世紀 80 年代中期血液制品特別是凝血因子類產(chǎn)品導致的 HIV 和 HCV 感染事件，使血液制品生產(chǎn)工藝流程發(fā)生重要變化，生產(chǎn)工藝中必須引入特定步驟針對 HIV 和 HCV 以及其他血源病毒進行病毒滅活或病毒去除。

2.1.2 治療用生物制品病毒污染事件 迄今為止，血液制品以外的治療用生物制品所造成的患者感染病毒惡性事件尚無報道，但工程細胞表達的治療用生物制品在制造過程中被病毒污染的案例并非罕見，部分病毒污染事件整理參見表 4。

表 3 20 世紀 80 ~ 90 年代國外部分血液制品污染事件統(tǒng)計表

表 4 治療用生物制品的病毒污染事件

在病毒污染事件中，有的在培養(yǎng)階段檢測到病毒污染，培養(yǎng)液和中間體因此被廢棄而沒有發(fā)生最終產(chǎn)品受到污染的現(xiàn)象。2009 年，Genzyme 公司發(fā)生 Vesivirus 2117 污染培養(yǎng)基，導致了 17.5 億美元的罰款，10 億 ~ 30 億美元的產(chǎn)品銷售額損失。為降低培養(yǎng)過程中的病毒污染風險，越來越多的制藥企業(yè)開始對培養(yǎng)基采取伽馬輻射處理、UV-C 輻射處理、短時間高溫處理或病毒過濾處理。

工程細胞表達生產(chǎn)的治療用生物制品在表達體系構(gòu)建和生產(chǎn)制造過程中可能會使用動物來源或是含有動物來源成分的物料，例如牛血清和胰蛋白酶等，也可能會使用被病毒污染的物料，如被病毒污染的化學成分培養(yǎng)基。此外，用于表達生產(chǎn)治療用生物制品的工程細胞較大比例是動、植物細胞或使用了病毒載體，表達系本身存在病毒安全風險。例如，中國倉鼠卵巢細胞（CHO）是表達生產(chǎn)抗體的主要宿主細胞之一，它本身會表達內(nèi)源性逆轉(zhuǎn)錄病毒樣顆粒，在細胞培養(yǎng)上清中?？梢詸z測到 103~ 109/ml 逆轉(zhuǎn)錄病毒樣顆粒。這些顆粒的形態(tài)、生化性質(zhì)和基因序列與傳染性逆轉(zhuǎn)錄病毒相似。因此，對于工程細胞表達生產(chǎn)的治療用生物制品，必須對生產(chǎn)工藝中清除感染性病毒的能力進行評估，確保產(chǎn)品未受感染性病毒的污染。

2.2 國內(nèi)外病毒去除/滅活驗證相關(guān)法規(guī)

2.2.1 國外病毒去除/滅活驗證相關(guān)法規(guī) 不同的國家和地區(qū)對于生物制藥或生物制品的病毒安全性均有較為嚴格且成熟的法規(guī)監(jiān)管體系（表 5）。

在業(yè)內(nèi)，相對較早且較為系統(tǒng)化的描述生物制品的病毒安全性的要求是 ICH Q5A（R1）《來源于人或動物細胞系的生物技術(shù)產(chǎn)品的病毒安全性評價》（Viral Safety Evaluation of Biotechnology Products Derived from Cell Lines of Human or Animal Origin）。該指南發(fā)布于 1999 年，著重討論人類或動物細胞經(jīng)生物工程技術(shù)培養(yǎng)而獲得的生物制品的病毒安全檢測和評價，此外其技術(shù)要求也涵蓋重組類疫苗和雜交瘤體內(nèi)培養(yǎng)腹水收獲的制品，但不涵蓋滅活疫苗、活疫苗和其他基因工程改造所得的活載體等。此指南中所討論的對象為傳統(tǒng)意義上的病毒，并不包括瘋牛病病毒、瘙癢病病毒等傳染性海綿狀腦病朊病毒類。另外，基于生物制品中有很大一部分是由細胞培養(yǎng)產(chǎn)生的，ICH 在 Q5D 中詳細闡述了對細胞基質(zhì)的鑒定和檢測相關(guān)原則。

在歐盟藥監(jiān)部門及美國藥監(jiān)局的多項單行本的法規(guī)文件當中，幾乎均會以 Q5A 和 Q5D 作為一份核心的技術(shù)及法規(guī)性引用來源。除此之外，EMA 和 FDA 還發(fā)布了一些更加細化的法規(guī)要求。

由 EMA 在 1996 年頒布的指南《病毒驗證研究：對病毒滅活及去除的驗證研究的設計、功用和解析》（Virus Validation Studies: The Design, Contribution and Interpretation of Studies validating the Inactivation and Removal of Viruses），討論了病毒驗證研究對生物制品病毒安全性的要求和功用，其主要目的是為驗證研究的設計提供指導，包括指示病毒的選擇以及對隨后產(chǎn)生數(shù)據(jù)的解析，尤其適用于確定可被認為是有效的病毒滅活或去除的工藝步驟。該指南適用于多種類型的生物制品，包括人或動物來源細胞系體外培養(yǎng)產(chǎn)物，來源于人體細胞或動物來源的器官或組織的體內(nèi)培養(yǎng)產(chǎn)物以及來源于血液、尿液或人類及動物來源的其他生物制品。

表 5 國外病毒安全性相關(guān)法規(guī)及技術(shù)文件

EMA 在 2006 年頒布的《生物技術(shù)新型藥物產(chǎn)品的病毒安全性評價指南》（Guideline on Virus Safety Evaluation of Biotechnological Investigational Medicinal Products）為有關(guān)臨床試驗中使用的生物技術(shù)新型藥物產(chǎn)品的病毒安全性提供了科學指導。其描述了生物技術(shù)新型藥物病毒安全性評估研究的標準和程度，特別是在臨床研發(fā)之前和期間所需的驗證研究；介紹了制藥企業(yè)應在何種程度上借鑒其有關(guān)病毒安全評估的內(nèi)部經(jīng)驗；并講解了對于生物技術(shù)藥物產(chǎn)品安全性評價的風險評估工作。該文件以 ICH Q5A 側(cè)重于生物技術(shù)藥物產(chǎn)品獲批市場準入許可所需的數(shù)據(jù)要求的思想精髓作為基礎，將相關(guān)的基本原則應用到了生物技術(shù)藥物產(chǎn)品在臨床開發(fā)階段當中。

EMA 在 2008 年發(fā)布的《單克隆抗體及其相關(guān)產(chǎn)品的開發(fā)、生產(chǎn)、特性鑒定和規(guī)范指南》[Guideline on Development, Production, Characterization and Specifications for Monoclonal Antibodies and Related Products （EMA/CHMP/BWP/532517/ 2008）]，則以單克隆抗體制品的制備作為其重點研究和監(jiān)管的內(nèi)容。該指南涉及單抗類制品在獲取市場準入許可的背景下的質(zhì)量要求，對這類產(chǎn)品的開發(fā)、生產(chǎn)、特性鑒定和控制提供了指導。在指南中提出了平臺制造工藝的概念，以支持在適當和合理的情況下使用源自經(jīng)驗的數(shù)據(jù)用以實現(xiàn)相應的生產(chǎn)工藝。該指南不包括關(guān)于使用特定分析方法的要求，以便在選擇方法時考慮靈活性，并考慮未來的技術(shù)演變。

縱觀上述涉及 EMA 所頒布的 3 份與生物制品病毒安全性相關(guān)的法規(guī)指南文件，可以看出 EMA 監(jiān)管當局對于該領域監(jiān)管理念及方法與策略的不斷完善的歷程：即先從控制起始原材料及建立合適的病毒清除工藝入手，隨之進入到臨床期研究藥品制備過程中的病毒安全性控制，然后再進入到獲批上市的藥物的生產(chǎn)制備環(huán)節(jié)。依此順序逐步建立有效控制病毒污染風險的機制及相應的研究方法，從而使得EMA 對于生物制品的病毒安全性控制策略得以健全、完善。

EMA 頒布的指南對已較為標準化的生產(chǎn)平臺所制備的單克隆抗體類生物制品提供了相應的指導及要求，這里所提到的標準化生產(chǎn)平臺是指大多數(shù)單克隆抗體制品均具有比較相似的制備流程，例如采用同樣的種子細胞庫和工作細胞庫、相同或相近的細胞擴培方法、比較相似的下游純化工藝等。針對市場上較為成熟的單抗制品的制備、法規(guī)的監(jiān)管理念和方法等方面，標準化的生產(chǎn)工藝即意味著有一定的前車之鑒可以被應用到新注冊品種、新工藝、新的生產(chǎn)廠房設計等工作中，并有利于各工藝環(huán)節(jié)的法規(guī)監(jiān)管水平得以有效的更新和發(fā)展。因此該指南也對制藥企業(yè)提出要求，即須有合理的原因及背后所涵蓋的基本原理來說明為什么之前的生產(chǎn)工藝數(shù)據(jù)可以應用于制備新的產(chǎn)品。以病毒清除工藝為例，對于生物制藥生產(chǎn)過程中某個特定的病毒滅活/去除的工藝步驟，可由之前生產(chǎn)工藝平臺中獲取的數(shù)據(jù)（如產(chǎn)品中間體處于相同的工藝位置、具有類似的生化特性并經(jīng)歷過一致的純化工藝處理），來說明該病毒滅活/去除步驟的合理性和可行性。

美國 FDA 在 1997 年發(fā)布的《人用單克隆抗體制品制備和測試中的考量要點》（簡稱：單抗考量要點）（Points to Consider in the Manufacture and Testing of Monoclonal Antibody Products for Human Use）對單克隆抗體新藥申請以及上市許可申請需要遞交的資料信息提出了要求。對于單克隆抗體產(chǎn)品的細胞安全性保障，從細胞庫/原材料控制、生產(chǎn)工藝控制、病毒去除/滅活步驟等多方面闡述考量要點。考量要點中還提到模塊化病毒清除工藝、模塊化驗證的概念，對于模塊化步驟生產(chǎn)的單抗制品，或可借鑒同類產(chǎn)品的病毒清除研究數(shù)據(jù)。需要指出具體的“考量點”并非是法規(guī)要求，也不是指導原則，但是它們可以代表美國 FDA 生物制品評價和研究中心（CBER）專家們當前的普遍認識。整體上美國 FDA 遵從 ICH Q5A 的要求，并將之收錄在美國藥典當中（USP General Chapters: <1050> Viral Safety Evaluation of Biotechnology Products Derived from Cell Lines of Human or Animal）。USP1050.1 為 USP1050 的“姊妹”文件，著重于對病毒清除工藝的設計、評估和特性鑒定方面，在試驗病毒的選擇、工藝清除能力、縮小的純化模型的建立以及確認、取樣時間點的選擇、檢測方法選擇及確認、儲存以及冷凍對病毒清除樣品的影響、試驗用病毒儲存液的確認以及對清除工藝的影響、如何執(zhí)行病毒清除試驗方面給出了更為細化、更具有可參考性的指導。

2.2.2 國內(nèi)病毒去除/滅活驗證相關(guān)法規(guī) 2020 年 6 月 30 日，國家藥品監(jiān)督管理局發(fā)布了新版《生物制品注冊分類及申報資料要求》，外源因子安全性評價應按照相關(guān)技術(shù)指南進行外源因子安全性系統(tǒng)分析。目標病毒滅活驗證資料在 3.2.S.2.5 工藝驗證部分提交。非目標病毒的去除/滅活驗證研究在 3.2.A.2 外源因子安全性評價部分提交。

在我國，目前關(guān)于生物制品（血液制品、重組 DNA 制品、人用單克隆抗體、細胞治療產(chǎn)品、預防用以病毒為載體的活疫苗制劑）病毒安全的相關(guān)要求分散于相關(guān)產(chǎn)品質(zhì)量控制指導原則和《中華人民共和國藥典》等文件之中。

國內(nèi)病毒安全相關(guān)法規(guī)（表 6）與國際上保證產(chǎn)品病毒安全性的主要原則是一致的，即基于美國、歐盟和日本的人用藥品注冊協(xié)調(diào)大會標準（ICHQ5A）。該指南文件建議用3 種互補的方法來保證病毒安全性。

⑴篩選和檢測用于制備產(chǎn)品的原材料，確保所有進入生產(chǎn)的物質(zhì)，包括生物組織來源動物、生物組織原材料、細胞、細胞培養(yǎng)基和添加成分沒有病毒污染；

表 6 國內(nèi)病毒安全評估相關(guān)性法規(guī)和技術(shù)文件

⑵在細胞培養(yǎng)結(jié)束時進行病毒檢測，保證在細胞培養(yǎng)過程中沒有任何病毒污染；

⑶純化工藝清除病毒驗證，證明純化工藝能清除已知病毒和任何病毒檢測未能檢出的外源性污染病毒。

對于血液制品，國內(nèi)企業(yè)需參照 2002 年 CDE 發(fā)布的《血液制品去除/滅活病毒技術(shù)方法及驗證指導原則》，該指導原則對血液制品生產(chǎn)過程以及特定的去除/滅活病毒方法驗證進行了闡述，包括不同類型血液制品指示病毒和病毒去除/滅活方法的選擇、驗證方案的設計、結(jié)果判定以及技術(shù)驗證申報的程序。

對于生物技術(shù)產(chǎn)品（重組 DNA 制品、人用單克隆抗體、細胞治療產(chǎn)品等），細胞基質(zhì)以及部分生產(chǎn)原材料（胰酶、血清）等均存在病毒污染的風險。而且，由于 CHO、SP2/0 等細胞基因組中含有逆轉(zhuǎn)錄病毒顆粒，因此，生物制品的病毒安全性工藝驗證既要關(guān)注細胞基質(zhì)來源、原材料，還需重點考察純化工藝中對于病毒的去除/滅活能力。國內(nèi)目前一般要求生物制品進入臨床試驗前完成關(guān)鍵工序的病毒清除與滅活驗證，申報生產(chǎn)階段則要結(jié)合層析介質(zhì)的使用壽命完成對整個工藝的病毒滅活及去除驗證。國內(nèi)可參考的主要法規(guī)為《生物組織提取制品和真核細胞表達制品的病毒安全性評價技術(shù)審評一般原則》。該原則于 2005 年 12 月印發(fā)，通過闡明病毒安全性驗證研究應包括的基本內(nèi)容和要求，例如病毒污染的來源和篩查、生物組織原材料、種子庫細胞和生產(chǎn)過程中使用的動物性添加材料的病毒檢測、病毒檢測的具體方法、病毒去除/滅活工藝驗證的基本要求等，為特定品種的生產(chǎn)工藝和條件，制定適合的病毒去除/滅活試驗研究方案提供參照依據(jù)和選擇原則。該原則重點突出了對生物組織原材料/種子細胞進行病毒篩查的方法、選擇檢測的病毒種類、檢測要求、病毒去除/滅活驗證試驗設計應考慮的主要內(nèi)容，以及在驗證研究設計時如何正確選擇指示病毒，如何選擇病毒去除/滅活的方法，如何總結(jié)分析試驗資料，如何正確理解驗證的試驗結(jié)果及其代表的意義，如何正確評價病毒安全性檢測與感染風險性之間的關(guān)系等。

2.3 病毒去除/滅活技術(shù)介紹

2.3.1 有機溶劑/去污劑病毒滅活法

2.3.1.1 技術(shù)原理 在有機溶劑/去污劑（S/D）病毒滅活法發(fā)明以前，人們發(fā)現(xiàn)甲肝病毒能通過消化道傳播，而乙肝病毒通常不能通過消化道傳播，但是膽汁分泌障礙的人群通過消化道傳播乙肝病毒的概率較高?？茖W研究發(fā)現(xiàn)，這和膽汁能溶解乙肝病毒的脂包膜有關(guān)。根據(jù)以上原理，通過研究和臨床觀察發(fā)現(xiàn)，使用吐溫 80 或Triton-X 100，也有報道用Triton-X 45[15]這類的非離子型表面活性劑（去污劑）和磷酸三丁酯（有機溶劑）能夠有效破壞這類病毒的類脂膜，類脂從病毒表面脫落，使病毒失去黏附和感染細胞的能力來達到滅活病毒的效果，并且對蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)的影響也非常小。但是這種滅活方法僅對脂包膜病毒有效，對于非脂包膜病毒無任何效果。

2.3.1.2 工藝參數(shù)

理論上：1% 吐溫 80（或 Triton-X100），0.3% 磷酸三丁酯（TNBP），24 ℃/6 h（或 4 h）。

實際上：1% ± 0.3% 吐溫 80（或 Triton-X 100），0.3% ± 0.1% TNBP，（24 ± 1）℃，不少于 6 h（或 4 h）。

血液制品[16]常用病毒滅活條件為 24 ℃下用 0.3% TNBP 加 1% Tween 80 處理至少 6 h，或用 0.3% TNBP 加 1% Triton-X100 處理至少 4 h。

細胞表達工藝的抗體、重組蛋白，在 20 ~ 25 ℃ 0.3% TNBP 加 1% Tween 80 處理≥ 2 h。

S/D 處理前應先用 1 μm 濾器除去蛋白溶液中可能存在的顆粒（顆粒可能藏匿病毒從而影響病毒滅活效果）。加入 S/D 后應確保是均一的混合物。在滅活病毒全過程中應將溫度控制在規(guī)定的范圍內(nèi)。如果在加入 S/D 后過濾，則須檢測過濾后 S/D 的濃度是否發(fā)生變化，如有變化應進行適當調(diào)整。吐溫 80 應采用植物源性，并應采用稱量法量取。

2.3.1.3 注意事項 待滅活的制品中可能含有顆粒性物質(zhì)，將病毒包裹其中，使 S/D 試劑無法接觸到病毒，因此需要事先進行 1 μm（或更高的精度）的過濾以避免這種風險；加入 S/D 后制品應充分混勻，如果加入 S/D 后再行過濾，應確保過濾后 S/D 濃度仍在有效范圍內(nèi)；S/D 試劑能夠與混合容器內(nèi)每一滴制品接觸（特別是罐壁、灌頂上附著的制品可能在滅活工藝結(jié)束后又滴入罐內(nèi)），因此通常是將加入 S/D 后的制品混合均勻后，泵入另外的容器內(nèi)恒溫，執(zhí)行滅活程序；病毒滅活間與后面的生產(chǎn)工序間分開，以免造成交叉污染。通常病毒滅活間應有獨立的設備和空氣供應系統(tǒng)。

2.3.2 低 pH 孵放技術(shù)

2.3.2.1 技術(shù)原理 低 pH 孵放法是重組蛋白藥物純化工藝中常用的關(guān)鍵步驟，其操作過程簡單、病毒滅活效果好，但低 pH 環(huán)境容易使很多重組蛋白不穩(wěn)定，產(chǎn)生聚體、降解等質(zhì)量問題。相比較而言，抗體類免疫球蛋白在低 pH 環(huán)境普遍表現(xiàn)更加穩(wěn)定，成為工藝中常用步驟。其利用有脂包膜類病毒的囊膜和病毒衣殼蛋白在低 pH 條件下會逐漸變性而使病毒顆粒失去感染能力，從而達到病毒滅活效果。本方法對于無脂包膜類病毒作用微弱，但在工藝中的低 pH（如 pH 4）處理（有時加胃酶）能滅活幾種脂包膜病毒。除此之外，病毒滅活效果還可能受 pH 值、孵放時間和溫度、胃酶含量、蛋白質(zhì)濃度、溶質(zhì)含量等因素影響，驗證試驗應該研究這些參數(shù)允許變化的幅度。隨著 pH 升高，滅活效果降低，隨著溫度升高，滅活效果升高，通常可以達到 5 ~ 6 LRV 滅活效果。在 pH 3.6 時，X-MuLV 可以快速失活，且不受其他因素影響，但是在 pH 3.7、pH 3.8 時，其滅活效果會受多因素干擾[17]。而樣品中含有一定量的精氨酸時可以改善病毒滅活效果，即使在 pH 4.0的條件下也有顯著的滅活效果[18]。低 pH 孵放不僅可以滅活有脂包膜類病毒，還可以沉淀 HCP、DNA 等雜質(zhì)，對純化工藝中的雜質(zhì)去除也起到重要作用。

2.3.2.2 工藝參數(shù) 低 pH 孵放步驟通常設置為抗體親和層析純化后一步，抗體經(jīng)低 pH 溶液洗脫收集后，用低 pH 溶液（通常為鹽酸、檸檬酸等酸性溶液）調(diào)節(jié)至優(yōu)化后設定的 pH 值進行孵育，如工藝中有胃酸等其他試劑，則按照工藝條件添加，孵育結(jié)束后再用高 pH 溶液（通常為 Tris 等堿性溶液）回調(diào)至設定 pH 值，根據(jù)需要還可進行電導率調(diào)節(jié)、深層過濾等后續(xù)步驟。不同類型的抗體對 pH 耐受不同，例如 IgG4 對于低 pH 耐受較差，容易產(chǎn)生聚體，故在設定孵育 pH 值時需充分測試抗體對于 pH 值、時間耐受的程度，避免引起抗體質(zhì)量問題。

2.3.2.3 注意事項 低 pH 孵育主要應用在 IgG 類產(chǎn)品。調(diào)整溶液 pH 在4 左右，保持在 20 ~ 30 ℃，可以分解多聚體或降低多聚體產(chǎn)生，還有病毒滅活效果。對病毒滅活來說，主要是對脂包膜病毒有效，對部分非脂包膜病毒有效。為了捕獲特異性抗體常使用 Protein A 柱。單抗在 pH4 的緩沖溶液下溶出，溶出液調(diào)整 pH 值以后，保持一段時間進行病毒滅活處理。

2.3.3 納米膜過濾技術(shù)

2.3.3.1 技術(shù)原理 病毒膜過濾是利用病毒和蛋白大小的不同，小于平均孔徑的蛋白通過濾膜，大于平均孔徑的病毒截留在膜內(nèi)，從而達到去除病毒的效果[19]。病毒去除膜過濾可以同時滿足病毒去除效果好、目的蛋白質(zhì)通過性高（回收量、過濾時間）、目的蛋白質(zhì)不變性的特點，另外不管是脂包膜病毒還是非脂包膜病毒，無論病毒基因組是 RNA 還是 DNA，基本靠孔徑大小來去除病毒，所以是當前最可靠的病毒去除、滅活技術(shù)。根據(jù)目的蛋白的大小，可以選擇平均孔徑不同的濾膜。其中平均孔徑為 20 nm 左右的產(chǎn)品被稱為細小病毒濾膜。特別是近年來，由于去除小病毒的需求的提高，這種產(chǎn)品得到了廣泛的應用。平均孔徑 35 ~ 50 nm 的濾膜被稱為逆轉(zhuǎn)錄酶病毒濾膜。

與除菌過濾膜處理同樣，在病毒去除膜處理之后，應該實施制造商推薦的金膠粒子去除試驗、泄漏測試、擴散流法等對于濾膜的完整性測試。大部分情況下，病毒去除過濾在生產(chǎn)流程的最后階段加以實施。

2.3.3.2 工藝參數(shù)

料液性質(zhì)：蛋白濃度、離子強度（導電率）、pH

操作：圧力（流速）、過濾時間、蛋白過濾量，平衡液后沖洗、壓力暫停時間和次數(shù)。

2.3.3.3 注意事項 根據(jù) PDA Technical Report 41，高 TMP（跨膜壓差）是病毒過濾的最劣條件之一。近年來的報告表明，過濾過程中的壓力釋放以及之后的再加壓會影響病毒去除效果。特別是在對于添加細小病毒和噬菌體進行的實驗中，在壓力暫停并再次加壓之后，從濾液中檢測出病毒粒子。比如在實際的生產(chǎn)過程中，為了提高蛋白回收率，需要暫停壓力，然后流路切換到清洗緩沖槽進行后沖洗就是一個具體例子。這種現(xiàn)象不是某種病毒濾膜所特有的，而是所有病毒濾膜產(chǎn)品的普遍現(xiàn)象。發(fā)生這種現(xiàn)象的原因在于，暫停壓力后，被截留在膜內(nèi)的病毒粒子會再進行布朗運動，離開膜壁，再次加壓后，附近若有粒徑較大的濾孔，病毒粒子又會通過而漏出膜外。

當然，這不意味著病毒粒子一定會漏出。病毒漏出與否、漏出量取決于過濾對象溶液的性質(zhì)、過濾壓力、壓力暫停時間、病毒種類、病毒滴度/量和病毒濾膜的種類。為了判斷生產(chǎn)工藝的影響，需要使用模擬實際工藝的縮小模型進行病毒去除試驗。如果生產(chǎn)工藝中有壓力釋放過程的話，做病毒驗證實驗方案時要考慮這一因素。實際生產(chǎn)過程中的流路一般會有閥門，在模擬時可以使用旋塞來代替閥門，盡可能使用試驗流路接近實際的生產(chǎn)環(huán)境。如果觀察到病毒漏出，可以通過改變過濾條件來降低或消除風險。壓力釋放的影響取決于具體情況，應設想在預想不到的壓力釋放的情況下，是繼續(xù)過濾，還是更換濾膜，針對不同的蛋白提前采取對應措施是有意義的。

2.4 國內(nèi)外病毒去除/滅活驗證申報差異

在國內(nèi)進行新藥申報時，提交的病毒清除驗證以《生物組織提取制品和真核細胞表達制品的病毒安全性評價技術(shù)審評一般原則》及《血液制品去除/滅活病毒技術(shù)方法及驗證指導原則》為主。如果需要在國外申報或中外雙報，則需以《Viral Safety Evaluation of Biotechnology Products Derived from Cell Lines of Human or Animal Origin》《Points to Consider in the Characterization of Cell Lines Used to Produce Biologicals》《Guide Line on Virus Safety Evaluation of Biotechnological Investigational Medicinal Products》為主。指導原則的不同必然造成國內(nèi)外申報存在一些差異（表 7），具體主要有以下 3 個方面：

2.4.1 指示病毒的差異 國內(nèi)的指導原則要求比較詳細具體，明確指出了病毒的類型。規(guī)則要求：“一個典型的驗證研究所選擇的病毒，至少應包括單鏈和雙鏈的 RNA 及 DNA、脂包膜和非脂包膜、強和弱抵抗力、大和小顆粒等病毒；去除/滅活技術(shù)方面可根據(jù)采用的具體方法選擇恰當?shù)倪m宜病毒，例如 S/D 法可選用脂包膜病毒，膜過濾法可選用粒徑小的病毒，加熱法可選用脂包膜和非脂包膜病毒，低 pH 孵放法可選用對理化因素比較耐受的指示病毒等?！?/p>

當然，選擇指示病毒的核心需要以生物組織原材料、種子細胞或組織原材料勻漿、培養(yǎng)細胞結(jié)束時的混懸液中可能出現(xiàn)的污染病毒為主，結(jié)合能夠用于評價驗證效果的指示病毒的可獲得性與相關(guān)培養(yǎng)試驗條件進行合理選擇。

國外規(guī)則沒有寫明病毒的具體要求，僅要求盡可能選擇污染產(chǎn)品最相似的病毒進行驗證，即特異性指示病毒；同時需要關(guān)注理化性質(zhì)較寬的非特異性病毒。沒有像 CFDA 中那樣詳細描述病毒的特點。

2.4.2 工藝選擇上的差異 國內(nèi) IND 申報時，一般選擇低 pH 和膜過濾這兩個工藝。國外進行申報時，除了選擇低 pH 和膜過濾這兩個工藝，還需進行層析工藝。

低 pH 處理法屬于化學病毒去除/滅活的一種。原理是利用病毒表面的抗原在低 pH 值的條件下，電荷發(fā)生改變，蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)也發(fā)生不可逆的改變，從而使病毒喪失與細胞受體結(jié)合的能力，阻止其侵染細胞。常用于單克隆抗體的病毒滅活工藝。一般選擇 pH 3 ~ 3.7 處理 2 ~ 24 h。

膜過濾工藝是一種物理病毒去除/滅活方法。原理是選擇孔徑比病毒有效直徑小的濾膜，將病毒與產(chǎn)品分離。膜過濾不能單獨使用，需要與其他方法聯(lián)合使用。在病毒驗證時，需要綜合考慮蛋白溶液的濃度、濾速、壓力和過濾量等重要參數(shù)。

層析法最常用的是親和層析和離子交換層析。層析法是目前常用的樣品不同組分分離技術(shù)，利用各組分與固定相親和力的差異或相互作用不同的原理，實現(xiàn)病毒與樣品分離的目的。

2.4.3 工藝重復性方面的差異 國內(nèi)的指導原則雖然沒有硬性的規(guī)定，但通常需要做 3 個批次。在國外的指導原則中，明確指出至少分別做 2 次獨立的研究來證實清除的可重復性，因此一般是一批樣品重復兩次。

病毒去除/滅活工藝驗證流程涉及多個方面，比如指示病毒的選擇、驗證方案的選擇、清除效果的判定以及統(tǒng)計處理分析等。

2.5 我國病毒清除/滅活驗證技術(shù)第三方服務機構(gòu)

2.5.1 中國醫(yī)學科學院北京協(xié)和醫(yī)學院輸血研究所 作為我國唯一的國家級輸血醫(yī)學研究機構(gòu)，中國醫(yī)學科學院北京協(xié)和醫(yī)學院輸血研究所主要從事輸血醫(yī)學科學研究、輸血相關(guān)技術(shù)研究，為國家血液安全管理、應急醫(yī)療體系建設、輸血科學技術(shù)發(fā)展及全民知識普及等方面提供信息咨詢和技術(shù)支持，擔負著我國輸血醫(yī)學研究與發(fā)展的重要使命。科研體系由輸血傳播疾病、臨床輸血、血液干細胞、輸血醫(yī)學工程、血漿蛋白質(zhì)、血液資源管理等 6 個科研平臺組成，其中輸血傳播疾病研究平臺對外提供血液制品、醫(yī)療器械類病毒去除/滅活工藝開發(fā)以及驗證服務，暫不涉及重組產(chǎn)品類服務。

2.5.2 國藥中生上海生物制品研究所有限責任公司 上海生物制品研究所有限責任公司現(xiàn)隸屬于中國醫(yī)藥集團有限公司中國生物技術(shù)股份有限公司，是國家醫(yī)學微生物學、免疫學、細胞工程、基因工程、血液制品的主要研究機構(gòu)、生物制品產(chǎn)、學、研、銷一體的國家認定的高新技術(shù)企業(yè)，是國家第一批生物化學和分子生物學、病原生物學專業(yè)碩士學位授予單位，前身為上海生物制品廠，由衛(wèi)生部直屬領導。上海生研所科研部第七研究室對外承接病毒去除/滅活驗證服務，是國內(nèi)最早一批開展該類業(yè)務的機構(gòu)之一，服務范圍包括血液制品、單抗、重組蛋白、生化藥品等。

2.5.3 中科世生（北京）醫(yī)藥科技有限公司 中科世生（北京）醫(yī)藥科技有限公司主要開展生物醫(yī)藥產(chǎn)品的病毒檢測滅活去除驗證、植入性醫(yī)療器械材料的生物學/免疫學評價、生物醫(yī)藥項目的咨詢評估、具有自主知識產(chǎn)權(quán)產(chǎn)品的研發(fā)等業(yè)務活動。該公司是在病毒檢測、滅活、去除工藝驗證領域獲得“雙認證”（CMA 和 CNAS）的第三方專業(yè)檢測機構(gòu)，其出具的報告具有法律效力。所用的指示病毒來源于 ATCC 和 CVCC 的標準保藏毒株。目前，該公司指示病毒庫存有偽狂犬病毒（PRV）、水皰性口炎病毒（VSV）、腦心肌炎病毒（EMCV）、豬細小病毒（PPV）、犬細小病毒（CPV）、鼠細小病毒（MVM）、呼腸孤病毒III型（Reo3）、鼠白血病病毒（MuLV）、牛病毒性腹瀉病毒（BVDV）、Sindbis 病毒、EV71 病毒、流感病毒等毒株，為病毒檢測/滅活/去除驗證研究提供了溯源保障。

表 7 國內(nèi)外申報中病毒選擇差異

2.5.4 上海藥明生物技術(shù)有限公司 藥明生物的科研和質(zhì)量團隊在工藝開發(fā)、利用感染實驗和定量 PCR 進行病毒檢測和滴度分析，以及初期和后期產(chǎn)品的國際監(jiān)管等方面具備豐富的專業(yè)知識。作為專注于病毒安全領域的非官方第三方生物安全檢測服務機構(gòu)，藥明生物是少有的可以在公司內(nèi)部完成所有生物安全相關(guān)檢測的醫(yī)藥合同定制研發(fā)生產(chǎn)企業(yè)。通過消除傳統(tǒng)多供應商模式的弊端，可以顯著縮短客戶藥物研發(fā)的周期。

2.5.5 北京義翹神州科技股份有限公司 北京義翹神州科技股份有限公司病毒去除/滅活驗證研究，最早開始于2007 年，至今已有超過 10 年的經(jīng)驗，有超過 500 次病毒滅活/清除驗證研究，涉及到的產(chǎn)品類型包括抗體、蛋白、疫苗等。所用的指示病毒包括鼠白血病病毒（X-MuLv）、PRV、MVM、Reo3、VSV、桿狀病毒、彈狀病毒等。該公司提供的病毒去除/滅活驗證服務范圍包括 CHO 蛋白表達系統(tǒng)產(chǎn)品、昆蟲蛋白表達系統(tǒng)產(chǎn)品、生化藥品，其服務階段涵蓋生產(chǎn)工藝研發(fā)階段、新藥臨床試驗申報階段（investigational new drug，IND）、生物制品許可申請（biologics license application，BLA）等。病毒滅活/清除驗證服務遵循 CFDA、FDA、EMEA、ICH 和 WHO 相關(guān)法規(guī)規(guī)定，方法學驗證達到 ICH 標準。

2.5.6 蘇州良辰生物醫(yī)藥科技有限公司 蘇州良辰生物醫(yī)藥科技有限公司的主要項目是生物制品的病毒去除/滅活驗證服務，所用的指示病毒有：BVDV、MuLV、人皰疹病毒（HSV-1）、PRV、Sindbis 病毒、VSV、PPV、EMCV、MVM、呼腸孤病毒（Reo-V）等。該公司服務范圍包括動物源性醫(yī)療器械、生化藥品、生物制品，含動物源性材料中藥等。

2.5.7 武漢珈創(chuàng)生物技術(shù)股份有限公司 武漢珈創(chuàng)生物技術(shù)股份有限公司是由原武漢大學中國典型培養(yǎng)物保藏中心主任鄭從義教授領銜組建的高新技術(shù)公司。珈創(chuàng)生物研制并驗證了：①低pH 孵育工藝病毒滅活驗證技術(shù)；②納米膜過濾工藝病毒去除驗證技術(shù)；③陰離子層析工藝技術(shù)；④親和層析工藝病毒去除驗證技術(shù)；⑤疏水層析工藝病毒去除驗證技術(shù)。同期建立病毒大規(guī)模擴增及純化技術(shù)；病毒滴度測定TCID50 技術(shù)；病毒滴度測定PCR 技術(shù)等，構(gòu)建了包括PRV、MuLV、VSV、Reo3、PPV 在內(nèi)的多種標準毒株庫。珈創(chuàng)生物病毒去除/滅活技術(shù)服務包括藥品、生物制品生產(chǎn)工藝等。

[1] World Health Organization. Global status report on blood safety and availability. 2016.

[2] Plasma Protein Therapeutics Association. The PPTA vision on the plasma protein therapies sector for the next decade in Europe. (2014- 04-10).

[3] Cerus Corporation. 2017 Cerus annual report. http://www.cerus.com/ Contact-Us/Search-Results/default.aspx?SearchTerm=annual+report.

[4] Terumo Corporation. Terumo report 2019. https://www.terumo.com/ investors/library/annual-reports/.

[5] Cicchetti A, Berrino A, Casini M, et al. Health Technology Assessment of pathogen reduction technologies applied to plasma for clinical use. Blood Transfus, 2016, 14(4):287-386.

[6] Octapharma AG. Octapharma annual report 2018. https://www. octapharma.com/about-us/who-we-are/annual-report/.

[7] Inouye M, Burnouf T. The role of nanofiltration in the pathogen safety of biologicals: an update. Curr Nanoscience, 2020, 16(3):413-424.

[8] Asahi Kasei Corporation. Medium-term management initiative (FY 2016-2018) progress and outlook. https://www.asahi-kasei.com/ir/ library/asahikasei_ report/.

[9] Pall Corporation. 2014 Fact book. https://shop.pall.com/us/en/search? CatalogCategoryID=&SearchParameter=&PageSize=20&SortingAttribute=&industry=&filtertype=&topnav=&selectedtab=document&resetallqueries=false&modifyallqueries=false&resetdatecondition=&categorylevel=&SearchTerm=annual+report.

[10] Sartorius AG. Sartorius annual report 2019. https://ir-reports.sartorius. com/en/ag/fy-2019/.

[11] Merck KGaA. Mobius? sINGLE-uSE mANUfacturing. https://www. merckmillipore.com/CN/zh/Mobius-Single-Use-Manufacturing/yWmb.qB.tSUAAAFZ0i1iYtcT,nav?ReferrerURL=https%3A%2F%2Fcn.bing.com%2F.

[12] MarketWatch, Inc. Viral clearance market size, share 2020 global industry trends, statistics, competition strategies, revenue analysis, key players, regional analysis by forecast to 2026. (2020-07-16). https://www. marketwatch.com/press-release/viral-clearance-market-size-share-2020-global-industry-trends-statistics-competition-strategies-revenue-analysis-key-players-regional-analysis-by-forecast-to-2026-2020-07-16.

[13] Pall Corporation. Scalability of Cadence? Inline concentrator modules for bovine igg processing. https://cn.bing.com/search?q=% 5B13%5D%09Scalability%20of%20Cadence%E2%84%A2%20Inline%20Concentrator%20Modules%20for%20Bovine%20IgG%20Processing&qs=n&form=QBRE&sp=-1&pq=%5B13%5D%20scalability%20of%20cadence%E2%84%A2%20inline%20concentrator%20modules%20for%20bovine%20igg%20processing&sc=0-82&sk=&cvid=DFE97637BF174084A1B9958306FD2E9D.

[14] Sartorius AG. Flexact? Modular | Single-use Automated Solutions. https://www.sartorius.com/en/products/process-filtration/flexact-single-use-automated-solutions.

[15] Burnouf T, Chou ML, Cheng LH, et al. Dengue virus inactivation by minipool TnBP/Triton X-45 treatment of plasma and cryoprecipitate. Vox Sang, 2013, 104(1):1-6.

[16] Horowitz B, Prince AM, Horowitz MS, et al. Viral safety of solvent-detergent treated blood products. Dev Biol Stand, 1993, 81: 147-161.

[17] Chinniah S, Hinckley P, Connell-Crowley L. Characterization of operating parameters for XMuLV inactivation by low pH treatment. Biotechnol Prog, 2016, 32(1):89-97.

[18] Yamasaki H, Tsujimoto K, Koyama AH, et al. Arginine facilitates inactivation of enveloped viruses. J Pharm Sci, 2008, 97(8):3067- 3073.

[19] Hamamoto Y, Harada S, Kobayashi S, et al. A novel method for removal of human immunodeficiency virus: filtration with porous polymeric membranes. Vox Sang, 1989, 56(4):230-236.

容新宗，Email：48740770@qq.com

2020-07-03

10.3969/j.issn.1673-713X.2020.04.018