苑志軍，徐海燕

（上海生農(nóng)生化制品股份有限公司，上海201989）

四螨嗪是一種新型高效殺螨劑，其對(duì)葉螨的卵和幼、若螨觸殺效果好，不能觸殺成螨，但成螨觸藥后產(chǎn)卵量減少，卵的孵化也受到抑制。聯(lián)苯肼酯是一種新型選擇性葉面用噴霧藥劑，其對(duì)螨的各個(gè)生活階段有抑制效果，且持效期長(zhǎng)。為了提高檢測(cè)準(zhǔn)確性和檢測(cè)效率，找到適合本公司產(chǎn)品的分析方法，經(jīng)過(guò)多次分析條件篩選，采用高效液相色譜法對(duì)聯(lián)苯肼酯和四螨嗪混劑同時(shí)進(jìn)行分離測(cè)定，方法簡(jiǎn)便可行，適用于生產(chǎn)質(zhì)量控制。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

儀器：Agilent 1260高效液相色譜儀，具有紫外檢測(cè)器和自動(dòng)進(jìn)樣器，Agilent 1260色譜工作站，色譜柱：Agilent Eclipse XDB C18 250 mm×4.6 mm(id)不銹鋼柱，內(nèi)裝C18填充物，粒徑5 μm；過(guò)濾器，濾孔膜徑約0.45 μm；超聲波清洗器。

試劑：乙腈，色譜純；水，新二次蒸餾水；聯(lián)苯肼酯標(biāo)樣，已知質(zhì)量分?jǐn)?shù)98.2%；四螨嗪標(biāo)樣，已知質(zhì)量分?jǐn)?shù)97.0%；試樣，30%聯(lián)苯肼酯·四螨嗪懸浮劑，自制；空白制劑：將除原藥外的所有助劑混勻，自制。

1.2 色譜條件

流動(dòng)相：乙腈+水=50+50（V/V）；柱溫：30℃；流速：1.2 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：270 nm；進(jìn)樣體積：5 μL；保留時(shí)間：聯(lián)苯肼酯8.8 min，四螨嗪20.9 min；以上操作參數(shù)是典型的，可根據(jù)不同儀器特點(diǎn)對(duì)給定操作參數(shù)作適當(dāng)調(diào)整，以期獲得最佳效果。在上述條件下，聯(lián)苯肼酯和四螨嗪典型高效液相色譜圖如圖1、圖2所示。

圖1 聯(lián)苯肼酯·四螨嗪標(biāo)樣高效液相色譜圖

圖2 30%聯(lián)苯肼酯·四螨嗪懸浮劑高效液相色譜圖

1.3 測(cè)定步驟

1.3.1 標(biāo)樣溶液的配制

稱取聯(lián)苯肼酯和四螨嗪標(biāo)樣各0.05 g（精確至0.000 2 g）于100 mL容量瓶中，用乙腈溶解并稀釋至刻度，置于超聲水浴中振蕩15 min，取出冷卻至室溫，備用。

1.3.2 試樣溶液的配制

稱取約0.35 g的試樣（精確至0.000 2 g）于100 mL容量瓶中，用乙腈溶解并稀釋至刻度，置于超聲水浴中振蕩15 min，取出冷卻至室溫后用0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾，備用。

1.3.3 測(cè)定

在上述色譜條件下，待儀器基線穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，直至相鄰兩針聯(lián)苯肼酯和四螨嗪的相對(duì)響應(yīng)值變化小于1.5%后，按照標(biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液的順序進(jìn)樣測(cè)定。

1.3.4 計(jì)算

將測(cè)得的兩針試樣溶液以及試樣溶液前后兩針標(biāo)樣溶液中聯(lián)苯肼酯（四螨嗪）峰面積分別進(jìn)行平均。聯(lián)苯肼酯（四螨嗪）質(zhì)量分?jǐn)?shù)X（%）按式（1）計(jì)算：

式中：A1—前后兩次進(jìn)樣測(cè)得的同一標(biāo)樣溶液中聯(lián)苯肼酯（四螨嗪）峰面積的平均值；A2—前后兩次進(jìn)樣測(cè)得的同一試樣溶液中聯(lián)苯肼酯（四螨嗪）峰面積的平均值；m1—聯(lián)苯肼酯（四螨嗪）標(biāo)樣的質(zhì)量，g；m2—試樣的質(zhì)量，g；P—聯(lián)苯肼酯（四螨嗪）標(biāo)樣的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%。

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜條件的選擇

2.1.1 波長(zhǎng)的選擇

利用DAD檢測(cè)器對(duì)聯(lián)苯肼酯和四螨嗪分別進(jìn)行掃描。從圖3、圖4可看出，聯(lián)苯肼酯在230 nm、270 nm都有吸收峰，四螨嗪270 nm處有吸收峰，考慮到分離好且避免溶劑及雜質(zhì)干擾和峰面積、峰高的比例，并且能直接進(jìn)行配藥定量分析，故選擇270 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

圖3 聯(lián)苯肼酯的光譜圖

圖4 四螨嗪的光譜圖

2.1.2 色譜柱和流動(dòng)相的選擇

分離柱采用常用的C18柱，從分離時(shí)間和效果考慮，選定250 mm×4.6 mm(id)C18不銹鋼柱。分別用乙腈和水配成不同的流動(dòng)相，反復(fù)篩選進(jìn)樣，得到不同的分離效果圖。經(jīng)過(guò)多種分離情況對(duì)比，選定流動(dòng)相為乙腈+水=50+50（V/V），流速：1.2 mL/min時(shí)，有效成分與雜質(zhì)互不干擾分離，峰形對(duì)稱，基線平穩(wěn)，保留時(shí)間適宜。

2.2 方法線性相關(guān)性

準(zhǔn)確稱取聯(lián)苯肼酯標(biāo)樣（含量為98.2%）1.25 g、四螨嗪標(biāo)樣（含量為97.0%）1.25 g于250 mL容量瓶中，加入乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻。準(zhǔn)確吸取2 mL、5 mL、10 mL、15 mL、20 mL樣品置于5只100 mL容量瓶中，用乙腈稀釋至刻度，搖勻后進(jìn)樣分析，得其響應(yīng)值。以標(biāo)準(zhǔn)液質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)液峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得聯(lián)苯肼酯標(biāo)準(zhǔn)曲線為：Y=6 741.4X+3.038 9，相關(guān)系數(shù)r=1.000 0，表明聯(lián)苯肼酯在質(zhì)量濃度0.098 2～0.981 6 g/L范圍內(nèi)，峰面積與質(zhì)量濃度間線性關(guān)系良好；得四螨嗪標(biāo)準(zhǔn)曲線為：Y=10 896X+13.56，相關(guān)系數(shù)r=1.000 0，表明四螨嗪在質(zhì)量濃度0.098 3～0.982 8 g/L范圍內(nèi)，峰面積與質(zhì)量濃度間線性關(guān)系良好。線性相關(guān)性測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1、圖5、圖6。

表1 聯(lián)苯肼酯和四螨嗪線性相關(guān)性

圖5 聯(lián)苯肼酯液相色譜線性關(guān)系圖

圖6 四螨嗪液相色譜線性關(guān)系圖

2.3 方法的準(zhǔn)確度試驗(yàn)

按照配方比例，稱取0.28 g（精確至0.000 2 g）空白制劑樣品置于100 mL容量瓶中，分別添加0.08 g（精確至0.000 2 g）含量為97.0%的四螨嗪和0.04 g含量為98.2%的聯(lián)苯肼酯標(biāo)準(zhǔn)品，得到5個(gè)實(shí)驗(yàn)室合成樣品，然后按上述色譜條件測(cè)定其含量，計(jì)算回收率，聯(lián)苯肼酯平均回收率為100.26%，四螨嗪平均回收率為100.30%（見(jiàn)表2）。

2.4 方法的精密度試驗(yàn)

分別稱取30%聯(lián)苯肼酯·四螨嗪懸浮率樣品6份，按上述方法進(jìn)行6次平行測(cè)定，四螨嗪含量平均值為9.95%，標(biāo)準(zhǔn)偏差0.039，變異系數(shù)0.4%；聯(lián)苯肼酯含量平均值為19.89%，標(biāo)準(zhǔn)偏差0.097，變異系數(shù)0.49%，說(shuō)明該方法精密度較高（見(jiàn)表3）。

表2 回收率結(jié)果

表3 精密度結(jié)果

3 結(jié)論

綜上所述，該分析方法準(zhǔn)確度、精密度高，線性關(guān)系良好，是分析30%聯(lián)苯肼酯·四螨嗪懸浮劑中有效成分聯(lián)苯肼酯和四螨嗪的一種準(zhǔn)確、可靠的方法。