張亞鋒,荀 英,孫 曉△,李 榮,單 敏,陳玉龍
(1. 陜西省西安市食品藥品檢驗(yàn)所,陜西 西安 710054; 2. 陜西省渭南市中醫(yī)醫(yī)院,陜西 渭南 714000;
3. 陜西省藥品技術(shù)審核查驗(yàn)中心,陜西 西安 710065)
五味子為木蘭科植物五味子Schisandra chinensis(Turcz.)Baill. 的干燥成熟果實(shí),始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》。作為藥食同源的傳統(tǒng)中藥材,五味子含有多種化學(xué)成分,有益氣斂肺、解毒保肝、生津止渴、滋腎澀精、寧心安神、抗菌、抗炎、抗氧化、免疫調(diào)節(jié)等功效,臨床常用于治療肺炎、肝病、心臟病、失眠等且五味子多糖具有較好的免疫促進(jìn)和抑瘤作用[1-9]。五味子顆粒是五味子加水煎煮2 次后濃縮加入輔料,制成顆粒所得。五味子糖漿是五味子粗粉,用30%乙醇浸漬72 h 后,滲漉加入輔料所得。2015年版《中國(guó)藥典(一部)》收錄的含量測(cè)定項(xiàng),五味子、五味子顆粒、五味子糖漿的含量測(cè)定指標(biāo)均為五味子典型成分五味子醇甲?;诖酥笜?biāo)分析,抽查的30 批次樣品均符合規(guī)定,但成品狀態(tài)、工藝、劑型均不同[10],會(huì)導(dǎo)致三者間木質(zhì)素類成分有差異。本研究中采用多組分峰面積比較法評(píng)價(jià)五味子藥材及其單味制劑中木質(zhì)素類成分相對(duì)含量的差異,即以樣品中某一典型成分(五味子醇甲為內(nèi)標(biāo)物),以其響應(yīng)面積作為1,計(jì)算其余成分(五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素)響應(yīng)面積的相對(duì)比例,進(jìn)而比較不同工藝產(chǎn)品間的差異?,F(xiàn)報(bào)道如下。
UltiMate 3000 型高效液相色譜儀(Chromeleon 7.2工作站,UV 檢測(cè)器,Thermo Fisher Scientific);ME204E型電子分析天平(精度為萬分之一),MS105 型電子分析天平(精度為十萬分之一),均購(gòu)自德國(guó)Mettler-Toledo 公司;KQ700VDB 型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司,功率為700 W,頻率為45 kHz)。
五味子醇甲對(duì)照品(批號(hào)為110857-201010),五味子酯甲對(duì)照品(批號(hào)為110857-201714),五味子甲素對(duì)照品(批號(hào)為110764-201010),五味子乙素對(duì)照品(批號(hào)為110765-200710),均購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所;甲醇(分析純,國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司);乙腈(色譜純,F(xiàn)isher);水為超純水(實(shí)驗(yàn)室自制);五味子藥材、五味子顆粒、五味子糖漿均為監(jiān)督抽樣樣品,各隨機(jī)選取10 批次。
色譜柱:OMNI BOND C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);流動(dòng)相:乙腈(A)-水(B),梯度洗脫(0 ~15 min 時(shí)50%A,15 ~25 min 時(shí)50%A ~55%A,25 ~30 min 時(shí)55%A ~75%A,30 ~38 min 時(shí)75%A,38 ~43 min 時(shí)75% A ~65% A,43 ~49 min 時(shí) 65% A ~50% A);流 速:1.0 mL/min;柱溫:30 ℃;檢測(cè)器:紫外檢測(cè)器;檢測(cè)波長(zhǎng):217 nm;進(jìn)樣量:10 μL[11-19]。
分別精密稱取1.2 項(xiàng)下各對(duì)照品適量,置25 mL 容量瓶中,用甲醇定容,搖勻,即得對(duì)照品溶液。取五味子藥材適量,研細(xì),取0.3 g,精密稱定,置100 mL 錐形瓶中,精密加入甲醇25 mL,密塞,稱定質(zhì)量,超聲處理30 min(功率為250 W,頻率為20 kHz),放冷,再稱定質(zhì)量,用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量,搖勻,0.45 μm 微孔濾膜濾過,取續(xù)濾液,即得五味子藥材供試品溶液。取五味子顆粒適量,研細(xì),取0.9 g,精密稱定,按五味子藥材供試品溶液制備方法制備五味子顆粒供試品溶液。精密吸取五味子糖漿3 mL,按五味子藥材供試品溶液制備方法制備五味子糖漿供試品溶液。
本研究中對(duì)含量測(cè)定方法進(jìn)行了專屬性、耐用性、準(zhǔn)確度、精密度、重復(fù)性、加樣回收試驗(yàn)等方法學(xué)考察。結(jié)果表明,本研究中所采用含量測(cè)定方法結(jié)果準(zhǔn)確、可靠,可用于五味子及其單味制劑中木質(zhì)素類成分相對(duì)差異探究的數(shù)據(jù)采集處理分析。
將對(duì)照品溶液,空白溶劑,五味子藥材、五味子顆粒、五味子糖漿供試品溶液分別按擬訂色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。色譜圖見圖1,峰面積見表1 至表3。
圖1 高效液相色譜圖
以樣品中五味子醇甲為內(nèi)標(biāo)物,以其響應(yīng)面積作為1,計(jì)算五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素響應(yīng)面積的相對(duì)比值,采用SPSS 18.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析,繪制箱型圖,詳見圖2。
五味子酯甲在以五味子醇甲為內(nèi)標(biāo)物的相對(duì)比值分析中,五味子藥材高于五味子顆粒,五味子糖漿次之,相對(duì)比值中位數(shù)依次為0.035,0.029,0.013。五味子甲素在以五味子醇甲為內(nèi)標(biāo)物的相對(duì)比值分析中,五味子藥材高于五味子顆粒,五味子糖漿次之,相對(duì)比值中位數(shù)依次為0.224,0.165,0.031。五味子乙素在以五味子醇甲為內(nèi)標(biāo)物的相對(duì)比值分析中,五味子藥材高于五味子顆粒,五味子糖漿次之,相對(duì)比值中位數(shù)依次為0.464,0.330,0.012。
五味子顆粒采用五味子加水煎煮,水提液濃縮,加乙醇濃縮,添加輔料制粒等工藝步驟,工藝較五味子糖漿更煩瑣。結(jié)果顯示,五味子顆粒中木質(zhì)素類成分相對(duì)比值較五味子糖漿更離散,分析原因可能與五味子藥材大小、煎煮溶劑水量、水提液濃縮溫度、回收乙醇濃縮溫度、制粒方式、顆粒干燥溫度等多因素有關(guān)[20-23]。
五味子糖漿采用30%乙醇浸漬滲漉、添加輔料的工藝步驟,相比五味子顆粒、五味子糖漿生產(chǎn)工藝更簡(jiǎn)單、可控。結(jié)果顯示,五味子糖漿木質(zhì)素類成分相對(duì)比值較五味子顆粒更集中,分析原因發(fā)現(xiàn),五味子糖漿采用粗粉,原料大小均一;滲漉法提取,影響因素更少,從數(shù)據(jù)離散角度分析,五味子糖漿工藝更穩(wěn)定、可控。
表1 五味子藥材中木質(zhì)素類成分相對(duì)比值測(cè)定結(jié)果
表2 五味子顆粒中木質(zhì)素類成分相對(duì)比值測(cè)定結(jié)果
表3 五味子糖漿中木質(zhì)素類成分相對(duì)比值測(cè)定結(jié)果
結(jié)果顯示,五味子顆粒中的五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素相對(duì)提取率高于五味子糖漿。分析制劑工藝過程,得出可能與五味子顆粒采用水煎煮提取方法、提取過程劇烈、提取溫度高致使木質(zhì)素類組分的溶解度增大有關(guān),從整體木質(zhì)素類組分相對(duì)提取率角度分析,五味子顆粒工藝提取效果更好。提示大生產(chǎn)時(shí)應(yīng)進(jìn)行藥效學(xué)物質(zhì)提取率和工藝穩(wěn)定性的綜合考量,篩選出更科學(xué)、可靠、經(jīng)濟(jì)的制劑工藝。
本研究中采用的評(píng)價(jià)方法對(duì)藥品的評(píng)價(jià)將不局限于單一組分,更加全面、科學(xué);只需對(duì)某一典型成分進(jìn)行含量測(cè)定,后期建立科學(xué)、可靠的譜效比例關(guān)系后,只需在相同色譜條件下進(jìn)行峰面積比較即可得出結(jié)論;方便快捷,任意一針分析樣品色譜圖即可計(jì)算積分,完成質(zhì)量評(píng)價(jià),更加便捷,極大地避免了人員操作誤差(稱量誤差、定容誤差等)和儀器誤差(進(jìn)樣量誤差等),數(shù)據(jù)結(jié)果更可靠,質(zhì)量評(píng)價(jià)更全面。但此方法對(duì)提取溶劑、檢測(cè)波長(zhǎng)、色譜分離等要求更嚴(yán)苛,尤其在分析評(píng)價(jià)處方組成較復(fù)雜的復(fù)方制劑時(shí)更困難。該方法對(duì)于評(píng)價(jià)五味子藥材、五味子顆粒和五味子糖漿中多組分相對(duì)含量差異與傳統(tǒng)方法結(jié)果一致,且操作更簡(jiǎn)單快速,更易避免操作誤差,且計(jì)算方便。
圖2 箱型圖