宋姍姍,李 瑞△,曹昺焱,張婧怡,金永祚,金奉奎

(1.北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京 100029； 2.中國中醫(yī)科學(xué)院西苑醫(yī)院，北京 100091)

糖尿病(Diabetes Mellitus，DM)是一種以慢性高血糖為主要特征的代謝性疾病，在我國糖尿病發(fā)病以2型糖尿病為主，患病率約為10.4%，且呈逐年上升趨勢[1]。隨著物質(zhì)生活水平極大豐富，我國肥胖和超重人口不斷增多。流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果已證實(shí)肥胖能增加T2DM發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，而肥胖人群糖尿病患病率升高了2倍[2]。2型糖尿病肥胖患者常伴有血脂異常，這些血脂代謝異常是引起糖尿病血管病變的重要危險(xiǎn)因素[3]。有研究顯示，肥胖伴2型糖尿病患者利用非手術(shù)減重療法能在短期內(nèi)改善血糖和其他代謝指標(biāo)[4]。

循證醫(yī)學(xué)研究表明，降低總膽固醇(TC)水平可顯著降低糖尿病患者發(fā)生大血管病變和死亡風(fēng)險(xiǎn)[5]。本實(shí)驗(yàn)通過電針治療原發(fā)性2型糖尿病肥胖大鼠，觀察其血糖、血脂及瘦素指標(biāo)的變化情況，為臨床治療該病提供參考和依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動物

實(shí)驗(yàn)動物為7只體質(zhì)量140～160 g(2月齡)的SPF級雄性Zucker Lean、ZL(fa/+)大鼠以及14只同月齡SPF級雄性Zucker Diabetic Fatty、ZDF(fa/fa)大鼠。全部動物購自北京維通利華公司。動物于23°C，空氣流通，相對濕度60%，12 h晝夜循環(huán)光照的條件下飼養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)于4周誘導(dǎo)飼養(yǎng)后開始進(jìn)行，適應(yīng)性飼養(yǎng)期間，如無特殊需要，動物自由飲食水。按北京維通利華公司建議，在誘導(dǎo)飼養(yǎng)及成模后干預(yù)期間，全部動物均以Purina #5008飼料喂養(yǎng)。

1.2 動物飼料

Purina #5008飼料(組成：粗蛋白≥23.0%，粗脂肪≥6.5%，粗纖維≤4.0%，粗灰分≤10%，水分≤11.0%，磷≥0.65%，鈣0.75%～1.25%；原料組成：玉米粉，脫殼大豆粉，小麥粉，魚粉，麥麩，啤酒酵母，蔗糖蜜，麥芽，甜菜粉，燕麥粉，大豆粉，脫水苜蓿草粉，大豆殼粉，礦物質(zhì)和維生素)。

1.3 實(shí)驗(yàn)耗材

羅氏ACCU-CHEK血糖儀(LOT 10129770，羅氏血糖健康醫(yī)護(hù)公司);羅氏血糖試紙(LOT 24685431，羅氏血糖健康醫(yī)護(hù)公司);大鼠[許可證號SCXK(京)2016-0006，北京維通利華實(shí)驗(yàn)動物技術(shù)有限公司];中研太和牌0.13 mm×7 mm針灸針(212161123，北京中研太和醫(yī)療器械有限公司)。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 動物分組

ZDF大鼠誘導(dǎo)飼養(yǎng)4周后，以空腹血糖及OGTT2h血糖均>11.1 mmol/L為成模標(biāo)準(zhǔn)。成模的ZDF大鼠依空腹血糖排序隨機(jī)區(qū)組分為兩組,模型組與電針組。7只ZDF對照大鼠作為對照組。

2.2 治療方法

2.2.1 對照組及模型組 不干預(yù)。

2.2.2 電針組 將動物固定于可伸出四肢的棉布鼠套靜置5 min，以0.13 mm×7 mm針灸針(中研太和牌無菌針灸針)針刺雙側(cè)“后三里”“三陰交”“脾俞”“胃脘下俞”，直刺深度4～6 mm，連通電針儀(電針一端連接于“胃脘下俞”，一端連接同側(cè)“后三里”，形成回路)，連續(xù)波，頻率15 Hz，電流輸出強(qiáng)度2 mA，以大鼠肌肉輕微抖動而無嘶叫為宜，留針20 min，每周6次(周一至周六)，4周。

以上各種干預(yù)操作均于每日13:00—18:00期間進(jìn)行，連續(xù)干預(yù)4周。于干預(yù)第1周、第4周周六晚20:00禁食，周日早8:00檢測空腹體質(zhì)量、血糖。

2.3 樣本采集及指標(biāo)檢測

所有動物于全部干預(yù)結(jié)束后，自由飲食水，于實(shí)驗(yàn)結(jié)束當(dāng)晚22:00禁食，次日早8:00以2%戊巴比妥鈉溶液按照45 mg/kg的藥量比腹腔注射麻醉，腹主動脈取血5～10 mL離心管中，室溫靜置凝固后，于4℃條件下3 000 r/min離心15 min分離血清，以放射免疫法檢測血清總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、極低密度脂蛋白(vLDL-C)、瘦素含量。

2.4 統(tǒng)計(jì)分析

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 各組大鼠血糖變化情況

由表1可見,治療前與對照組相比，模型組、電針組空腹血糖明顯上升(P<0.05)，而模型組和電針組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。治療第1周末，模型組、電針組與對照組相比空腹血糖值仍升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；治療第4周末，與對照組相比，模型組、電針組空腹血糖值升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與模型組相比，電針組血糖有所下降，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，比較均值評分(MS,Mean Score)顯示電針組有一定降糖效果。

表1 各組大鼠治療前后空腹血糖比較

注：與對照組相比，*P<0.05。

3.2 各組大鼠體質(zhì)量增加情況

干預(yù)期間各組大鼠均服用高糖高脂特殊飼料(Purina #5008)，由表2可知,治療1周后對照組、模型組、電針組大鼠體質(zhì)量均有所增加。與對照組相比，電針組體質(zhì)量增加值明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。治療4周后，模型組、電針組體質(zhì)量增加值低于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。電針組較模型組體質(zhì)量增加值低，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，說明電針“后三里”“三陰交”“脾俞”“胃脘下俞”穴組可控制2型糖尿病肥胖大鼠的體質(zhì)量變化。

表2 各組大鼠治療后體質(zhì)量增加比較

注：與對照組相比，*P<0.05。

3.3 治療后各組大鼠血清TC、TG、HDL-C、LDL-C、vLDL-C水平比較

由表3可知,與對照組相比，模型組TC、TG、HDL-C水平均顯著升高(P<0.05)；與模型組相比，電針組血清總膽固醇(TC)水平明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；模型組與電針組相比，甘油三酯、高密度脂蛋白膽固醇值有所下降，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；低密度脂蛋白膽固醇、極低密度脂蛋白膽固醇，3組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)?？梢婋娽樋擅黠@降低2型糖尿病肥胖大鼠血清TC、TG、HDL-C的水平。

表3 各組大鼠治療后各血脂指標(biāo)比較

注：與對照組相比，*P<0.05；與模型組相比，#P<0.05。

3.4 治療后各組大鼠血清瘦素水平比較

由表4可知,模型組、電針組與對照組相比，血清瘦素水平顯著升高(P<0.05)。與模型組相比，電針組血清瘦素水平有所下降，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。說明電針可改善2型糖尿病肥胖大鼠血清瘦素水平。

表4 各組大鼠治療后血清瘦素比較

注：與對照組相比，*P<0.05。

4 討論

大量研究已證實(shí)針灸治療糖尿病的有效性，本研究結(jié)合李瑞教授多年臨床及科研經(jīng)驗(yàn)，聯(lián)合電針治療針對肥胖型糖尿病模型大鼠進(jìn)行研究。采用總結(jié)出的優(yōu)勢經(jīng)驗(yàn)穴組，所用滋陰清熱法，以針對消渴病陰虛為本，燥熱為標(biāo)之病機(jī)。選擇三陰交滋陰補(bǔ)腎，足三里清陽明燥熱、滋陰清熱并用，以達(dá)“正不傷而結(jié)去”。選用背俞穴脾俞、胃脘下俞，調(diào)暢臟腑經(jīng)氣，能整體調(diào)節(jié)、恢復(fù)陰陽平衡的功能。

本研究表明，電針組較模型組空腹血糖水平降低，說明電針對2型糖尿病肥胖大鼠的血糖調(diào)節(jié)是有一定治療作用的。由于對照組ZL大鼠(fa/+)與模型組、電針組ZDF大鼠(fa/fa)基因型不同，故以各組大鼠體重增加值作為評判指標(biāo)，干預(yù)期間各組大鼠均服用高糖高脂特殊飼料(Purina #5008)，對照組體重增加最多，模型組次之，電針組體重增加最少。究其原因，在成模后對照組體質(zhì)量仍在各組中最輕，長期高糖高脂飼料喂養(yǎng)，體重增長迅速；與模型組相比，電針組體質(zhì)量增加值有所減少，說明電針對2型糖尿病肥胖大鼠的體質(zhì)量亦有一定干預(yù)作用。

糖尿病心血管并發(fā)癥是由糖、脂代謝紊亂所致[6]，2型糖尿病患者血脂紊亂的發(fā)生率很高，如若不積極控制血清總膽固醇水平增高，將極大增加心血管疾病患病風(fēng)險(xiǎn)[7]。一些國內(nèi)外前瞻性研究認(rèn)為隨著TC增加，出現(xiàn)空腹血糖、甘油三酯和血壓水平增高的聚集現(xiàn)象[8]。本研究電針組與模型組相比，各項(xiàng)血脂指標(biāo)均有所下降，提示電針可通過有效降低血清總膽固醇水平，減少2型糖尿病心腦血管疾病發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)，調(diào)節(jié)機(jī)體整體生理機(jī)能。

2型糖尿病是以胰島素抵抗為發(fā)病基礎(chǔ)的非胰島素依賴性糖尿病，約占糖尿病總數(shù)的90%，其中70%的患者為超重或肥胖[9]。而肥胖型2型糖尿病患者的瘦素水平是顯著升高的[10]。肥胖與胰島素分泌密切相關(guān)，生理情況下，胰島素可以促進(jìn)脂肪合成和抑制分解，瘦素對脂肪的主要為分解作用。在胰島素抵抗等病理情況下，瘦素增多則會造成脂肪組織胰島素抵抗，即脂肪合成減少，分解增加，產(chǎn)生大量的游離脂肪酸而引起胰島素抵抗。由于血清瘦素水平與胰島素抵抗密切相關(guān)，因此控制瘦素水平可以改善胰島素抵抗[11]。本研究結(jié)果顯示，電針組較模型組瘦素水平有所下降，說明電針可控制肥胖型糖尿病模型大鼠瘦素水平，進(jìn)而緩解胰島素抵抗，達(dá)到治療2型糖尿病的目的。

綜上所述，電針可降低2型糖尿病ZDF大鼠血糖、血脂水平，控制肥胖大鼠體質(zhì)量，同時電針可降低瘦素水平，從而改善其胰島素抵抗?fàn)顩r，緩解糖尿病肥胖大鼠糖、脂代謝異常，電針起效的作用可能與其相關(guān)。然糖尿病為一全身性疾病，涉及多臟腑，本研究所得長期性如何,亦需大樣本前瞻性研究予以評價。