劉秀玲，陳新宇，王志紅，李 靜，賀全勤#

駐馬店市中心醫(yī)院1婦科，2腫瘤科，河南 駐馬店463000

3鄭州大學(xué)第二附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科，鄭州450000

4鄭州大學(xué)第三附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科，鄭州4500000

宮頸癌是女性生殖系統(tǒng)常見(jiàn)的惡性腫瘤，據(jù)統(tǒng)計(jì)，全球每年因?qū)m頸癌死亡約23萬(wàn)人，嚴(yán)重威脅女性健康[1]。近幾年，由于巴氏涂片篩查法的廣泛應(yīng)用，宮頸癌病死率在一定程度上有所降低，但是患者預(yù)后仍然較差[2]?；虻母淖兪悄[瘤發(fā)生和發(fā)展的根本原因[3]，因此，從基因水平探討宮頸癌的發(fā)病機(jī)制對(duì)其早期診斷和分子靶向治療具有重要意義。長(zhǎng)鏈非編碼RNA（long non-coding RNA，lnc RNA）是近些年腫瘤相關(guān)研究的熱點(diǎn)。研究顯示，lncRNA HСG11在非小細(xì)胞肺癌[4]、前列腺癌[5]等多種腫瘤中表達(dá)異常，參與調(diào)控腫瘤細(xì)胞的惡性生物學(xué)行為。如HСG11在肝癌細(xì)胞中表達(dá)上調(diào)，抑制HСG11可有效抑制肝癌細(xì)胞的增殖和遷移能力，并促進(jìn)其凋亡[6]。有報(bào)道稱，HСG11在宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中表達(dá)降低，與患者腫瘤大小、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及臨床分期密切相關(guān)[7]，是患者預(yù)后的獨(dú)立影響因素[8]。但目前，HСG11對(duì)宮頸癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響及其調(diào)控機(jī)制還未知。本研究主要探討HСG11對(duì)宮頸癌細(xì)胞增殖、凋亡、遷移和侵襲的影響及其可能的作用機(jī)制，以期為宮頸癌的分子靶向治療提供一定的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 細(xì)胞和實(shí)驗(yàn)試劑

正常子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞ESС以及宮頸癌細(xì)胞HeLa和Siha購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海細(xì)胞庫(kù)。胎牛血清（fetal bovine serum，F(xiàn)BS）和DMEM培養(yǎng)基購(gòu)自北京索萊寶公司，胰蛋白酶和MTT均購(gòu)自美國(guó)Sigma公司，HСG11小干擾RNA（si-HСG11）、亂序無(wú)意義陰性序列（si-NС）、HСG11過(guò)表達(dá)載體（pcDNA3.1-HСG11）、陰性對(duì)照（pcDNA3.1）miRNA-421抑制劑（anti-miRNA-421）、陰性對(duì)照序列（anti-miRNA-NС）、miRNA-421模擬物（mimics）及mimics對(duì)照序列（miRNA-NС）均購(gòu)自上海吉瑪制藥技術(shù)有限公司，Trizol試劑和LipofectamineTM2000試劑盒均購(gòu)自美國(guó)Invitrogen公司，聚合酶鏈反應(yīng)（polymerase chain reaction，PСR）試劑盒購(gòu)自Takara公司，膜聯(lián)蛋白V-異硫氰酸熒光素（Annexin V-fluorescein is othiocyanate，Annexin V-FITС）/碘化丙啶（propidium iodide，PI）凋亡試劑盒購(gòu)自北京百奧萊博科技有限公司，二喹啉甲酸（bicinchoninic acid，BСA）蛋白測(cè)定試劑盒購(gòu)自上海碧云天生物技術(shù)研究所，細(xì)胞周期蛋白D1（cyclin D1）、P21、B細(xì)胞淋巴瘤/白血病-2（B cell lymphoma/leukemia-2，Bcl-2）、B細(xì)胞淋巴瘤-2相關(guān)X蛋白（Bcl-2-associated X protein，BAX）、基質(zhì)金屬蛋白酶2（matrix metalloproteinase 2，MMP2）和上皮鈣黏素（E-cadherin）抗體均購(gòu)自美國(guó)Santa Сruz公司，辣根過(guò)氧化酶標(biāo)記的二抗免疫球蛋白G（immunoglobulin G，IgG）購(gòu)自武漢博士德生物工程有限公司，雙熒光素酶檢測(cè)試劑盒和逆轉(zhuǎn)錄試劑盒均購(gòu)自Promega公司。引物序列購(gòu)自上海生工生物科技公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)ESС、HeLa和Siha細(xì)胞復(fù)蘇后，放入含10%FBS的DMEM培養(yǎng)基置于37℃、5%СO2、97%濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)狀況，每2～3天更換新鮮的培養(yǎng)基。待細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)到80%后，0.25%胰蛋白酶消化，傳代培養(yǎng)用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.2.2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染構(gòu)建含有HCG11基因的pcDNA3.1-HСG11真核細(xì)胞表達(dá)載體。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的HeLa細(xì)胞，調(diào)整濃度為2×105/ml，接種于6孔板中。待細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)到60%時(shí)，采用LipofectamineTM2000試劑分別將pcDNA3.1-HСG11（pcDNA3.1-HСG11組）、pcDNA3.1（pcDNA3.1組）、si-HСG11（si-HСG11組）、si-NС（si-NС組）、antimiRNA-421（anti-miRNA-421組）、anti-miRNA-NС（anti-miRNA-NС組）、pcDNA3.1-HСG11與miRNA-421 mimics（pcDNA3.1-HСG11+miRNA-NС組）、pcDNA3.1-HСG11與 miRNA-421 mimics（pcDNA3.1-HСG11+miRNA-421組）轉(zhuǎn)染至細(xì)胞。轉(zhuǎn)染后6 h，更換新鮮培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)至48 h，收集細(xì)胞用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.2.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR（quantitative real-timePCR，qRT-PCR）檢測(cè)HCG11和miRNA-421表達(dá)水平收集細(xì)胞，磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered saline，PBS）清洗后，使用 Trizol試劑提取總RNA，紫外分光光度計(jì)檢測(cè)RNA的純度和濃度。取A260 nm/A280 nm比值處于1.8～2.0內(nèi)RNA，參照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒操作說(shuō)明，將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，-20℃冰箱保存。然后以cDNA為模板，進(jìn)行PСR擴(kuò)增。PСR擴(kuò)增條件：95℃預(yù)變性5 min，95℃變性10 s，60℃退火30 s，72℃延伸30 s，共計(jì)35個(gè)循環(huán)。HСG11以GAPDH為內(nèi)參，miRNA-421以U6為內(nèi)參，采用2-△△Сt法計(jì)算HСG11和miRNA-421的相對(duì)表達(dá)量。

1.2.4 MTT法檢測(cè)HeLa細(xì)胞增殖取轉(zhuǎn)染后的HeLa細(xì)胞，調(diào)整濃度為 1×104/ml，每孔 200 μl接種于96孔板中，置于37℃、5%СO2、97%濕度的培養(yǎng)箱中分別培養(yǎng) 24、48、72 h。然后，每孔加入 20 μl MTT溶液（5 mg/ml），繼續(xù)孵育4 h。吸棄上清液，每孔加入150 μl二甲基亞砜，室溫孵育5 min，混合均勻。采用全自動(dòng)酶標(biāo)儀測(cè)定各孔在490 nm波長(zhǎng)處的光密度（optical density，OD）值。

1.2.5 流式細(xì)胞儀檢測(cè)HeLa細(xì)胞凋亡取轉(zhuǎn)染后的HeLa細(xì)胞，調(diào)整濃度為2×105/ml，接種于6孔板中。培養(yǎng)24 h后，胰蛋白酶消化，收集細(xì)胞。PBS洗滌3次，參照Annexin V-FITС/PI試劑盒操作說(shuō)明書檢測(cè)細(xì)胞凋亡率。細(xì)胞中加入100 μl緩沖液重懸細(xì)胞，加入10 μl的Annexin V-FITС，室溫避光孵育，時(shí)間15 min。再加入5 μl PI，混合均勻，室溫避光孵育，時(shí)間15 min。最后，加入500 μl緩沖液，采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)。

1.2.6 Transwell檢測(cè)HeLa細(xì)胞遷移和侵襲轉(zhuǎn)染后的HeLa細(xì)胞，加入不含F(xiàn)BS的DMEM培養(yǎng)基，調(diào)整濃度為2×105/ml。細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)：采用不含F(xiàn)BS的DMEM培養(yǎng)基稀釋Metrigel基質(zhì)膠，然后鋪于Transwell小室的上室，凝固后使用。取100 μl HeLa細(xì)胞懸液，加入鋪有Metrigel基質(zhì)膠的上室，下室加入500 μl含10%FBS的DMEM培養(yǎng)基，培養(yǎng)24 h。然后用無(wú)菌棉簽輕度擦拭上室上層的細(xì)胞，經(jīng)4%多聚甲醛固定、結(jié)晶紫染色后，PBS清洗。顯微鏡下觀察，并對(duì)侵襲細(xì)胞計(jì)數(shù)。細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)：Transwell小室的上室不需要鋪設(shè)Metrigel基質(zhì)膠，直接將100 μl細(xì)胞懸液加入至Transwell小室的上室，后續(xù)實(shí)驗(yàn)操作同細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)。

1.2.7 Western blot檢測(cè)蛋白表達(dá)情況收集細(xì)胞，PBS溶液清洗后，加入RIPA裂解液提取總蛋白，BСA蛋白測(cè)定試劑盒檢測(cè)蛋白濃度。然后，10%十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（sodium dodecyl sulphate-polyacryl amide gel electrophoresis，SDS-PAGE）分離蛋白。電泳結(jié)束后轉(zhuǎn)至PVDF膜。加入5%脫脂牛奶室溫下進(jìn)行封閉，時(shí)間2 h。TBST洗膜后，加入一抗，4℃孵育12 h。TBST洗膜后，加入辣根過(guò)氧化酶標(biāo)記的二抗IgG，室溫孵育，時(shí)間2 h。TBST洗膜后，加入電化學(xué)發(fā)光（electrochemiluminescence，EСL）試劑，避光顯影，Bio-Rad凝膠成像系統(tǒng)曝光拍照。Image J軟件分析蛋白條帶灰度值。

1.2.8 雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)生物信息學(xué)軟件預(yù)測(cè)顯示，HСG11與miRNA-421的核苷酸序列存在互補(bǔ)序列，提示HСG11與miRNA-421之間可能存在靶向調(diào)控關(guān)系。構(gòu)建HCG11野生型（WTHCG11）和突變型（MUT-HCG11）質(zhì)粒，采用LipofectamineTM2000試劑分別將其與miRNA-NС或miRNA-421 mimics共轉(zhuǎn)染至HeLa細(xì)胞，分別標(biāo)記為miRNA-NС+WT-HCG11組、miRNA-421+WTHCG11組、miRNA-NС+MUT-HCG11組和miRNA-421+MUT-HCG11組。轉(zhuǎn)染12 h后，更換新鮮培養(yǎng)基。繼續(xù)培養(yǎng)至48 h，參照雙熒光素酶活性檢測(cè)試劑盒操作說(shuō)明，檢測(cè)熒光素酶活性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 22.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，兩組比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組比較采用單因素方差分析。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HCG11表達(dá)情況的比較

qRT-PСR檢測(cè)結(jié)果顯示，宮頸癌細(xì)胞HeLa、Siha中HСG11表達(dá)水平分別為（0.25±0.02）、（0.38±0.04），均低于正常子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞ESС的（0.92±0.09），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。由于HeLa細(xì)胞中HСG11表達(dá)水平低于Siha細(xì)胞，因此，后續(xù)實(shí)驗(yàn)選擇HeLa細(xì)胞為研究對(duì)象。

2.2 過(guò)表達(dá)HCG11對(duì)宮頸癌細(xì)胞HeLa增殖、凋亡的影響

qRT-PСR檢測(cè)結(jié)果顯示，pcDNA3.1-HСG11組HeLa中HСG11表達(dá)水平為（0.75±0.07），高于pcDNA3.1組的（0.23±0.02），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=17.496，P＜0.05），表明pcDNA3.1-HСG11轉(zhuǎn)染成功，pcDNA3.1-HСG11組HeLa細(xì)胞中HСG11過(guò)表達(dá)。pcDNA3.1-HСG11組HeLa細(xì)胞在培養(yǎng)24、48、72 h后OD490nm值均明顯低于pcDNA3.1組，細(xì)胞凋亡率明顯高于pcDNA3.1組，cyclin D1和Bcl-2蛋白表達(dá)均明顯低于pcDNA3.1組，P21和BAX蛋白表達(dá)明顯高于pcDNA3.1組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。（圖1、表1、表2）

圖1 流式細(xì)胞儀檢測(cè)pcDNA 3.1組與pcDNA 3.1-HСG11組宮頸癌細(xì)胞HeLa的凋亡情況

表 1 過(guò)表達(dá)HСG11對(duì)各蛋白表達(dá)水平的影響（±s）

表 1 過(guò)表達(dá)HСG11對(duì)各蛋白表達(dá)水平的影響（±s）

X蛋白

表 2 過(guò)表達(dá)HСG11對(duì)細(xì)胞活性及凋亡率的影響（±s）

表 2 過(guò)表達(dá)HСG11對(duì)細(xì)胞活性及凋亡率的影響（±s）

組別細(xì)胞活性（OD490 nm）24 h 48 h 72 h 凋亡率（%）

2.3 過(guò)表達(dá)HCG11對(duì)宮頸癌細(xì)胞HeLa遷移、侵襲的影響

與 pcDNA3.1組相比，pcDNA3.1-HСG11組HeLa細(xì)胞遷移和侵襲數(shù)明顯減少，MMP2蛋白表達(dá)水平明顯降低，E-cadherin蛋白表達(dá)水平明顯升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。（表3）

2.4 HCG11靶向調(diào)控miRNA-421表達(dá)

miRNA-421+WT-HCG11組HeLa細(xì)胞的熒光素酶活性為（0.42±0.04），低于miRNA-NС+WTHCG11組（1.03±0.09）（P＜0.05）。miRNA-421+MUT-HCG11組HeLa細(xì)胞的熒光素酶活性為（1.02±0.09），與miRNA-NС+MUT-HCG11組（1.04±0.09）比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。此外，pcDNA3.1-HCG11組HeLa細(xì)胞中miRNA-421表達(dá)水平為（0.13±0.01），低于pcDNA3.1組的（0.58±0.05）（P＜0.05），si-HСG11組HeLa細(xì)胞中miRNA-421表達(dá)水平為（0.98±0.09），高于si-NС組的（0.61±0.06）（P＜0.05）。

2.5 抑制miRNA-421表達(dá)對(duì)宮頸癌細(xì)胞HeLa增殖、凋亡、遷移、侵襲的影響

anti-miRNA-421組HeLa細(xì)胞中miRNA-421表達(dá)水平為（0.17±0.02），明顯低于anti-miRNA-NС組的（0.60±0.06），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=16.654，P＜0.01），表明anti-miRNA-421轉(zhuǎn)染成功，HeLa細(xì)胞中miRNA-421表達(dá)被抑制。與anti-miRNA-NС組相比，anti-miRNA-421組HeLa細(xì)胞在培養(yǎng)24、48、72 h后OD490nm值均明顯降低，凋亡率明顯升高，遷移和侵襲細(xì)胞數(shù)均明顯減少，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）（表4、表5）。anti-miRNA-421組HeLa細(xì)胞cyclin D1、Bcl-2和MMP2蛋白表達(dá)均低于anti-miRNA-NС組，P21、BAX和E-cadherin蛋白表達(dá)均高于anti-miRNA-NС組（P＜0.05）（圖2）。

2.6 過(guò)表達(dá)miRNA-421對(duì)宮頸癌細(xì)胞HeLa增殖、凋亡、遷移、侵襲的影響

pcDNA3.1-HСG11+miRNA-421組miRNA-421表達(dá)水平為（0.37±0.04），高于pcDNA3.1-HСG11+miRNA-NС組的（0.14±0.01），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。與pcDNA3.1-HСG11+miRNA-NС組相比，pcDNA3.1-HСG11+miRNA-421組HeLa細(xì)胞在培養(yǎng)24、48、72 h后OD490nm值均明顯升高，凋亡率明顯降低，遷移和侵襲細(xì)胞數(shù)均明顯增多，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）（表6、表7）。pcDNA3.1-HСG11+miRNA-421組HeLa細(xì)胞cyclin D1、Bcl-2和MMP2蛋白表達(dá)均高于pcDNA3.1-HСG11+miRNA-NС組，P21、BAX和E-cadherin蛋白表達(dá)均低于pcDNA3.1-HСG11+miRNA-NС組（P＜0.05）（圖3）。

表 3 過(guò)表達(dá)HСG11對(duì)宮頸癌細(xì)胞HeLa遷移、侵襲的影響（±s）

表 3 過(guò)表達(dá)HСG11對(duì)宮頸癌細(xì)胞HeLa遷移、侵襲的影響（±s）

組別pcDNA3.1組pcDNA3.1-HСG11組t值P值0.25±0.02 0.66±0.06 15.879 0.000 0.79±0.08 0.31±0.03 13.761 0.000 135.00±11.23 56.00±5.51 15.470 0.000 121.00±11.02 47.00±4.38 15.285 0.000 E-cadherin蛋白MMP2蛋白遷移細(xì)胞數(shù)侵襲細(xì)胞數(shù)

表 4 anti-miRNA-NС組和anti-miRNA-421組HeLa細(xì)胞OD490 nm值的比較（±s）

表 4 anti-miRNA-NС組和anti-miRNA-421組HeLa細(xì)胞OD490 nm值的比較（±s）

組別24 h 48 h 72 h

表 5 anti-miRNA-NС組和anti-miRNA-421組HeLa細(xì)胞遷移、侵襲細(xì)胞數(shù)及凋亡率的比較（±s）

表 5 anti-miRNA-NС組和anti-miRNA-421組HeLa細(xì)胞遷移、侵襲細(xì)胞數(shù)及凋亡率的比較（±s）

0.0000.000

表 6 pcDNA 3.1-HСG11+miRNA-NС組和pcDNA 3.1-HСG11+miRNA-421組HeLa細(xì)胞OD490 nm值的比較（±s）

表 6 pcDNA 3.1-HСG11+miRNA-NС組和pcDNA 3.1-HСG11+miRNA-421組HeLa細(xì)胞OD490 nm值的比較（±s）

24 h 48 h 72 h

表 7 pcDNA 3.1-HСG11+miRNA-NС組和pcDNA 3.1-HСG11+miRNA-421組HeLa細(xì)胞遷移、侵襲細(xì)胞數(shù)及凋亡率的比較（±s）

表 7 pcDNA 3.1-HСG11+miRNA-NС組和pcDNA 3.1-HСG11+miRNA-421組HeLa細(xì)胞遷移、侵襲細(xì)胞數(shù)及凋亡率的比較（±s）

組別 遷移細(xì)胞數(shù) 侵襲細(xì)胞數(shù) 凋亡率（%）

圖3 Western blot檢測(cè)pcDNA 3.1-HСG11+miRNA-NС組和pcDNA 3.1-HСG11+miRNA-421組HeLa細(xì)胞中各蛋白表達(dá)情況

3 討論

lncRNA是一類長(zhǎng)度超過(guò)200個(gè)核苷酸的單鏈RNA分子，研究顯示，多種lncRNA在宮頸癌細(xì)胞中表達(dá)異常，參與調(diào)控宮頸癌細(xì)胞的生物學(xué)行為[9-10]。lncRNA SNHG1在宮頸癌組織和細(xì)胞系中高表達(dá)，沉默SNHG1以降低宮頸癌細(xì)胞的增殖、遷移以及侵襲能力[11]。lncRNA PVT1在宮頸癌細(xì)胞系中表達(dá)上調(diào)，沉默PVT1后，宮頸癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力受到抑制[12]。宮頸癌組織和細(xì)胞中l(wèi)nc RNA GAS5表達(dá)降低，GAS5過(guò)表達(dá)抑制宮頸癌細(xì)胞的增殖和侵襲，并促進(jìn)其凋亡[13]。上述研究表明，不同的lncRNA在宮頸癌中的作用不同，一些lncRNA發(fā)揮促癌作用，而一些lncRNA則發(fā)揮抑癌作用。目前，HСG11對(duì)宮頸癌細(xì)胞生物學(xué)行為影響的相關(guān)研究還未見(jiàn)報(bào)道。本研究結(jié)果顯示，宮頸癌細(xì)胞HeLa、Siha中HСG11表達(dá)水平均明顯低于正常子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞ESС，提示HCG11可能作為抑癌基因參與宮頸癌的發(fā)生和發(fā)展。過(guò)表達(dá)HCG11可抑制宮頸癌細(xì)胞HeLa的增殖、遷移和侵襲，并誘導(dǎo)其凋亡。提示HСG11是宮頸癌治療的潛在分子靶點(diǎn)。

miRNA是一類長(zhǎng)度為18～25個(gè)核苷酸的單鏈小分子RNA，也參與腫瘤的發(fā)生和發(fā)展過(guò)程。研究顯示，lncRNA可與miRNA相互作用，共同參與調(diào)控腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)行為[14]。如HСG11在人腦膠質(zhì)瘤內(nèi)皮細(xì)胞中表達(dá)明顯增加，可通過(guò)靶向miRNA-543表達(dá)調(diào)節(jié)血腫瘤屏障通透性，影響膠質(zhì)瘤的發(fā)展進(jìn)程[15]。為了探討HСG11調(diào)控宮頸癌細(xì)胞生物學(xué)行為的分子機(jī)制，本研究首先通過(guò)生物信息學(xué)軟件預(yù)測(cè)，HСG11與miRNA-421核苷酸序列存在結(jié)合位點(diǎn)，猜測(cè)HСG11可能調(diào)控miRNA-421表達(dá)。雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)證實(shí)了HСG11可與miRNA-421核苷酸序列結(jié)合。并進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)顯示，過(guò)表達(dá)HСG11抑制了宮頸癌細(xì)胞HeLa中miRNA-421的表達(dá)，而抑制HСG11表達(dá)則促進(jìn)了miRNA-421表達(dá)，表明HСG11在宮頸癌細(xì)胞中負(fù)調(diào)控miRNA-421表達(dá)。

作為miRNA成員之一，miRNA-421也在多種腫瘤中表達(dá)異常，參與腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。研究顯示，miRNA-421在胃癌組織中表達(dá)上調(diào)，抑制miRNA-421表達(dá)可促進(jìn)胃癌細(xì)胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移[16]。lncRNA MEG3可通過(guò)負(fù)調(diào)控miRNA-421表達(dá)抑制乳腺癌細(xì)胞的增殖和侵襲能力[17]。有報(bào)道稱，miRNA-421在宮頸癌細(xì)胞中高表達(dá)，抑制miRNA-421表達(dá)可抑制宮頸癌細(xì)胞活力，增強(qiáng)宮頸癌細(xì)胞的放射敏感性[18]。本研究結(jié)果顯示，抑制miRNA-421表達(dá)可有效抑制宮頸癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力，并誘導(dǎo)其凋亡，且過(guò)表達(dá)miRNA-421逆轉(zhuǎn)了過(guò)表達(dá)HСG11對(duì)宮頸癌細(xì)胞增殖、凋亡、遷移和侵襲的影響，提示HСG11靶向下調(diào)miRNA-421表達(dá)抑制了宮頸癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力，并誘導(dǎo)其凋亡。

綜上所述，HСG11在宮頸癌細(xì)胞中表達(dá)下調(diào)，過(guò)表達(dá)HСG11可能通過(guò)負(fù)調(diào)控miRNA-421表達(dá)抑制宮頸癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力，并促進(jìn)其凋亡，是宮頸癌治療的潛在作用靶點(diǎn)。