高思雨 白彩虹 王曉波 張 旭,

（1 遼寧中醫(yī)藥大學(xué)，遼寧 沈陽(yáng) 110847；2 中國(guó)人民解放軍聯(lián)勤保障部隊(duì)第九六七醫(yī)院，遼寧 大連 116600）

青黛為爵床科植物馬藍(lán)Baphicacanthus eusia Bremek、蓼科植物蓼藍(lán)Polygonum tinctofiumAit或十字花科植物菘藍(lán)Isatis indigotica Fort的葉或莖葉經(jīng)加工制得的干燥粉末、團(tuán)塊或顆粒[1]。其主要活性成分為靛藍(lán)、靛玉紅。有清熱解毒、涼血定驚的作用，用于瘟病發(fā)斑、胸痛咳血、口瘡、喉痹、小兒驚癇。研究表明，青黛有一定的免疫調(diào)節(jié)作用[2-3]，抗病原微生物及抗腫瘤[4-6]作用，其主要成分靛玉紅對(duì)慢性粒細(xì)胞白血病有良好的效果[7]，是中藥復(fù)方黃黛片組方的主要原料[8]。市售青黛有摻偽、摻雜、染色、增重等問(wèn)題使得青黛質(zhì)量差異很大。本課題對(duì)六批青黛灰分含量、水溶性浸出物、醇溶性浸出物等含量進(jìn)行測(cè)定，并驗(yàn)證現(xiàn)行的青黛質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)是否穩(wěn)定可行，為建立完善的青黛質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供參考依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器：島津LC-10AT高效液相色譜儀，日本島津公司；色譜柱為JK5-3408C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；KQ-500DE 超聲波清洗器（昆山超聲儀器有限公司）。

1.2 試藥和試劑：青黛（分別購(gòu)于大連六家藥店，編號(hào)分別為1～6號(hào)）；靛藍(lán)對(duì)照品（購(gòu)于國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心，批號(hào)：123251）；靛玉紅對(duì)照品（購(gòu)于國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心，批號(hào)：88131）；甲醇（Sigma-Aldrich公司，色譜純）；其他試劑均為分析純。

1.3 性狀：1、2、3、4、6號(hào)樣品呈藍(lán)色粉末，用手搓即成細(xì)粉，體輕，易飛揚(yáng)，微有草腥氣，味淡，不溶于水，于無(wú)水乙醇呈深藍(lán)色。5號(hào)樣品呈藍(lán)綠色粉末，體輕，易飛揚(yáng)，有怪味，不溶于水，于無(wú)水乙醇呈綠色。

1.4 鑒別

1.4.1 顯微鑒別：分別取少量1～6號(hào)的青黛粉末置載玻片上，用稀甘油封片，于顯微鏡下觀察粉末的顯微結(jié)構(gòu)，分別用10倍物鏡和40倍物鏡對(duì)青黛粉末進(jìn)行觀察，結(jié)果見圖1。根據(jù)顯微鑒別得出5號(hào)青黛粉末為偽品，5號(hào)中含有大量的淀粉粒幾乎沒有靛藍(lán)結(jié)晶。其他幾種青黛樣品中均含有大量的靛藍(lán)結(jié)晶及部分植物的纖維、導(dǎo)管等碎片。

1.4.2 水溶性色素鑒別：分別稱取1～6號(hào)青黛粉末各0.5 g，放入燒杯中，加10 mL水，震蕩后放置片刻，觀察水層顏色，水層不得顯深藍(lán)色。除5號(hào)樣品水層顯淡藍(lán)色，其余五種樣品水層均不顯色。水溶性色素鑒別結(jié)果顯示，六種樣品水溶性色素均符合標(biāo)準(zhǔn)。

2 含量測(cè)定及結(jié)果

2.1 水分檢查：采用藥典中水分測(cè)定法中的第一法烘干法測(cè)定青黛粉末中的水分，根據(jù)減失重量計(jì)算青黛粉末中水分的含量，結(jié)果見表1。

2.2 灰分檢查：利用藥典附錄IXK灰分測(cè)定法測(cè)定青黛粉末的灰分，根據(jù)熾灼所得的青黛殘?jiān)闹亓浚瑏?lái)計(jì)算青黛樣品中灰分的含量，將酸不溶性灰分含量小于10%的樣品歸類為正品，結(jié)果見表1。

2.3 水溶性浸出物和醇溶性浸出物含量測(cè)定：利用藥典附錄XA浸出物測(cè)定法測(cè)定青黛粉末的水溶性浸出物和醇溶性浸出物含量。以干燥品計(jì)算供試品水溶性浸出物和醇溶性浸出物的含量，結(jié)果見表1。

2.4 靛藍(lán)含量測(cè)定

2.4.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水（70∶30）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)606 nm。理論板數(shù)按靛玉紅峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。

1號(hào)青黛

2號(hào)青黛

3號(hào)青黛

4號(hào)青黛

6號(hào)青黛

表1 6批青黛含量測(cè)定結(jié)果（%）

2.4.2 供試品制備：分別取1～6號(hào)青黛粉末5mg，精密稱定，放置于25 mL容量瓶中，加入2%的水合氯醛的三氯甲烷溶液約22 mL，超聲處理30 min后，放冷，加2%的水合氯醛的三氯甲烷溶液定容，搖勻，過(guò)微孔濾膜，即得。

2.4.3 標(biāo)準(zhǔn)品制備：取靛藍(lán)對(duì)照品2.5 mg，精密稱定重量，放置于250 mL的容量瓶中，加入2%的水合氯醛的三氯甲烷溶液約220 mL，超聲處理1.5 h，放冷后，加入2%的水合氯醛的三氯甲烷溶液至刻度，搖勻，過(guò)微孔濾膜，即得靛藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)品，每1 mL中含有靛藍(lán)10 μg。

2.4.4 靛藍(lán)含量測(cè)定 分別取上述供試品溶液與靛藍(lán)對(duì)照品各10 μL注入液相色譜儀中，測(cè)定，即得結(jié)果。據(jù)藥典規(guī)定，本品按青黛干燥品計(jì)算，含靛藍(lán)量不得少于2%。結(jié)果見表1。

2.5 靛玉紅含量測(cè)定

2.5.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水（70∶30）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)292 nm。理論板數(shù)按靛玉紅峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。

2.5.2 供試品制備：分別稱取1～6號(hào)青黛粉末50mg，精密稱定，放置于25 mL容量瓶中，加入N，N-二甲基甲酰胺溶液約20 mL，超聲處理30 min，放冷后，繼續(xù)加入N，N-二甲基甲酰胺溶液定容至刻度，搖勻，過(guò)微孔濾膜，即得。

2.5.3 標(biāo)準(zhǔn)品制備 稱取靛玉紅對(duì)照品2.5 mg，精密稱定，放置于50 mL容量瓶中，加入N，N-二甲基甲酰胺約45 mL，超聲處理使其溶解，放冷后，加入N，N-二甲基甲酰胺至刻度，搖勻后，精密量取配置溶液10 mL，放置于100 mL容量瓶中，加人N，N-二甲基甲酰胺至刻度，搖勻，過(guò)微孔濾膜，即得靛玉紅標(biāo)準(zhǔn)品，每1 mL中含有靛玉紅5 μg。

2.5.4 靛玉紅含量：測(cè)定分別取上述供試品溶液及靛玉紅對(duì)照品各10 μL注入液相色譜儀中，按上述設(shè)定條件測(cè)定，即得結(jié)果。據(jù)藥典規(guī)定，本品按青黛干燥品計(jì)算，含有靛玉紅含量不得少于0.13%。結(jié)果見表1。

3 討 論

對(duì)市場(chǎng)上所購(gòu)買的六批青黛性狀、顯微鑒別，灰分，水分及水溶性色素檢查，水溶性浸出物、醇溶性浸出物、靛藍(lán)及靛玉紅含量等進(jìn)行測(cè)定。根據(jù)2015版藥典中記載，青黛中靛藍(lán)的含量應(yīng)不低于2%，靛玉紅的含量應(yīng)不低于0.13%，水分含量不得過(guò)7%。5號(hào)樣品靛藍(lán)含量0.89%，靛玉紅含量0.03%，均小于藥典規(guī)定，含量測(cè)定為偽品。經(jīng)檢查，除5號(hào)樣品外，其余均為真品。顯微鑒別觀察到1、2、3號(hào)樣品中含大量靛藍(lán)結(jié)晶，同時(shí)植物的組織殘留較多，在顯微鏡下呈現(xiàn)為黃色團(tuán)狀，鑒定其為真品但無(wú)法由此判斷其質(zhì)量?jī)?yōu)劣。5號(hào)樣品含有大量淀粉粒，幾乎沒有靛藍(lán)結(jié)晶。經(jīng)HPLC測(cè)定，5號(hào)樣品靛藍(lán)及靛玉紅含量均不合格，確定其為偽品，其他五種樣品均為真品；實(shí)驗(yàn)后所得的灰分應(yīng)該為白色細(xì)粉，其中5號(hào)青黛實(shí)驗(yàn)后所得的灰分為黃褐色，其余五種青黛所得的灰分為灰白色。五種酸不溶性灰分平均值為8.28%，灰分含量測(cè)定的平均值為50.91%；五種樣品水分含量平均值為5.9%；五種樣品水溶性浸出物含量的平均值為4.34%；5號(hào)青黛的醇溶性浸出物為翠綠色，其余五種青黛的醇溶性浸出物均種棕黑色，醇溶性浸出物含量的平均值為1.97%；靛藍(lán)含量平均值為2.16%，靛玉紅含量平均值為0.17%。

青黛的加工需要經(jīng)過(guò)浸泡、打靛和粗靛精制三個(gè)步驟[9]，后兩個(gè)步驟在操作時(shí)需加入石灰水和生石灰，加入石灰的量和淘花的工藝是影響成品質(zhì)量的關(guān)鍵，也是正品青黛灰分值高的原因所在。馬雙成等將2017年青黛灰分（總灰分和酸不溶性灰分）測(cè)定數(shù)據(jù)與40年前27批青黛灰分測(cè)定數(shù)據(jù)（1977年藥典修訂草案）對(duì)比，發(fā)現(xiàn)從1977年到2017年，青黛總灰分?jǐn)?shù)據(jù)從50.6%到74.7%有明顯增加，而酸不溶性灰分?jǐn)?shù)據(jù)從18.8%到9.3%有明顯降低，表明青黛含石灰量在增加，而加工所用石灰純度更高。2017年，張萍等[10]發(fā)現(xiàn)在抽查青黛樣品中，摻入的石灰含量達(dá)70%～80%，摻雜和增重情況極其嚴(yán)重，而染色情況較以前有所好轉(zhuǎn)，樣品均未檢出孔雀石綠。傳統(tǒng)工藝生產(chǎn)的青黛因含石灰等雜質(zhì)，對(duì)其臨床應(yīng)用產(chǎn)生較大的影響，現(xiàn)代研究也證實(shí)了石灰含量過(guò)高，可能降低青黛的清熱作用及產(chǎn)生對(duì)消化道的刺激作用。由于生產(chǎn)加工廠家多、原料來(lái)源不一、加工方法和炮制工藝差別較大，且有摻偽、摻雜、染色、增重等問(wèn)題，嚴(yán)重影響了藥材質(zhì)量和臨床療效，成為提高青黛質(zhì)量水平的首要問(wèn)題之一。

本實(shí)驗(yàn)僅抽取六批青黛進(jìn)行檢驗(yàn)，合格率不足以代表青黛的整體質(zhì)量水平。市面上的青黛質(zhì)量差異很大，有很多摻偽摻假品出售。相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道青黛的不合格率也相對(duì)較高。建議明確規(guī)定生產(chǎn)中加入石灰的量，優(yōu)化淘花、浮選工藝，減少非藥用成分殘留量，進(jìn)一步完善生產(chǎn)工藝，加強(qiáng)對(duì)青黛生產(chǎn)的監(jiān)管，以完善質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。