/ 上海新金橋檢測技術(shù)服務有限公司
根據(jù)2014年環(huán)境保護部和國土資源部發(fā)布的《全國土壤污染狀況調(diào)查公報》顯示,八種重金屬中點位超標率最高的和次高的分別是鎘和鎳,分別為7.0%和4.8%[1],鎳含量排在第二位,已經(jīng)成為不可忽視的污染土壤的重金屬元素。植物修復技術(shù)是以植物忍耐和超積累某種或某些污染物的理論為基礎,利用自然生長或遺傳工程培育的植物,清除環(huán)境中污染物的環(huán)境污染治理技術(shù)[2]。鐵是植物有氧呼吸酶的重要的組成物質(zhì),因此,鐵參與植物的呼吸作用,是植物能量代謝的重要物質(zhì)。缺鐵會影響植物的生理活性,也影響?zhàn)B分的吸收[3]。保證植物的鐵元素營養(yǎng),有利于增強一些植物的抗病能力。紫花苜蓿不僅具有生長快、產(chǎn)草量高、利用年限長、再生性強、適口性強、營養(yǎng)豐富的特點,而且根系發(fā)達,根部生長的根瘤菌具有很強的固氮能力[4-5],能夠改善土壤物理性狀和養(yǎng)分狀況[6]。研究表明通過調(diào)控鐵營養(yǎng)水平,可以影響植物對其他金屬的吸收。本研究的目的是研究鐵營養(yǎng)水平對植物鎳吸收能力的影響,為農(nóng)藝調(diào)控措施提供一定的理論支持。
將植株缺鐵培養(yǎng)一段時間后,再轉(zhuǎn)移到含一定濃度硫酸鎳的營養(yǎng)液中處理,分根和地上部分收獲,以正常生長植株為對照。測定樣品中鎳含量,計算轉(zhuǎn)運系數(shù)和植物富集系數(shù)。
將植株移入一定濃度的硫酸鎳營養(yǎng)液中,進行不同濃度鐵處理。培養(yǎng)10 d后分根和地上部分收獲并測定樣品中的鎳含量。
將在完全培養(yǎng)液中生長的植株移入缺鐵培養(yǎng)液中培養(yǎng)不同的天數(shù)后,移入一定濃度的NiSO4缺鐵營養(yǎng)液再處理后,分根和地上部分收獲并測定樣品中的鎳含量。
試 劑:硝酸 鎳 Ni(NO3)2、硝酸鈣 Ca(NO3)2、氫氧化鈉NaOH(濃度1 mol/L)、鹽酸、磷酸二氫鈉NaH2PO4、硫酸鎂MgSO4、硫酸鉀K2SO4、硝酸鉀 KNO3、硫酸銨(NH4)2SO4、氯化鈣 CaCl2、硼酸H3BO3、硫酸錳MnSO4、硫酸鋅ZnSO4、硫酸銅CuSO4、鉬酸鈉Na2MO4、Fe-EDTA、硝酸HNO3、雙氧水H2O2(濃度30%),以上試劑均為優(yōu)級純,國藥集團化學試劑有限公司;紫花苜蓿,巨人201+Z,北京金種子公司。
主要設備:恒溫培養(yǎng)箱(RXZ-300A)、電子天平(FA2004N)、電熱鼓風干燥箱(DHG-9145A)、pH-902筆式防水型pH計、微波消解儀(SG-70卡入市單體消解罐)、小型控溫加熱板、火焰原子吸收分光光度計(GGX—600)、Ni空心陰極燈(北京有色金屬研究總院)。
根據(jù)表1中試劑的濃度,用純水將稱量好的試劑完全溶解后,配置成A液~H液八種不同濃度的營養(yǎng)液[7]。
表 1 營養(yǎng)液配方 單位:μmol·L-1
育苗:將種子播種在盛有蛭石的育苗盤中,用清水浸濕。放置在溫暖、光照充足的地方,3~4 d等到萌芽之后,添加1/2濃度的完全營養(yǎng)液(華南農(nóng)大葉菜配方),植株的培養(yǎng)在智能人工氣候箱中進行(每天保持在 28 ℃,光照 16 h 和 20 ℃,黑暗 8 h)。待苗長至4~7片真葉期時移栽至水培杯中,用完全營養(yǎng)液并且從人工氣候箱中移栽到花房中培養(yǎng),移栽最初3 d在弱光照下緩苗。培養(yǎng)一定時間(視幼苗長勢而定)后,按照不同的條件換營養(yǎng)液培養(yǎng)所需要的時間。
育苗后在每個水培杯中移栽兩株苗,一共需要移栽到8個水培杯即16株苗,需要在A營養(yǎng)液中培養(yǎng)5 d后,最后將株苗分為兩部分處理,其中一部分(4個水培杯中8株苗)用B營養(yǎng)液(即缺鐵條件下)加入濃度為0.85 μmol/L的鎳處理48 h,另一部分(剩余4個水培杯中8株苗)用C營養(yǎng)液(即缺鐵條件下)加入濃度為8.5 μmol/L的鎳處理48 h,之后將所有的苗進行預處理后測量鎳含量。
育苗在每個水培杯中移栽2株苗,分成五組,每組4個水培杯8株苗,第一組用C營養(yǎng)液即不加鐵、5 mg/L鎳離子濃度處理10 d;第二組用D營養(yǎng)液即加5 μmol/L的Fe-EDTA、5 mg/L鎳離子濃度處理10 d ;第三組 用 E 營 養(yǎng)液即 加 20 μmol/L 的 Fe-EDTA、5 mg/L鎳離子濃度處理10 d;第四組用F營養(yǎng)液即加 50 μmol/L 的 Fe-EDTA、5 mg/L 鎳離子濃度處理10 d;第五組用G營養(yǎng)液即加5 μmol/L的Fe-EDTA、100 mg/L鎳離子濃度處理10 d,之后將所有的苗進行預處理后測量鎳含量。
育苗在每個水培杯中移栽兩株苗,分成六組,每組4個水培杯8株苗,第一組用C營養(yǎng)液即不加鐵、5 mg/L鎳離子濃度處理0 d;第二組用C營養(yǎng)液即不加鐵、5 mg/L鎳離子濃度處理2 d;第三組用C營養(yǎng)液即不加鐵、5 mg/L鎳離子濃度處理4 d;第四組用C營養(yǎng)液即不加鐵、5 mg/L鎳離子濃度處理6 d;第五組用C營養(yǎng)液即不加鐵、5 mg/L鎳離子濃度處理8 d;第六組用C營養(yǎng)液即不加鐵、5 mg/L鎳離子濃度處理10 d,將處理不同天數(shù)的的紫花苜蓿進行預處理后測量鎳含量。
1)植物富集總數(shù)是描述重金屬在植物體內(nèi)富集積累量的一個重要指標。
植物富集總量=植物的干重×植物組織中重金屬濃度
2)植物富集系數(shù)為植物體內(nèi)某種重金屬含量與相應環(huán)境中重金屬含量的比值。也可以認為是植物對重金屬的吸收速率與植物體內(nèi)重金屬的凈化速率之比,植物富集系數(shù)是描述重金屬在植物體內(nèi)累積趨勢之重要指標。
植物富集系數(shù)=植物組織中重金屬濃度/溶液或土壤中重金屬濃度
3)轉(zhuǎn)運系數(shù)是指植物地上部分某種重金屬含量與根部該種重金屬含量的比值。轉(zhuǎn)運系數(shù)用來評價植物將重金屬從地下部向地上部的運輸和富集能力。轉(zhuǎn)運系數(shù)大的植物從根系向地上部器官轉(zhuǎn)移的吸收量大。
轉(zhuǎn)運系數(shù)=地上部重金屬濃度/根中重金屬濃度
吸取鎳的標準使用液(0.00、0.50、1.25、2.50、4.25、5.00)mL分別于6個25 mL的比色管中,用去離子中定容并搖勻。此標準系列分別含(0.00、0.20、0.50、1.00、1.50、2.00)μg/mL。測其吸光度(見表 2),并繪制標準曲線,如圖1所示。
表2 測定鎳元素標準曲線的參數(shù)
圖1 鎳的標準曲線
鎳的相關(guān)線性方程為y= 0.190 7x+ 0.090 4,相關(guān)系數(shù)為R2= 0.999 1
缺鐵誘導對紫花苜蓿吸收鎳的影響見表3、表4。
表3 缺鐵誘導對紫花苜蓿吸收鎳的影響(a)
表4 缺鐵誘導對紫花苜蓿吸收鎳的影響(b)
將紫花苜蓿在缺鐵的條件下培養(yǎng)5 d之后,將植株移到含有 0.85 μmol/L、8.5 μmol/L 硫酸鎳營養(yǎng)液中處理48 h,分地上部分和地下部分收獲。以正常生長的紫花苜蓿植株為對照,實驗結(jié)果表明,硫酸鎳濃度在 0.85 μmol/L 和 8.5 μmol/L 時,缺鐵誘導紫花苜蓿地下部分鎳含量是對照組的3.5倍和3.8倍,這說明與正常植株相比,缺鐵培養(yǎng)都能夠顯著提高植株的鎳富集量。從數(shù)據(jù)中可以看出當硫酸鎳濃度在8.5 μmol/L時,鎳的促進富集效果更明顯。在低濃度或高濃度的硫酸鎳處理時,缺鐵誘導對于促進紫花苜蓿根系吸收鎳的吸附量更大(見表4)。在8.5 μmol/L硫酸鎳營養(yǎng)液處理下的紫花苜蓿根系比0.85 μmol/L硫酸鎳營養(yǎng)液處理下的紫花苜蓿根系對于鎳的吸收富集效果更好。在低濃度和高濃度兩個濃度處理時,缺鐵誘導下紫花苜蓿地上部分吸收鎳的含量也增加了,結(jié)果表明缺鐵誘導下能夠使鎳從紫花苜蓿的根部向地上部分的轉(zhuǎn)運效果增加。但是地上部分對于鎳含量的提高的效果遠遠小于根系部分對于鎳含量提高的效果,表明在缺鐵培養(yǎng)的條件下紫花苜蓿根系對于鎳的吸收效果遠大于紫花苜蓿地上部分對于鎳的吸收效果。
比較8.5 μmol/L硫酸鎳營養(yǎng)液處理下的紫花苜蓿和0.85 μmol/L硫酸鎳營養(yǎng)液處理下的紫花苜蓿,無論地上部分還是地下部分,8.5 μmol/L硫酸鎳營養(yǎng)液處理下的紫花苜蓿吸收鎳含量更高。
綜上所述,用8.5 μmol/L硫酸鎳處理的紫花苜蓿比用0.85 μmol/L硫酸鎳處理的紫花苜蓿對于鎳的富集吸收效果更好一些。因此,本實驗后續(xù)選用8.5 μmol/L濃度的硫酸鎳作為鎳源提供。
不同鐵營養(yǎng)水平對紫花苜蓿鎳含量的影響見表5、圖2、圖3。
表5 不同鐵營養(yǎng)水平對紫花苜蓿鎳含量的影響
圖2 不同鐵濃度對紫花苜蓿地下部分鎳積累的影響
圖3 不同鐵濃度對紫花苜蓿地上部分鎳積累的影響
將紫花苜蓿植株移入 5 μmol/L NiSO4的營養(yǎng)液中,在不同濃度的鐵處理條件下,鐵以Fe(Ⅲ)-EDTA(乙二胺四乙酸)的形式供應,處理的濃度梯度 設 為 0 μmol/L、5 μmol/L、20 μmol/L、50 μmol/L、100 μmol/L,培養(yǎng)10 d之后,分地上部分和地下部分收獲。實驗數(shù)據(jù)表明,5 μmol/L的硫酸鎳營養(yǎng)液中紫花苜蓿根系和地上部分的鎳含量會隨營養(yǎng)液中的Fe(Ⅲ)-EDTA的濃度的增加先上升之后明顯下降。當紫花苜蓿中的鐵含量從0 μmol/L上升到20 μmol/L 時,紫花苜蓿的鎳濃度從 204 mg/kg緩慢上升到230 mg/kg,增加了0.13倍,對于地下部分鎳濃度的增長量很少。當營養(yǎng)液中的Fe(Ⅲ)-EDTA的濃度從 20 μmol/L 上升到 100 μmol/L,反而使紫花苜蓿根部鎳含量的積累量急劇地下降,從230 mg/kg降到26 mg/kg。紫花苜蓿地上部分中鎳的含量也隨著鐵濃度的增加反而下降,鐵的處理在5 μmol/L的時候出現(xiàn)了轉(zhuǎn)折。當營養(yǎng)液中的Fe(Ⅲ)-EDTA的濃度從0 μmol/L上升到5 μmol/L時,紫花苜蓿地上部分鎳含量從76 mg/kg上升到117 mg/kg,紫花苜蓿的鎳含量上升幅度為0.54倍。當營養(yǎng)液中的Fe(Ⅲ)-EDTA 的濃度從 5 μmol/L 上升到 100 μmol/L 時,紫花苜蓿地上部分鎳含量從117 mg/kg降到17 mg/kg。圖3上呈現(xiàn)出的是逐漸下降的一個趨勢,但是葉片基本都沒有出現(xiàn)明顯的黃化現(xiàn)象,這可以說明低鐵可以提高紫花苜蓿根系和地上部分對鎳的吸收富集能力。
對紫花苜蓿地下部分,剛開始鎳含量增長量很小,基本屬于緩慢生長,雖然圖2中表示上升的趨勢,但是在數(shù)據(jù)中看出基本變化不大。當?shù)?0 μmol/L的Fe-EDTA營養(yǎng)液處理后開始出現(xiàn)了直線下降的狀態(tài),對于地上部分在5 μmol/L的Fe-EDTA營養(yǎng)液處理就開始出現(xiàn)了下降的趨勢,但在5 μmol/L到20 μmol/L之間變化不是很明顯,20 μmol/L的Fe-EDTA營養(yǎng)液處理后也開始出現(xiàn)了直線下降的趨勢。這說明無論地上部分還是地下部分,在20 μmol/L的Fe-EDTA營養(yǎng)液處理之前都有一定的促進作用,之后的促進效果開始減退。進而可以看出,在5 μmol/L的Fe-EDTA營養(yǎng)液處理為分界,用5 μmol/L的Fe-EDTA處理下紫花苜蓿的轉(zhuǎn)運系數(shù)最高,達到0.56。這可以看出在這個濃度下的紫花苜蓿從地下轉(zhuǎn)移到地上的效果最好,濃度越高對于紫花苜蓿將鎳從地下部分轉(zhuǎn)運到地上部分的轉(zhuǎn)運能力越差,這可能是由于高濃度的鐵營養(yǎng)水平對植物根系或者轉(zhuǎn)運酶等能夠影響到植物的生理生化的過程導致的,使其不能夠正常完成鎳的向上轉(zhuǎn)運。在不同鐵濃度的營養(yǎng)液處理下,沒有發(fā)現(xiàn)紫花苜蓿的植株出現(xiàn)很明顯的黃化現(xiàn)象。從紫花苜蓿的長勢來看,植株在5 μmol/L的Fe-EDTA營養(yǎng)液和20 μmol/L的Fe-EDTA營養(yǎng)液處理下的長勢是最好的,無論從植株的地下根部的長度,還是地上植株的莖長和植株葉片的顏色等,都比缺鐵和高濃度鐵條件下處理的植株生長得好。雖然在100 μmol/L的Fe-EDTA處理下紫花苜蓿的轉(zhuǎn)運系數(shù)達到0.49,但是由于其植物富集總量太小,所以導致其轉(zhuǎn)運系數(shù)的增大。
根據(jù)植物富集總量來看,當用20 μmol/L的Fe-EDTA處理時,紫花苜蓿地上和地下部分的植物富集總量分別為 15.8 μg和 12.6 μg,在所有梯度鐵濃度中植物富集總量是最大的。其次,用5 μmol/L的Fe-EDTA處理時,紫花苜蓿地上和地下部分的植物富集總量達到 14.2 μg和 9.3 μg,其余梯度鐵濃度中植物富集總量相對較小,說明在20 μmol/L和5 μmol/L的Fe-EDTA處理時,紫花苜蓿有更好的植物富集效果。根據(jù)植物富集系數(shù)來看,0 μmol/L的Fe-EDTA處理時,紫花苜蓿地上和地下部分的植物富集系數(shù)分別為9.0和27.1,5 μmol/L的Fe-EDTA處理時,紫花苜蓿地上和地下部分的植物富集系數(shù)分別為13.2和23.7, 用 0 mol/L 和 5 μmol/L 的 Fe-EDTA 處 理時,紫花苜蓿的植物富集系數(shù)更高,當鐵濃度提高時植物富集系數(shù)開始降低。
綜上,通過鎳含量的吸收、植物富集總量、植物富集系數(shù)、植物轉(zhuǎn)運系數(shù)四個指標綜合比較,5 μmol/L的Fe-EDTA處理紫花苜蓿處于較理想的狀態(tài)。實踐中用5 μmol/L的Fe-EDTA營養(yǎng)液處理是比較符合實際,能夠達到預期的理想效果的。
缺鐵時間對紫花苜蓿吸收鎳的影響見表6、圖4、圖5。
表6 缺鐵時間對紫花苜蓿吸收鎳的影響
圖4 不同缺鐵誘導時間紫花苜蓿地上部分對鎳吸收的動態(tài)
圖5 不同缺鐵誘導時間對紫花苜蓿地下部分鎳吸收的動態(tài)
將完全培養(yǎng)液中生長的紫花苜蓿移栽到缺鐵培養(yǎng)液中,營養(yǎng)液中不加入Fe(Ⅲ)-EDTA,其他營養(yǎng)液中的成分與完全培養(yǎng)液相同,調(diào)節(jié)至pH6.7左右,分別培養(yǎng) 0 d、2 d、4 d、6 d、8 d、10 d,然后分別將這幾天培養(yǎng)下的紫花苜蓿移栽到5 μmol/L的硫酸鎳的缺鐵營養(yǎng)液中,處理48 h后,分地上和地下兩部分收獲。從圖4、圖5中看出,當缺鐵的處理時間增加,紫花苜蓿地上部分呈現(xiàn)先穩(wěn)定后下降的趨勢,地下部分呈現(xiàn)先上升后下降的一個形態(tài)。地上部分在缺鐵誘導時間2 d的時候紫花苜蓿對鎳的吸收富集的量最高值53 mg/kg,第四天達到50 mg/kg,與第二天兩者差距不大,當?shù)谒奶熘笞匣ㄜ俎N崭患嚨暮块_始下降。紫花苜蓿地下部分在缺鐵4 d的時候達到一個頂點,0 d開始到4 d呈現(xiàn)出緩慢上升的形態(tài),當4 d之后紫花苜蓿地下部分的含量開始出現(xiàn)明顯的下降趨勢。實驗過程中,缺鐵處理的前6 d對于紫花苜蓿并沒有明顯的缺鐵葉片黃化的現(xiàn)象,說明紫花苜蓿在前6 d的處理下并沒有影響到植物的轉(zhuǎn)運酶等生理生化的過程。當缺鐵處理第八天開始,植物的缺鐵現(xiàn)象通過紫花苜蓿葉片的黃化現(xiàn)象開始顯露出來。伴隨著缺鐵時間的增加,紫花苜蓿缺鐵葉片黃化現(xiàn)象也越明顯。由于紫花苜蓿的缺鐵處理時間的增加,植物中的很多酶蛋白等物質(zhì)不能夠正常地利用,導致植物本身根質(zhì)膜發(fā)生永久性的傷害,植物本身的生理生化功能不能正常運轉(zhuǎn),這樣必然會影響到紫花苜蓿根系對鎳的吸收,以及紫花苜蓿根部轉(zhuǎn)運到葉片的鎳也相對減少。
紫花苜蓿在缺鐵 0 d、2 d、4 d,無論地上還是地下部分的鎳含量差別不大,從植株地下轉(zhuǎn)運到地上部分的鎳含量相差不多,這說明紫花苜蓿鎳轉(zhuǎn)運效果在4 d前基本變化不大。但是第四天之后就開始出現(xiàn)了下降的趨勢,不僅地下部分植株的鎳含量下降,地上部分植株的鎳含量也隨著下降。轉(zhuǎn)運效果雖然在數(shù)量比上來看是一個增高的狀況,可是數(shù)值本身還是遞減的,這有可能是因為在培養(yǎng)到第六天之前地下植株轉(zhuǎn)運到地上部分,然后分別在植株體內(nèi)有一定的積累富集的基礎。當天數(shù)增加,地下部分植株的鎳含量開始出現(xiàn)下降的情況,說明缺鐵時間過久導致其富集吸收的能力下降。當時間增加之后,地上部分植株因為之前的富集積累有了一定的鎳含量基礎,所以沒有因為地下部分植株的含量減少,地上部分植株減少與地下部分植株較少比例同步,相反的地上部分植株的減少量反而很小。當?shù)竭_到第十天的時候,植株地上部分和地下部分基本對鎳的積累富集量很小了。
通過以上結(jié)果,可以發(fā)現(xiàn)當紫花苜蓿在缺鐵4 d的時候?qū)︽嚨母患渴亲畲蟮摹?/p>
本文主要研究在不同鐵濃度水平下紫花苜蓿對鎳吸收的情況。本實驗用紫花苜蓿作為實驗材料,分為三個部分。第一部分在缺鐵的條件下培養(yǎng)5 d,然后分別在兩個低高濃度鎳下處理紫花苜蓿。第二部分通過不同的供鐵濃度來影響紫花苜蓿對鎳的吸收。第三部分研究不同缺鐵時間對紫花苜蓿吸收鎳的影響。
缺鐵誘導對紫花苜蓿吸收鎳的結(jié)果表明,硫酸鎳濃度在 0.85 μmol/L 和 8.5 μmol/L 時,缺鐵誘導紫花苜蓿地下部分鎳含量是對照組的3.5倍和3.8倍。這說明與正常植株相比,缺鐵培養(yǎng)都能夠顯著提高植物的鎳富集量,并且從數(shù)據(jù)中可以看出,當硫酸鎳濃度在8.5 μmol/L時植株對鎳的促進富集效果更明顯。
不同鐵營養(yǎng)水平處理下紫花苜蓿鎳含量的結(jié)果表明,低濃度的供鐵對紫花苜蓿吸收鎳有一定的促進作用。當濃度升高之后,植物體內(nèi)的鎳含量反而出現(xiàn)了下降的趨勢,這有可能是濃度太高導致植物體內(nèi)某些酶的永久性傷害,或者開始出現(xiàn)抑制植物的吸收導致的;在20 μmol/L的Fe-EDTA處理下紫花苜蓿和5 μmol/L的Fe-EDTA處理下紫花苜蓿有更好的植物富集效果。從植物富集系數(shù)的比較來看,在0 μmol/L和5 μmol/L的Fe-EDTA處理下紫花苜蓿的植物富集系數(shù)更高,當濃度提高時植物富集系數(shù)開始減小。
缺鐵時間對紫花苜蓿吸收鎳的影響結(jié)果表明,在不同的缺鐵處理時間之后,地上部分和地下部分分別出現(xiàn)了先上升后下降的趨勢,雖然在0 d、2 d、4 d的植物的體內(nèi)鎳含量變化不是很大。在缺鐵處理7 d之后,紫花苜蓿開始出現(xiàn)缺鐵黃化的現(xiàn)象,隨著缺鐵時間的繼續(xù)增加,黃化現(xiàn)象越來越明顯。造成這種現(xiàn)象的原因是由于缺鐵時間的不斷增加,導致根非共質(zhì)體中的鐵不能再被利用,從而根質(zhì)膜發(fā)生一些不能自動恢復原態(tài),造成持久性不可恢復的傷害,因此導致質(zhì)膜轉(zhuǎn)運蛋白和其他酶系的表達也受到了巨大的傷害。
紫花苜蓿其生物量大,抗逆性強,植物生長快,一年可以收獲3~4次等特點,并且修復效率高,在鎳污染的植物土壤修復治理中,紫花苜蓿作為重金屬鎳污染的修復植物具有巨大的潛力。