張瑞英，賈焯文，趙發(fā)利，沈景霞，敖文杰

心力衰竭（HF）被認為是多種心血管疾病發(fā)展的終末狀態(tài)。盡管現(xiàn)有治療方法在提高HF患者生存率方面取得一定進展，但我國HF死亡率及患病率仍很高，造成巨大的社會經(jīng)濟負擔[1]。進一步探析HF發(fā)生、發(fā)展機制，為HF治療提供新的理論依據(jù)迫在眉睫。既往結果證實，炎癥反應及炎癥細胞因子在HF進展中發(fā)揮重要作用。高遷移率族蛋白B1（HMGB1）作為一種敏感的、非特異性的炎癥標志物，參與多種炎癥反應。研究表明，HMGB1水平與心血管疾病及其并發(fā)癥的發(fā)生、發(fā)展及預后有密切聯(lián)系。HMGB1結合晚期糖基化終產(chǎn)物受體（RAGE）促進炎癥反應，參與疾病的發(fā)生發(fā)展[2]?？扇苄訰AGE（sRAGE）作為RAGE的內(nèi)源性競爭性抑制劑可競爭性結合HMGB1，從而減輕甚至抑制炎癥反應[3]。本研究對HMGB1和sRAGE與HF患者心功能嚴重程度的相關性進行分析。

1 資料與方法

1.1 研究對象選取2014年8月～2015年1月期間就診于哈爾濱醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院心血管內(nèi)科的左室射血分數(shù)（LVEF）＜45%的HF患者73例（男性41例，女性32例，年齡62.78±13.51歲）?；颊叻纸M：①根據(jù)紐約心功能分級（NYHA）將患者分為A組（Ⅱ級，18例），B組（Ⅲ級，22例），C組（Ⅳ級，33例）；②根據(jù)既往病史、體格檢查、輔助檢查，按病因將患者分為擴張型心肌?。?3例）、缺血性心肌?。?1例）、其他病因（9例）。體檢人群中選擇年齡、性別與實驗組匹配者22例作為健康對照。排除標準：①患有急慢性炎癥性疾病，免疫系統(tǒng)疾??；②惡性腫瘤患者；③妊娠；④肝、腎功能嚴重受損患者；⑤急性腦血管病；⑥急性冠脈綜合征患者、縮窄性心包炎、心肌炎、先天性心臟病，以及伴有其他嚴重合并癥患者。本研究通過哈爾濱醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院倫理審查委員會審核批準，患者入組前均簽署知情同意書。

1.2 HMGB1、sRAGE和N末端腦鈉肽前體（NTproBNP）血漿水平測定所有受試者于清晨采空腹肘靜脈血2 ml于抗凝管中，靜置后離心（4000 rpm）5 min，分離血清移入EP管，密封后儲存于-80℃冰箱，待統(tǒng)一檢測。HMGB1（編號：E0399h）和sRAGE（編號：ARB10408）采用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）檢測，試劑盒購自北京誠林生物科技有限公司，操作嚴格按照說明書進行。NT-proBNP采用全自動生化分析儀檢測（ARCHITECT i2000sr），操作由兩名專業(yè)的核醫(yī)學科檢驗醫(yī)師獨立完成。

1.3 心臟彩超檢查用PHILIPS CX50型彩色多普勒超聲心動儀和1-5MHz探頭評估患者左室舒張末期內(nèi)徑（LVEDD）和LVEF。取心尖四腔切面水平測量舒張早期二尖瓣血流峰值（E）、舒張晚期二尖瓣血流速度峰值（A），計算E/A值。

1.4 統(tǒng)計學方法采用SAS 9.2軟件進行統(tǒng)計學分析。計量資料以均數(shù)±標準差（±s）表示，兩組間比較采用t或t'檢驗，多組間比較采用單因素方差分析；計數(shù)資料以例數(shù)（百分比）表示，組間比較采用卡方檢驗，相關性分析采用Pearson相關性分析。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 基線資料比較對照組和HF組患者基本臨床資料比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）（表1）。HF患者亞組間基線比較： A組、B組和C組患者性別、高血壓、糖尿病、膽固醇水平等基本資料無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）（表1）。

表1 基線資料比較

2.2 HF患者HMGB1、sRAGE、NT-proBNP及超聲指標比較HF組患者血清HMGB1及sRAGE水平較對照組顯著升高（P＜0.05）。HF組LVEF較對照組顯著降低，LVEDD和水平較對照組顯著升高，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）（表2）。

2.3 HF患者亞組間HMGB1、sRAGE、NTproBNP及超聲指標比較C組血清HMGB1、sRAGE和NT-proBNP濃度顯著高于A組和B組（P＜0.05）。B組血清HMGB1、sRAGE和NTproBNP濃度顯著高于A組（P＜0.05）。B組和C組組間比較LVEF無顯著差異（P＞0.05），但兩組LVEF均顯著低于A組（P＜0.05）。C組LVEDD顯著高于A組（P＜0.05），但與B組比較無顯著差異（P＞0.05）（表2）。擴張型心肌病組、缺血性心肌病組和其他病因組三組患者血清HMGB1、sRAGE和NT-proBNP含量無顯著差異（P＞0.05）（表3）。

2.4 相關性分析血清HMGB1和sRAGE與LVEF值呈負相關（HMGB1r=-0.4783，P＜0.05；sRAGEr=-0.4071，P＜0.05）、與LVEDD值呈正相關（HMGB1r=0.4454，P＜0.05；sRAGEr=0.5317，P＜0.05）、與NT-proBNP（HMGB1r=0.4850，P＜0.05；sRAGEr=0.4947，P＜0.05）值呈正相關（表4）。

表2 HMGB1、sRAGE、NT-proBNP及超聲指標比較

表3 不同病因間HMGB1、 sRAGE和NT-proBNP比較

3 討論

HF病理機制復雜，心臟重構是HF發(fā)生發(fā)展的重要機制之一[4,5]。既往研究表明，炎癥激活和炎癥因子產(chǎn)物增加在HF心室重構過程中發(fā)揮重要作用[6-8]。炎癥因子水平升高提示心血管不良事件發(fā)生率增加。因此，抑制炎癥反應有望延緩HF進展并改善預后。

HMGB1是機體非特異性炎癥反應的敏感標志物。正常情況下HMGB1存在于細胞核內(nèi)，調(diào)節(jié)基因復制和轉錄、參與DNA重組和修復、維持和穩(wěn)定核小體結構及調(diào)控類固醇激素等生命活動[2]。當機體出現(xiàn)炎癥時，HMGB1可由壞死細胞被動分泌或免疫細胞主動分泌到胞外，作為一種重要的晚期炎性遞質，通過其靶細胞表面的高親和力受體（RAGE和TLR2/4）調(diào)節(jié)炎癥反應。HMGB1對于受體RAGE具有高度親和力，二者結合后啟動炎癥級聯(lián)反應，并與多種細胞因子相互作用，進而引發(fā)持續(xù)和過度的炎癥反應[9,10]。Volz等對154例LVEF＜45%的HF患者進行分析，結果表明HF患者血漿中HMGB1含量顯著高于健康人群，并隨著HF嚴重程度逐漸增加，隨訪兩年半后發(fā)現(xiàn)HMGBl是HF患者死亡和心臟移植等復合終點事件的獨立預測因子[11]。本研究結果發(fā)現(xiàn)HF患者中血清HMGB1濃度升高。在不同NYHA心功能分級中，HMGB1濃度C組＞B組＞A組，兩兩比較差異均有統(tǒng)計學意義。由于NYHA心功能分級依賴患者的主觀感受和（或）醫(yī)生的主觀評價，可能會影響實驗結果，所以我們同時采用心臟彩超指標及NT-proBNP評估HF嚴重程度。分析結果表明，HMGB1與LVEF值呈顯著負相關、與LVEDD和NT-proBNP呈顯著正相關。此外，我們將不同病因患者進行亞組分析，結果表明擴張型心肌病、缺血性心肌病及其他病因HF患者血清中HMGB1含量無顯著差異。上述結果證實炎癥反應參與HF的發(fā)展，且HF程度越重，HMGB1濃度越高。

表4 相關性分析

RAGE是一種重要的內(nèi)源性模式識別受體，是HMGB1主要受體之一[12]。sRAGE則是基質金屬蛋白酶剪切RAGE胞外區(qū)域釋放到血液的游離RAGE和選擇性RNA剪接產(chǎn)物的總稱[13-15]。sRAGE在循環(huán)中表達豐富，與RAGE結構相似但不具有細胞內(nèi)信號轉導功能，故可競爭性結合HMGB1，阻斷后續(xù)的炎癥反應通路[16,17]。既往研究表明，HF患者血清sRAGE含量顯著升高，且HF程度越重，sRAGE含量越高[18]。高sRAGE組的心臟事件發(fā)生率明顯高于低sRAGE組，多變量Cox比例風險分析結果說明sRAGE是心臟事件的獨立危險因素[19]。本研究結果發(fā)現(xiàn)HF患者血清sRAGE濃度高于健康對照組，同HMGB1變化趨勢相似，隨著HF程度加重，sRAGE濃度逐漸升高，與LVEF值呈顯著負相關、與LVEDD和NT-proBNP呈顯著正相關。sRAGE濃度變化與病因無關。

HF時的炎癥反應可促進HMGB1被乙酰化由胞核轉移至細胞質，進而分泌至血液[2,9]。HMGB1作為配體進一步刺激細胞膜RAGE表達增多。二者結合后促進炎性因子釋放，正反饋放大炎癥反應，參與HF進展。另一方面，HF患者基質金屬蛋白酶活性增高[20]，sRAGE產(chǎn)物也增加。因sRAGE可對抗炎癥反應，保護衰竭心臟，HF時sRAGE濃度的增加可能是其配體HMGB1濃度增加的一種代償機制。因此，sRAGE可能與腦鈉肽（BNP）的作用方式相似，在HF中升高具有重要意義。

綜上所述，動態(tài)監(jiān)測血清HMGB1和sRAGE水平可能成為診斷HF、觀察病情變化及判斷HF預后的新指標，具有潛在的臨床應用價值。