梁寶珍，張利華，林思園，王恒雨，陳雪君

·論著·

長(zhǎng)鏈非編碼RNA LSINCT5在乳腺癌的表達(dá)及其對(duì)細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移的影響

梁寶珍，張利華，林思園，王恒雨，陳雪君

523320 廣東，東莞市第三人民醫(yī)院/南方醫(yī)科大學(xué)附屬東莞石龍人民醫(yī)院乳腺外科（梁寶珍、張利華、林思園、陳雪君）；510515 廣州，南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院普通外科（王恒雨）

探討長(zhǎng)鏈非編碼 RNA LSINCT5（lncRNA LSINCT5）在乳腺癌組織的表達(dá)及其臨床意義，研究其對(duì)乳腺癌細(xì)胞增殖、遷移及侵襲功能的作用。

選取 80 例手術(shù)切除的乳腺癌組織及癌旁組織為研究對(duì)象，采用 qRT-PCR 檢測(cè)LSINCT5 的表達(dá)水平。收集和分析患者臨床病例資料與 LSINCT5 表達(dá)水平的相關(guān)性。將 LSINCT5-siRNA 分別轉(zhuǎn)染人乳腺癌MDA-MB-231 和 MCF-7 細(xì)胞系，qRT-PCR 檢測(cè) LSINCT5 的細(xì)胞表達(dá)水平，鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)，CCK8 法檢測(cè)細(xì)胞增殖情況，術(shù)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)腫瘤細(xì)胞周期變化，通過劃痕實(shí)驗(yàn)及 Transwell 實(shí)驗(yàn)分別檢測(cè)細(xì)胞遷移及侵襲功能的影響。

LSINCT5 的表達(dá)在乳腺癌組織及細(xì)胞系中明顯升高（< 0.01）。LSINCT5 表達(dá)水平與乳腺癌患者 TNM 分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、PR 和 Ki-67 相關(guān)（< 0.01），而與年齡、病理類型、ER 和 Her2 無關(guān)（> 0.05）。下調(diào) LSINCT5 表達(dá)的 MDA-MB-231 和 MCF-7 細(xì)胞系的增殖能力明顯減弱，細(xì)胞周期受到抑制，且腫瘤細(xì)胞的遷移及侵襲數(shù)量顯著減少，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（< 0.05）。

LSINCT5 的表達(dá)與乳腺癌發(fā)生、進(jìn)展密切相關(guān)，可能成為乳腺癌診斷的潛在生物學(xué)標(biāo)志物。LSINCT5 促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移，可能為尋找乳腺癌新的治療靶點(diǎn)提供理論依據(jù)。

乳腺癌； LSINCT5； 增殖； 轉(zhuǎn)移

乳腺癌（breast cancer，BC）是最常見的女性惡性腫瘤之一，位列全球女性腫瘤發(fā)病率第一[1-2]。目前我國(guó)乳腺癌患者的死亡率與發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)，以 30 ~ 59 歲女性為高發(fā)人群[3]。乳腺癌的發(fā)生及進(jìn)展是一個(gè)多因素參與的復(fù)雜過程，其高度異質(zhì)性導(dǎo)致患者的臨床表征、療效及預(yù)后呈現(xiàn)較大的個(gè)體差異[4-5]。因此，探討不同生物標(biāo)志物在乳腺癌疾病進(jìn)程中的臨床意義對(duì)識(shí)別其潛在的預(yù)判因子、診斷手段與治療靶點(diǎn)尤為重要。

不同腫瘤與同種腫瘤不同組織類型的 lncRNA 表達(dá)水平異常，可作為抑癌基因或癌基因直接或間接調(diào)控腫瘤相關(guān)的信號(hào)途徑[6]。研究報(bào)道，在肺癌、胃癌組織中LSINCT5 的表達(dá)水平明顯升高，并且調(diào)控腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲，與癌癥患者預(yù)后不良存在密切的聯(lián)系[7-8]。崔夢(mèng)等[9]通過研究證實(shí)乳腺癌患者的血清 LSINCT5 表達(dá)水平較正常人明顯升高。目前，LSINCT5 在乳腺癌標(biāo)本中的表達(dá)及其與臨床指標(biāo)的關(guān)聯(lián)性尚不明確，LSINCT5 與乳腺癌細(xì)胞生物學(xué)行為的相關(guān)研究亦未見報(bào)道。本研究旨在從體外細(xì)胞水平探討 LSINCT5 對(duì)人乳腺癌細(xì)胞的增殖、轉(zhuǎn)移的影響，分析乳腺癌中 LSINCT5 的表達(dá)水平與患者臨床參數(shù)的相關(guān)性，為研究乳腺癌發(fā)病機(jī)制提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣本來源 80 例乳腺癌組織標(biāo)本及癌旁組織選取于 2018 年 01 月 – 2019 年 01 月在本院進(jìn)行手術(shù)治療的乳腺癌患者，平均年齡（46.70 ± 2.45）歲。樣本離體后立即在液氮中快速冷凍并儲(chǔ)存在 –80 ℃，所有組織標(biāo)本同時(shí)制作用于實(shí)驗(yàn)。納入標(biāo)準(zhǔn)：術(shù)前經(jīng)腫瘤標(biāo)志物化驗(yàn)、乳腺鉬靶和細(xì)胞學(xué)穿刺等檢查高度提示乳腺癌，且均經(jīng)手術(shù)病理確診為乳腺癌。排除標(biāo)準(zhǔn)：①術(shù)前已接受放、化療或腫瘤藥物治療；②患有其他惡性腫瘤或既往有其他腫瘤史；③自身免疫性疾病者；④合并嚴(yán)重器質(zhì)性疾病；⑥臨床資料不完整者。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)且所有患者均簽署知情同意書。

1.1.2 細(xì)胞系 人乳腺上皮細(xì)胞系 MCF-10A，人乳腺癌細(xì)胞系 MDA-MB-231、MCF-7、MDA-MB-435 和ZR-75-1均購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院。

1.1.3 試劑和儀器 Lipofectamine3000 轉(zhuǎn)染試劑購(gòu)自美國(guó) Invitrogen 公司；胎牛血清購(gòu)自美國(guó) Hyclone 公司；CCK8 試劑盒購(gòu)自日本Dojindo 公司；RNA 提取試劑盒購(gòu)自日本 Takara 公司；ReverTra Ace qRT-PCR Master Mix 逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、SYBR Green Realtime PCR Master Mix 擴(kuò)增試劑盒購(gòu)自日本 Toyobo 公司；PCR 引物和PI Staining Kit購(gòu)自生工生物工程（上海）股份有限公司；LSINCT5-siRNA 和 siRNA-NC 購(gòu)自上海吉?jiǎng)P生物技術(shù)有限公司；Transwell 板購(gòu)自美國(guó) Corning 公司；real-time Thermocycler 7500 PCR 儀購(gòu)自美國(guó) ABI 公司；酶標(biāo)儀購(gòu)自美國(guó) BioTek Instruments 公司；光學(xué)顯微鏡購(gòu)自日本 Olympus 公司。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)胞系培養(yǎng)與轉(zhuǎn)染 適量細(xì)胞加入含 10% 胎牛血清和 1% 青霉素/鏈霉素的DMEM 培養(yǎng)基中，置于 37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待細(xì)胞生長(zhǎng)約 80% 后進(jìn)行傳代、培養(yǎng)。取對(duì)數(shù)期細(xì)胞，參照 Lipofectamine3000 說明書轉(zhuǎn)染。設(shè)置 NC 組和 LSINCT5-siRNA 組，即分別轉(zhuǎn)染 siRNA-NC 或 LSINCT5-siRNA 的乳腺癌細(xì)胞系，置于 37 ℃、5% CO2中培養(yǎng) 48 h，隨后收集細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.2.2 實(shí)時(shí)定量 PCR 檢測(cè) LSINCT5 表達(dá)水平 提取標(biāo)本總 RNA，取吸光度（260/280 nm）值在 1.7 ~ 2.0 的 RNA 樣本置–80 ℃保存，用于后續(xù)試驗(yàn)。采用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒將 RNA 樣本逆轉(zhuǎn)錄為 cDNA，置–80 ℃保存。根據(jù) GeneBank 中 LSINCT5 基因的序列號(hào)（NM 101234261），用 Primer Primer 5.0 軟件設(shè)計(jì)引物，并用 oligo7 以及 NCBI 在線工具 Primer-BLAST 比對(duì)后由生工生物工程（上海）股份有限公司合成。以 GADPH 作為內(nèi)參照，上游引物序列：5' CAATGACCCCTTCA TTGACC 3'，下游引物序列：5' TGGAAGATGGTG ATGGGATT 3'，退火溫度 60 ℃，產(chǎn)物片段大小為 129 bp。LSINCT5 上游引物序列：5' TTCGGCAAG CTCCTTTTCTA 3'，下游引物序列：5' GCCCAAG TCCCAAAAAGTTCT 3'，退火溫度 59 ℃，產(chǎn)物片段大小為 301 bp。PCR 反應(yīng)總體系為 20 μl，包括 SYBR Green Realtime PCR Master Mix 10 μl，10 μmol/L 上、下游引物各 1 μl，cDNA 模板 2.5 μl，ddH2O 5.5 μl。循環(huán)參數(shù)：95 ℃ 60 s；95 ℃ 15 s，60 ℃ 34 s，72 ℃ 45 s，共 40 個(gè)循環(huán)，收集熒光信號(hào)后進(jìn)行熔解曲線分析。結(jié)果以 2-ΔΔCt法表示。試驗(yàn)重復(fù) 3 次。

1.2.3 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè) 細(xì)胞轉(zhuǎn)染后繼續(xù)培養(yǎng) 48 h，胰酶消化，離心、收集細(xì)胞，PBS 洗2 遍后使用 70% 乙醇重懸細(xì)胞。在 4 ℃下固定 24 h 后離心棄上清，PBS 洗 2 遍，加入 PI 染液 300 μl，避光孵育 1 h 后上機(jī)檢測(cè)。

1.2.4 CCK8 檢測(cè)細(xì)胞的增殖能力 取轉(zhuǎn)染后細(xì)胞懸浮于含 10% 牛血清的 RPMI1640 培養(yǎng)液中，調(diào)整細(xì)胞濃度為 1.0 × 105個(gè)/ml，分別接種到 96 孔培養(yǎng)板上，每組 3 個(gè)重復(fù)。培養(yǎng) 48 h 后光學(xué)顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)，繼續(xù)培育 24 h 后向各孔加入 20 μl CCK8 稀釋液，振蕩后繼續(xù)培養(yǎng) 1 h，用酶標(biāo)儀在 490 nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度。

1.2.5 劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移能力 在 6 孔板背面間隔約 1 cm 劃直線，橫穿過孔。在各組空板中加入約 2 × 105個(gè)細(xì)胞，貼壁生長(zhǎng) 24 h 后用 200 μl 移液槍頭垂直于 6 孔板背后的橫線劃痕。棄去培養(yǎng)液，PBS 洗滌 2 次后加入無血清培養(yǎng)基，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，在 0、24 h 后拍照。

1.2.6 Transwell 檢測(cè)細(xì)胞侵襲能力 取轉(zhuǎn)染后細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞密度為 1.0 × 105個(gè)/ml 的細(xì)胞懸液。取 1 ml 細(xì)胞懸液加入含有無血清培養(yǎng)基的 Transwell 板上層。下層加入含 10% 胎牛血清的培養(yǎng)基。培養(yǎng) 24 h 后，將上層細(xì)胞去除，用 95% 乙醇固定和 0.05% 結(jié)晶紫的染料溶液染色 15 min，棉花拭子輕刮去除非移行細(xì)胞，光學(xué)顯微鏡下觀察、計(jì)數(shù)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 LSINCT5 在乳腺癌組織與細(xì)胞系中的表達(dá)顯著上調(diào)

為了研究 LSINCT5 在 BC 中的表達(dá)情況，通過 qRT-PCR 實(shí)驗(yàn)檢測(cè) 80 例乳腺癌組織及癌旁組織的 LSINCT5 表達(dá)，結(jié)果提示乳腺癌組織中 LSINCT5 的表達(dá)量較癌旁組織顯著增加（< 0.01）（圖 1A）。進(jìn)一步通過 qRT-PCR 實(shí)驗(yàn)檢測(cè) LSINCT5 在人乳腺上皮細(xì)胞系 MCF-10A，人乳腺癌細(xì)胞系 MDA-MB-231、MCF-7、MDA-MB-435 和 ZR-75-1 的表達(dá)，結(jié)果顯示 LSINCT5 在MDA-MB-231 和 MCF-7 細(xì)胞系中的表達(dá)明顯高于 MCF-10A 細(xì)胞系（< 0.01）（圖 1B），提示 LSINCT5 可能在乳腺癌的發(fā)展過程中發(fā)揮促進(jìn)作用。為了探究 LSINCT5 在乳腺癌細(xì)胞系中的生物學(xué)功能，本研究選擇 MDA-MB-231 和 MCF-7 進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)。通過轉(zhuǎn)染 LSINCT5-siRNA 到 MDA-MB-231 和 MCF-7 細(xì)胞系，qRT-PCR 證實(shí)轉(zhuǎn)染 LSINCT5-siRNA 后的乳腺癌細(xì)胞中 LSINCT5的表達(dá)顯著下降（圖1C）。

Figure 1 LSINCT5 is upregulated in human BC tissues and cells (A: The expression of LSINCT5 was measured by qRT-PCR assay; B: The levels of LSINCT5 were examined in human BC cell lines MDA-MB-231, MCF-7, MDA-MB-435, ZR-75-1 and human normal breast epithelial cell line MCF-10A by qRT-PCR assay; C: Transfection with LSINCT5-siRNA significantly decreased its level in MDA-MB-231 and MCF-7 by qRT-PCR assay;**< 0.01)

表 1 LSINCT5 的表達(dá)與臨床病理特征關(guān)系

2.2 LSINCT5 表達(dá)與患者臨床病理特征的關(guān)系

統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果表明，LSINCT5 的表達(dá)量與乳腺癌患者的 TNM 分期、PR 表達(dá)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和 Ki-67 的相關(guān)性具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均 < 0.05），而與年齡、病理類型、ER 和 Her2 則無相關(guān)性（> 0.05），提示 LSINCT5 的表達(dá)可能影響乳腺癌的進(jìn)展，詳見表 1。

Figure 2 Down-regulation of LSINCT5 reduces proliferation of BC cells and leads to cell cycle arrest (A: The morphology of BC cells was observed under high magnification microscope; B: Estimation of cell proliferation in MDA-MB-231 and MCF-7 cells transfected with NC or LSINCT5-siRNA by CCK8 assays; C: Cell cycle distribution of MDA-MB-231 and MCF-7 cells transfected with NC or LSINCT5-siRNA was detected by FACS;**< 0.01)

2.3 抑制 LSINCT5 降低乳腺癌細(xì)胞的增殖能力并引起周期阻滯

在顯微鏡下觀察轉(zhuǎn)染 LSINCT5-siRNA 的 MDA-MB-231 和 MCF-7 細(xì)胞系形態(tài)并拍照（圖 2A）。CCK8 檢測(cè)結(jié)果顯示，下調(diào) LSINCT5 表達(dá)后乳腺癌細(xì)胞的增殖數(shù)量明顯減少（圖 2B）。通過流式細(xì)胞術(shù)觀察抑制 LSINCT5 表達(dá)后 MCF-7 和 MDA-MB-231 的細(xì)胞周期變化。結(jié)果顯示，與NC 組相比，轉(zhuǎn)染 LSINCT5-siRNA 后，MCF-7 和 MDA-MB-231 的 G0/G1細(xì)胞數(shù)分別升高 29.59%、39.74%（< 0.01），S 期細(xì)胞數(shù)分別降低 21.43%、30.87%（< 0.05），G2/M 期細(xì)胞數(shù)分別減少 8.16%、8.87%（< 0.05），提示 LSINCT5 可能通過調(diào)控細(xì)胞周期促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的增殖（圖 2C）。

Figure 3 Down-regulation of LSINCT5 inhibit the migration and invasion of BC cells (A: Estimation of cell migration in MDA-MB-231 and MCF-7 cells transfected with NC or LSINCT5-siRNA by scratch assays; B: Estimation of cell invasion in MDA-MB-231 and MCF-7 cells transfected with NC or LSINCT5-siRNA was detected by Transwell migration assays;*< 0.05,**< 0.01)

2.4 下調(diào) LSINCT5 表達(dá)抑制乳腺癌細(xì)胞的侵襲與遷移能力

通過劃痕實(shí)驗(yàn)分析 NC 組、LSINCT5-siRNA 組細(xì)胞的遷移能力變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，抑制 LSINCT5 表達(dá)后，乳腺癌細(xì)胞的遷移速度顯著降低（圖 3A）（< 0.01）。隨后 Transwell 實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)，降低 LSINCT5 表達(dá)后 MDA-MB-231 和 MCF-7 細(xì)胞的侵襲數(shù)量顯著降低（< 0.01）（圖 3B）。

3 討論

lncRNA 是一類長(zhǎng)度大于 200 個(gè)核苷酸的非編碼長(zhǎng)鏈 RNA[10-11]。研究報(bào)道 lncRNA 的表達(dá)紊亂普遍存在于腫瘤中，且其表達(dá)模式具有比蛋白編碼基因更出色的組織特異性[12-13]。許多研究表明，lncRNA 可以作為調(diào)控因子，參與調(diào)控乳腺癌的發(fā)生及進(jìn)展，例如在乳腺癌組織中高表達(dá)的 lncRNA UCA1 能夠增加乳腺癌細(xì)胞的增殖能力，同時(shí)具有抑制細(xì)胞凋亡的作用[14]。lncRNA MIR210HG 被證實(shí)在乳腺癌中過表達(dá)，與患者預(yù)后相關(guān)，其能夠促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移[15]。

LSINCT5 長(zhǎng)度為 2.6 kb，位于 5 號(hào)染色體（chr5: 2，765，705-2，768，351），是應(yīng)激誘導(dǎo)長(zhǎng)鏈非編碼轉(zhuǎn)錄本，位于細(xì)胞核內(nèi)。而目前關(guān)于 LSINCT5 在乳腺癌中的作用及可能機(jī)制研究尚未見報(bào)道，故研究其對(duì)乳腺癌細(xì)胞的生物學(xué)影響，將有助于乳腺癌發(fā)生、發(fā)展機(jī)制研究。本研究首先收集了 80 對(duì)乳腺癌患者術(shù)后的確診組織標(biāo)本，實(shí)驗(yàn)證實(shí) LSINCT5 在乳腺癌組織中呈高表達(dá)，進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)明確 LSINCT5 在乳腺癌細(xì)胞系中表達(dá)升高。隨后統(tǒng)計(jì)分析表明 LSINCT5 表達(dá)水平與 TNM 分期、是否淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、PR 和 Ki-67 存在一定相關(guān)性，提示其可能參與調(diào)控乳腺癌進(jìn)程，并可能作為乳腺癌患者評(píng)估病情進(jìn)展的指標(biāo)和治療靶點(diǎn)。在體外細(xì)胞水平，本研究通過轉(zhuǎn)染 siRNA 抑制 MCF-7、MDA-MB-231 細(xì)胞中 LSINCT5 的表達(dá)，通過 CCK8 證實(shí) LSINCT5 的表達(dá)抑制導(dǎo)致 MCF-7、MDA-MB-231 細(xì)胞的增殖能力出現(xiàn)明顯的抑制，進(jìn)一步利用流式細(xì)胞術(shù)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，降低 LSINCT5 的表達(dá)后，MCF-7 及 MDA-MB-231 細(xì)胞的 G0/G1期比例增多、S 期和 G2/M 細(xì)胞比例減少，證實(shí)下調(diào) LSINCT5 的表達(dá)使得乳腺癌細(xì)胞周期阻滯在 DNA 復(fù)制期之前。通過劃痕實(shí)驗(yàn)和 Transwell 實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)，下調(diào) LSINCT5 的表達(dá)均減弱了 MCF-7 和 MDA-MB-231 細(xì)胞的遷移和侵襲能力。LSINCT5 在細(xì)胞出現(xiàn)應(yīng)激反應(yīng)時(shí)表達(dá)明顯增強(qiáng)，故定義為壓力誘導(dǎo)長(zhǎng)鏈非編碼 RNA[16]。應(yīng)激反應(yīng)普遍存在于腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程，而壓力誘導(dǎo)相關(guān) lncRNAs 和腫瘤發(fā)生高度相關(guān)。研究表明，LSINCT5 在腫瘤細(xì)胞中呈高表達(dá)，且與腫瘤浸潤(rùn)深度、腫瘤分期等密切相關(guān)，如胃癌組織中 LSINCT5 的表達(dá)水平是 DFS 的獨(dú)立預(yù)后因素[17]，研究表明抑制 LSINCT5 在膀胱癌中的表達(dá)使得癌細(xì)胞的增殖和侵襲功能明顯減弱[18]。故 LSINCT5 作為壓力誘導(dǎo)長(zhǎng)鏈非編碼 RNA，可能使乳腺癌細(xì)胞周期不受控制，從而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生和轉(zhuǎn)移。

綜上所述，本研究為乳腺癌的發(fā)病機(jī)制提供了新的理論認(rèn)識(shí)。LSINCT5 在乳腺癌組織及細(xì)胞系中呈高表達(dá)，下調(diào) LSINCT5 的表達(dá)能夠減弱乳腺癌細(xì)胞增殖、遷移及侵襲能力，其可能是通過調(diào)控細(xì)胞周期而發(fā)揮作用，有可能成為乳腺癌的新治療靶點(diǎn)。

[1] Siegel RL, Miller KD, Jemal A. Cancer statistics, 2018. CA Cancer J Clin, 2018, 68(1):7-30.

[2] Chen W, Zheng R, Baade PD, et al. Cancer statistics in China, 2015. CA Cancer J Clin, 2016, 66(2):115-132.

[3] Akram M, Iqbal M, Daniyal M, et al. Awareness and current knowledge of breast cancer. Biol Res, 2017, 50(1):33.

[4] Michailidou K, Beesley J, Lindstrom S, et al. Genome-wide association analysis of more than 120,000 individuals identifies 15 new susceptibility loci for breast cancer. Nat Genet, 2015, 47(4):373-380.

[5] Mcpherson K, Steel CM, Dixon JM. Breast cancer-epidemiology, risk factors, and genetics. BMJ, 2000, 321(7261):624-628.

[6] Hu X, Feng Y, Zhang D, et al. A functional genomic approach identifies FAL1 as an oncogenic long noncoding RNA that associates with BMI1 and represses p21 expression in cancer. Cancer Cell, 2014, 26(3):344-357.

[7] Tian Y, Zhang N, Chen S, et al. The long non-coding RNA LSINCT5 promotes malignancy in non-small cell lung cancer by stabilizing HMGA2. Cell Cycle, 2018, 17(10):1188-1198.

[8] Qi P, Lin WR, Zhang M, et al. E2F1 induces LSINCT5 transcriptional activity and promotes gastric cancer progression by affecting the epithelial-mesenchymal transition. Cancer Manag Res, 2018, 10:2563- 2571.

[9] Cui M, Zhang Y, Luo Q, et al. Diagnostic value of serum long non-coding RNA LSINCT5 in breast cancer. Chin J Clin Lab Sci, 2018, 36(8):570-573. (in Chinese)

崔夢(mèng), 張毅, 羅慶, 等. 血清長(zhǎng)鏈非編碼RNA LSINCT5在乳腺癌中的表達(dá)與臨床意義. 臨床檢驗(yàn)雜志, 2018, 36(8):570-573.

[10] Ma W, Chen X, Ding L, et al. The prognostic value of long noncoding RNAs in prostate cancer: a systematic review and meta-analysis. Oncotarget, 2017, 8(34):57755-57765.

[11] Hu HL, Yang L, Deng Y, et al. Expression of lncRNA RP5-1185K9.17 in cancer tissues of the patients with colorectal cancer and its clinical significance. Chin J Cancer Biother, 2017, 24(7):773-777. (in Chinese)

胡洪林, 楊蘭, 鄧穎, 等. lncRNA RP5-1185K9.17在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)及其臨床意義. 中國(guó)腫瘤生物治療雜志, 2017, 24(7):773- 777.

[12] Gutschner T, Diederichs S. The hallmarks of cancer: a long non-coding RNA point of view. RNA Biol, 2012, 9(6):703-719.

[13] Schaukowitch K, Kim TK. Emerging epigenetic mechanisms of long non-coding RNAs. Neuroscience, 2014, 264:25-38.

[14] Tuo YL, Li XM, Luo J. Long noncoding RNA UCA1 modulates breast cancer cell growth and apoptosis through decreasing tumor suppressive miR-143. Eur Rev Med Pharmacol Sci, 2015, 19(18): 3403-3411.

[15] Li XY, Zhou LY, Luo H, et al. The long noncoding RNA MIR210HG promotes tumor metastasis by acting as a ceRNA of miR-1226-3p to regulate mucin-1c expression in invasive breast cancer. Aging (Albany NY), 2019, 11(15):5646-5665.

[16] Silva JM, Perez DS, Pritchett JR, et al. Identification of long stress-induced non-coding transcripts that have altered expression in cancer. Genomics, 2010, 95(6):355-362.

[17] Xu MD, Qi P, Weng WW, et al. Long non-coding RNA LSINCT5 predicts negative prognosis and exhibits oncogenic activity in gastric cancer. Medicine (Baltimore), 2014, 93(28):e303.

[18] Zhu X, Li Y, Zhao S, et al. LSINCT5 activates Wnt/β-catenin signaling by interacting with NCYM to promote bladder cancer progression. Biochem Biophys Res Commun, 2018, 502(3):299-306.

Expression of lncRNA LSINCT5 in breast cancer and its effects on cell proliferation and metastasis

LIANG Bao-zhen, ZHANG Li-hua, LIN Si-yuan, WANG Heng-yu, CHEN Xue-jun

Department of Breast Surgery, Dongguan Third People’s Hospital/Affiliated Shilong People’s Hospital of Southern Medical University, Guangdong 523320, China (LIANG Bao-zhen, ZHANG Li-hua, LIN Si-yuan, CHEN Xue-jun); Department of General Surgery, Nanfang Hospital, Southern Medical University, Guangzhou 510515, China (WANG Heng-yu)

This study was aimed to investigate the expression and clinical significance of lncRNA LSINCT5 in breast cancer (BC), and its effect on the proliferation, migration and invasion of breast cancer cells.

80 cases of breast cancer tissues and adjacent normal tissues removed from BC patients after surgery were included in our study. The expression level of LSINCT5 was detected through qRT-PCR. The correlations between LSINCT5 expression and clinical collected pathological data in these cases were analyzed. LSINCT5-siRNA were respectively transfected into MDA-MB-231 and MCF-7 cell lines, while the expression level of LSINCT5 was detected through qRT-PCR. Cell morphology was observed under light microscope. Then CCK8 and flow cytometry assays were performed to detect proliferation and cell cycle of tumor cells, respectively. At last, we used wound scratch assay and Transwell migration assay to examine cell migration and invasion.

The expression of LSINCT5 was significantly increased in breast cancer tissues and cell lines (< 0.01) and its expression level was correlated with TNM staging, lymph node metastasis, PR, and Ki-67 in breast cancer patients (< 0.01), while it didn’t show any correlation with age, pathological type, ER, or Her2 (> 0.05). The proliferation ability of MDA-MB-231 and MCF-7 cell lines with down-regulated LSINCT5 expression was significantly decreased. The cell cycle was inhibited, and tumor cell migration and invasion was significantly reduced with statistically significant differences (< 0.05).

The expression level of LSINCT5 is closely related to the occurrence and progression of breast cancer, and LSINCT5 may be a potential biomarker in the diagnosis of BC. LSINCT5 promotes the proliferation and metastasis of breast cancer cells, suggesting that it may provide a theoretical basis for finding new therapeutic targets for breast cancer.

Breast cancer; LSINCT5; Proliferation; Metastasis

ZHANG Li-hua, Email: zlh3thh@163.com

張利華，Email：zlh3thh@163.com

10.3969/j.issn.1673-713X.2020.02.018

2019-10-08