劉桃花

（山西省朔州市中心血站檢驗(yàn)科，山西 朔州）

0 引言

近些年來(lái)，隨著社會(huì)的進(jìn)步和發(fā)展，無(wú)償獻(xiàn)血宣傳力的增大，獻(xiàn)血者不斷增加，為了提高臨床輸血安全，預(yù)防和控制因輸血導(dǎo)致疾病的傳播，提高血站和醫(yī)院血液標(biāo)本質(zhì)量，降低輸血中傳播病毒的風(fēng)險(xiǎn)，因此在獻(xiàn)血者血液檢測(cè)中運(yùn)用核酸檢測(cè)技術(shù)是十分重要的。核酸檢測(cè)技術(shù)[1]（NAT）作為血液傳播疾病檢測(cè)的新方法，具有特異性高，受標(biāo)本影響小，靈敏度高，易實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化等優(yōu)點(diǎn)， 2014 年成都市血液中心在四川省率先實(shí)現(xiàn)血液核酸檢測(cè)全覆蓋，2015 年國(guó)家衛(wèi)計(jì)委下發(fā)《關(guān)于做好血站核酸檢測(cè)的通知》，極大程度上縮短血液中各類(lèi)病毒檢測(cè)的窗口期，對(duì)防控艾滋病等經(jīng)血液傳播的疾病具有重大意義，在各個(gè)醫(yī)療機(jī)構(gòu)中應(yīng)用均取得良好效果。

本次研究隨機(jī)選擇本血站2016 年9 月至2019 年9 月合格獻(xiàn)血者血液標(biāo)本300 例作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，應(yīng)用轉(zhuǎn)錄介導(dǎo)擴(kuò)增檢測(cè)技術(shù)（TMA），對(duì)所選的血液標(biāo)本進(jìn)行核酸檢測(cè)，觀察NTA 陽(yáng)性檢出率，分項(xiàng)確證NAT 檢測(cè)陽(yáng)性標(biāo)本，探究核酸檢測(cè)技術(shù)（NAT）在血液檢測(cè)中運(yùn)用的價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

隨機(jī)選擇本血站2016 年9 月至2019 年9 月合格獻(xiàn)血者血液標(biāo)本300 例作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，男性168 例，女性132 例，年齡20-58 歲，平均（31.4±6.8）歲。所選血液標(biāo)本均通過(guò)乙肝表面抗原（HBsAg）、抗人類(lèi)免疫缺陷病毒（HIV）以及抗丙肝病毒（HCV）等檢查合格[2]。采血完成后，每位獻(xiàn)血者選取4 份血液標(biāo)本 ，分別進(jìn)行保持核酸留樣標(biāo)本、酶聯(lián)免疫[3]（ELISA）及血型檢測(cè)、核酸檢測(cè)、對(duì)谷氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）檢測(cè) ，所有檢測(cè)均在2 小時(shí)內(nèi)完成離心，放置在2-8℃冰箱中冷藏保存，離心核算留樣標(biāo)本后放在-20℃下保存。

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器與試劑

儀器：全自動(dòng)核酸提取工作臺(tái)（華益美公司STRA），全自動(dòng)酶聯(lián)免疫分析系統(tǒng)（FAME42），擴(kuò)增儀（ABI7500），全自動(dòng)加樣儀（Hamilton Microlab），低速離心機(jī)（KUBOTA8420），PROCLEIX TIGRIS 核酸檢測(cè)系統(tǒng)（美國(guó)諾華）。

試劑：ELISA 檢測(cè)試劑（HBsAg、抗-HIV、抗-HCV），NAT 試劑（華益美公司），核酸定性篩査試劑，核酸定量檢測(cè)試劑：HIVRNA-1，-2，HCV-RNA 和HBV-DNA。

1.3 方法

按照ELISA 試劑盒說(shuō)明書(shū)的要求和規(guī)范進(jìn)行操作，對(duì)HBsAg、抗HIV、抗HCV 進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)合格的血液標(biāo)本采用TMA 檢測(cè)技術(shù)，對(duì)ATM 進(jìn)行檢測(cè)。進(jìn)入NAT 檢測(cè)，將標(biāo)本放在樣品架上，每8份血液標(biāo)本均選取150μL 共1.2mL 血漿到一級(jí)混樣池中，選擇全自動(dòng)混樣儀加樣對(duì)HIV-RNA、HCV-RNA 及HBV-DNA 實(shí)施檢測(cè)，在服務(wù)器系統(tǒng)中自動(dòng)對(duì)結(jié)果進(jìn)行判讀。判定為NAT 陽(yáng)性，再進(jìn)行HIV-RNA、HCV-RNA、HBV-DNA 的鑒別試驗(yàn)。分析并記錄血液標(biāo)本的核酸檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)結(jié)果。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

將所得數(shù)據(jù)采用SPSS 22.0 統(tǒng)計(jì)軟件處理，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，計(jì)數(shù)資料以百分比表示，兩組間計(jì)量資料比較采用t 檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，結(jié)果以P＜0.05 表示差異有顯著性。

2 結(jié)果

所選的300 例血液標(biāo)本中，13 例為陽(yáng)性，陽(yáng)性檢出率為4.3%； HIV-RNA 陽(yáng)性、HCV-RNA 陽(yáng)性、 HBV-DNA 陽(yáng)性分別為0、0、8。分項(xiàng)確證相關(guān)數(shù)據(jù)見(jiàn)表1。

表1 NAT 檢測(cè)陽(yáng)性標(biāo)本分項(xiàng)確證試驗(yàn)結(jié)果（份，%）

3 討論

WHO2006 年調(diào)查124 個(gè)國(guó)家中有56 個(gè)國(guó)家未對(duì)所有血液標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，目前，世界上尚有20%的人用血未經(jīng)檢測(cè)，60%的血液經(jīng)過(guò)檢測(cè)但并不安全，20%才用上完全安全的血液[4]，WHO 提出四大戰(zhàn)略保障輸血安全：建立國(guó)家協(xié)調(diào)的采供血網(wǎng)絡(luò)和質(zhì)量體系；從低危獻(xiàn)血者中采集血液；嚴(yán)格篩選檢測(cè)血液和合理用血；減少不必要的輸血。加強(qiáng)用血前免疫相容性檢查，加強(qiáng)血液制品的病毒滅活，防止免疫性輸血反應(yīng)，我國(guó)是肝炎大國(guó)[5]，HBsAg 陽(yáng)性率為7.18%，現(xiàn)存艾滋病病毒感染者約70 萬(wàn)，艾滋病感染者中血液傳播最高為48%，而約4.2%是由于輸血或者使用血制品傳播的，因此在獻(xiàn)血者血液檢測(cè)中運(yùn)用核酸檢測(cè)技術(shù)是十分重要的。

目前，血清學(xué)檢測(cè)中所使用的試劑盒靈敏度差異性大，HBsAg和HIV 變異株、HCV 不尋常亞型導(dǎo)致漏檢。核酸檢測(cè)可以篩選出處于血清窗口期的獻(xiàn)血者，極大程度上縮短血液中各類(lèi)病毒檢測(cè)的窗口期[6]，HCV-RNA、HIV-RNA、HBV-DNA 檢測(cè)時(shí)間分別縮短約72%、41%、50%，避免試劑假陰性，鑒別無(wú)抗體反應(yīng)的慢性病毒攜帶者，NAT 檢測(cè)方法基于病毒核酸檢測(cè)比血清方法具有更高的靈敏度和特異性，能夠從檢測(cè)技術(shù)水平降低輸血后病毒的傳染風(fēng)險(xiǎn)，ELISA 與NAT 技術(shù)上在生理病理過(guò)程互補(bǔ)，ELISA 亞型或變異往往與NAT 亞型或變異不交叉，方法學(xué)不同影響因素不同，基本不交叉，核酸檢測(cè)是一項(xiàng)技術(shù)含量較高的技術(shù)，對(duì)血液安全的保障非常重要，任何一種檢測(cè)手段都不能完全消除血液病毒感染，因此重視采供血的整個(gè)環(huán)節(jié)，保障臨床用血安全，避免輸血所導(dǎo)致的疾病傳播問(wèn)題。