金瑋韻，何太雯，李 駿

(1.上海市第六人民醫(yī)院金山分院 血液腫瘤科，上海201599；2.上海市公共衛(wèi)生臨床中心)

獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS)是一種危害極大的傳染病[1]，由人類免疫缺陷病毒(HIV)引起，主要表現(xiàn)為體內(nèi)CD4+T細(xì)胞數(shù)量減少，機(jī)體免疫力降低，免疫細(xì)胞亞群異?；罨?，誘導(dǎo)器官或系統(tǒng)損傷，最終由于繼發(fā)感染或腫瘤導(dǎo)致患者死亡[2-4]。巨細(xì)胞病毒(CMV)感染是一種典型的繼發(fā)性感染[5]。CMV屬于皰疹病毒，是最常見的感染病毒，對正常人無顯著影響，但對免疫功能缺陷者會造成嚴(yán)重的后果。如器官移植后免疫抑制劑的使用或是HIV入侵宿主免疫系統(tǒng)，都會使機(jī)體免疫系統(tǒng)受到抑制，此時人體內(nèi)的CMV被再次激活，從而導(dǎo)致一系列的癥狀，嚴(yán)重者可導(dǎo)致死亡[6]。我們旨在探究AIDS合并CMV感染的男性患者中CD4+T細(xì)胞數(shù)目變化與CMV感染和HIV病毒載量是否具有相關(guān)性，以及CMV感染在AIDS中的意義。

1 對象與方法

1.1 研究對象

在我院就診或在我院治療的125例男性HIV/AIDS患者，通過ELISA檢測其CMV-IgM表達(dá)水平，核酸序列性擴(kuò)增(NASBA)方法檢測HIV病毒載量和利用流式細(xì)胞術(shù)對患者血細(xì)胞CD4+T細(xì)胞計數(shù)。根據(jù)HIV病毒載量、CMV-IgM表達(dá)水平(陰性與陽性)、CD4+T細(xì)胞數(shù)目分布的不同區(qū)間(<50、50-200、>200)進(jìn)行分組，運(yùn)用統(tǒng)計學(xué)方法分析其差異。

1.2 HIV病毒載量和CMV-IgM陽性率的測定

取病人靜脈血5 ml，1 000 g室溫離心10 min分離血細(xì)胞和血清，將血清分裝，置于-80℃冰箱保存。之后按照隨試劑盒附帶的說明書操作，測定血清中CMV-IgM的水平。ELISA試劑盒購自R&D公司，酶標(biāo)分析儀：Rayto RT-6100。測量HIV患者病毒載量采用NASBA方法，檢測試劑及病毒載量儀均購買于生物酶里埃公司，并嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。

1.3 CD4+T細(xì)胞的數(shù)量分布測定

取病人靜脈血5 ml，2倍體積PBS稀釋后密度梯度離心法離心，獲取病人的外周血單核細(xì)胞(PBMC)，流式緩沖液(2 mM EDTA、0.2%BSA的PBS溶液)洗滌2次后單染CD4細(xì)胞表面標(biāo)志物，之后洗滌離心，上機(jī)檢測CD4+T細(xì)胞的數(shù)量，并計算每微升血液中所含CD4+T細(xì)胞的個數(shù)。抗體和流式細(xì)胞儀均為BD公司產(chǎn)品。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 CMV感染與CD4+T細(xì)胞數(shù)目分布的差異分析

對125例男性HIV/AIDS患者的血清CMV-IgM進(jìn)行檢驗，經(jīng)過分析CMV-IgM陽性有69例，CMV-IgM陰性為56例，CMV-IgM陽性率為55.20%。對CMV感染患者的CD4+T細(xì)胞分布情況進(jìn)行統(tǒng)計分析，其中CMV-IgM陽性患者的CD4+T細(xì)胞計數(shù)為(90.37±126.26),CMV-IgM陰性患者的CD4+T細(xì)胞計數(shù)為(120.73±120.74)，對兩者進(jìn)行顯著差異分析，CMV-IgM陰性和陽性患者的CD4+細(xì)胞分布情況不存在顯著性差異(P=0.22)，結(jié)果如表1。

表1 CMV感染的CD4+ T細(xì)胞分布及差異顯著分析

2.2 男性HIV/AIDS患者的HIV病毒載量與CD4+T細(xì)胞數(shù)目相關(guān)性分析

從125名男性HIV/AIDS患者中隨機(jī)抽取48名患者進(jìn)行HIV病毒載量測定并采用SPSS20.0軟件分析HIV病毒載量log值與CD4+T細(xì)胞數(shù)的相關(guān)性，分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)，患者HIV病毒載量與CD4+T細(xì)胞數(shù)呈低度負(fù)相關(guān)(r=-0.288;P<0.05)，如表2所示。兩者所擬合的線性回歸方程具有統(tǒng)計學(xué)意義，回歸方程為y=-6.9156x+175.29，結(jié)果如圖1所示。

表2 HIV病毒載量與CD4+T淋巴細(xì)胞數(shù)相關(guān)分析

圖1 48例男性HIV/AIDS患者的HIV病毒載量與CD4+T細(xì)胞線性回歸分析

2.3 CD4+T細(xì)胞數(shù)目與CMV感染率的相關(guān)性分析

經(jīng)統(tǒng)計分析發(fā)現(xiàn)，當(dāng)在CD4+T細(xì)胞小于50個/μl，CMV陽性為34例，陽性率為61.82%；在CD4+T細(xì)胞數(shù)為50-200個/μl范圍時，患者CMV感染情況并無較大差異，陽性率為51.61%；CD4+T細(xì)胞數(shù)目大于200個/μl的患者，CMV感染陽性率為55.17%，經(jīng)SPSS 20進(jìn)行卡方分析，發(fā)現(xiàn)差異無生物學(xué)統(tǒng)計意義(χ2=1.202，P>0.05)。見表3。

表3 125例男性HIV/AID患者CD4+ T細(xì)胞計數(shù)與CMV-IgM陽性的比較

3 討論

HIV病毒于1981年在美國首次發(fā)現(xiàn)，后在世界范圍內(nèi)迅猛傳播，嚴(yán)重威脅人類的健康和社會的發(fā)展[7]。HIV導(dǎo)致免疫系統(tǒng)CD4+T細(xì)胞缺陷的原因大概有以下三條[8]：一，HIV病毒侵入人體后，以CD4+T細(xì)胞為宿主細(xì)胞，在CD4+T細(xì)胞內(nèi)迅猛繁殖，破壞細(xì)胞的內(nèi)穩(wěn)態(tài)，直接導(dǎo)致細(xì)胞死亡[9]；二，HIV侵染的CD4+T細(xì)胞后CD4+T細(xì)胞表達(dá)HIV抗原gp120，gp120與未感染的CD4+T細(xì)胞結(jié)合，改變了其通透性，誘導(dǎo)細(xì)胞溶解[10]；三，gp120作為CD8+T細(xì)胞的靶分子，誘導(dǎo)CD8+T細(xì)胞攻擊CD4+T細(xì)胞，導(dǎo)致CD4+T淋巴細(xì)胞的死亡[11]。本研究分析了患者中HIV病毒載量與CD4+T細(xì)胞數(shù)量(單位：個/微升)的相關(guān)性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)HIV病毒載量與CD4+T細(xì)胞數(shù)呈顯著性低度負(fù)相關(guān)，說明兩者間存在密切關(guān)系。CD4+T細(xì)胞是人體免疫反應(yīng)的中心細(xì)胞也是HIV病毒主要的靶細(xì)胞。在HIV/AID患者中，隨著病毒載量的不斷增加，人體免疫系統(tǒng)受損程度也不斷增加，其中最主要的表現(xiàn)方式為：CD4+T細(xì)胞數(shù)目的不斷減少。因此說明，CD4+T細(xì)胞計數(shù)是直觀反映HIV感染患者免疫系統(tǒng)損傷狀況最重要最直觀的指標(biāo)。HIV病毒載量與CD4+T細(xì)胞數(shù)相關(guān)性分析結(jié)果為觀察和了解HIV/AIDS病人感染程度提供了堅實(shí)的理論基礎(chǔ)。

HIV病毒導(dǎo)致人體免疫力低下，但并不是直接導(dǎo)致宿主死亡的原因。由于機(jī)體免疫力低下，免疫系統(tǒng)無法及時有效的清除侵入的細(xì)菌或是病毒，亦或是機(jī)體自身產(chǎn)生的原癌細(xì)胞，故AIDS病人晚期常因為繼發(fā)感染或是癌癥而死亡。巨細(xì)胞病毒感染即為一類典型的繼發(fā)感染[5]。巨細(xì)胞病毒屬于皰疹病毒，在入侵正常人后，機(jī)體的免疫系統(tǒng)做出應(yīng)答，CMV即進(jìn)入潛伏期。但當(dāng)宿主感染HIV病毒后，CD4+T細(xì)胞數(shù)量大大減少使得機(jī)體免疫系統(tǒng)功能受到抑制，無法對CMV進(jìn)行有效的清除和做出相應(yīng)的免疫應(yīng)答，從而繼發(fā)病毒感染[12-15]。

本文針對125名HIV/AIDS患者分析了CMV感染與CD4+T細(xì)胞計數(shù)分布的關(guān)系，由結(jié)果可知，CMV-IgM陰性的患者CD4+T細(xì)胞數(shù)目比CMV-IgM陽性組平均值更高，但不具有顯著性差異(P=0.22)，這可能與患者病例數(shù)量過少有關(guān)，也可能是因為CMV-IgM陰性患者CD4+T細(xì)胞還沒有大量的減少，患者免疫系統(tǒng)功能相對較完善，因此其體內(nèi)CMV病毒仍處于潛伏期，或是未受到CMV病毒的入侵。且通過CMV感染與CD4+T淋巴細(xì)胞數(shù)目的差異分析可知CD4+T淋巴細(xì)胞的減少和CMV的感染是無關(guān)的(P>0.05)。

本研究數(shù)據(jù)提示AIDS合并CMV感染并不能加重CD4+T細(xì)胞的數(shù)目，提示臨床診療過程中，CD4+T細(xì)胞的數(shù)目并不能判斷AIDS合并CMV感染的病情及進(jìn)展。