郭俐麟

福莫特羅的（R，R）構(gòu)型藥理活性是（S，S）構(gòu)型的1 000倍，并顯示出較少的毒性，單獨(dú)使用其支氣管舒張作用是外消旋體活性的兩倍。因此，單獨(dú)使用（R，R）-福莫特羅即阿福特羅不僅可以增強(qiáng)作用活性，降低使用劑量，而且還可以減少毒副作用的發(fā)生。（R，R）-酒石酸福模特羅為高效的用于慢性阻塞性肺病的藥物，能顯著改善哮喘病人的發(fā)病［1-5］。本實(shí)驗(yàn)室在（R，R）-酒石酸福莫特羅原料藥的生產(chǎn)過程中使用了甲醇、乙醇、異丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氫呋喃、甲苯等有機(jī)溶劑，為了有效的控制產(chǎn)品質(zhì)量和保證用藥安全，有必要測(cè)定藥物中有機(jī)溶劑殘留是否符合藥典要求，部分文獻(xiàn)報(bào)道了富馬酸福莫特羅有機(jī)溶劑殘留［6-7］，而有關(guān)酒石酸福莫特羅原料藥的有機(jī)溶劑殘留卻未見報(bào)道。本研究于2017年1月至2018年5月采用頂空毛細(xì)管氣相色譜法［8-21］檢查（R，R）-酒石酸福莫特羅中7 種有機(jī)溶劑殘留量，方法準(zhǔn)確可靠。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑 安捷倫7890A氣相色譜儀，安捷倫G1888 頂空進(jìn)樣器。甲醇、乙醇、異丙醇為色譜級(jí)，二氯甲烷、乙酸乙酯、四氫呋喃、甲苯、N，N-二甲基甲酰胺（DMF）為分析純。（R，R）-酒石酸福莫特羅樣品為自制（批號(hào)20101118、20101119、20101120）。

1.2 色譜條件 HP-5 毛細(xì)管柱（30 m×0.32 mm×0.25 μm）；載氣為氮?dú)猓魉?.0 mL/min；進(jìn)樣口溫度為200 ℃，分流比為1∶1；程序升溫，40 ℃下保持8 min，然后以8 ℃/min 的速率升到120 ℃保持5 min。檢測(cè)器溫度為250 ℃，氫氣流速30 mL/min，空氣流速300 mL/min，尾吹25 mL/min；進(jìn)樣體積1 mL。安捷倫G1888頂空進(jìn)樣器，頂空瓶加熱溫度為100 ℃，定量環(huán)110 ℃，傳輸線120 ℃，頂空瓶加熱時(shí)間30 min，加壓時(shí)間0.2 min，定量環(huán)填充時(shí)間0.2 min，定量環(huán)平衡時(shí)間0.05 min，進(jìn)樣時(shí)間1.0 min，頂空瓶體積20 mL。

1.3 對(duì)照品溶液的配制 精密稱取甲醇、乙醇、異丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氫呋喃、甲苯適量置50 mL量瓶中，加DMF稀釋至刻度，制成每1毫升中含甲醇、乙醇、異丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氫呋喃、甲苯分別為120、200、200、26、200、30、36 μg 的對(duì)照品溶液。

1.4 供試品溶液的配制 精密稱取供試品（R，R）-酒石酸福莫特羅200 mg，置20 mL 頂空瓶中，加入DMF 5.0 mL，密封，使之溶解即得供試品溶液。

2 結(jié)果

2.1 系統(tǒng)專屬性試驗(yàn) 分別取甲醇、乙醇、異丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氫呋喃、甲苯及DMF 適量，在信噪比≥3條件下，取樣5 mL，頂空進(jìn)樣分析，結(jié)果見圖1。出峰順序甲醇（2.636）、乙醇（2.756）、異丙醇（2.877）、二氯甲烷（3.040）、乙酸乙酯（3.621）、四氫呋喃（3.804）、甲苯（6.942）、DMF（8.207）。7 種有機(jī)溶劑之間的分離度均大于2，理論塔板數(shù)均大于10 000，對(duì)稱性好。

2.2 線性與范圍 分別吸取對(duì)照品儲(chǔ)備液0.5 mL、1.0 mL、2.0 mL、2.5 mL、3.0 mL、4.0 mL、5.0 mL 于25 mL 量瓶中，用DMF 稀釋至刻度，配成7 個(gè)線性濃度（1、2、3、4、5、6、7）。分別吸取各線性下溶液5.0 mL于20 mL 的頂空瓶中，密封，分別進(jìn)樣分析，測(cè)定結(jié)果見表1。結(jié)果表明乙醇、異丙醇、乙酸乙酯在40.00～400.00 μg/mL 范圍內(nèi)；甲醇在60.00～240.00 μg/mL 范圍內(nèi)；二氯甲烷在4.80～48.00 μg/mL 范圍內(nèi)；四氫呋喃在5.76～57.60 μg/mL 范圍內(nèi)；甲苯在7.12～71.20 μg/mL范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。

表1 線性關(guān)系測(cè)定結(jié)果

2.3 精密度試驗(yàn) 按“1.3”項(xiàng)下配制對(duì)照品溶液，分別吸取5 mL于20 mL頂空瓶中，密封。依次進(jìn)樣分析，測(cè)定結(jié)果見表2。結(jié)果表明甲醇、乙醇、異丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氫呋喃、甲苯6次進(jìn)樣的峰面積相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）分別為1.55%、1.76%、2.05%、3.66%、1.85%、1.98%、1.57%。數(shù)據(jù)顯示精密度較好。

表2 精密度試驗(yàn)結(jié)果

2.4 回收率試驗(yàn) 精密稱取供試品（R，R）-酒石酸福莫特羅2份，每份200 mg，分別置于20 mL頂空瓶中，加入DMF 5.0 mL，密封，使之溶解，作為空白。另外精密稱取供試品（R，R）-酒石酸福莫特羅9 份，每份200 mg，每3份一組，每組分別加線性3、4、5溶液5.0 mL，密封，使之溶解。依次測(cè)定，測(cè)定結(jié)果扣除空白后，計(jì)算回收率。結(jié)果見表3。

表3 回收率測(cè)定結(jié)果/%

2.5 定量限和檢測(cè)限的測(cè)定 分別單獨(dú)配置7 種待測(cè)有機(jī)溶劑溶液，用DMF適當(dāng)稀釋直到待測(cè)有機(jī)溶劑的色譜峰峰高是基線噪聲的10 倍，作為定量限，將達(dá)定量限的溶液進(jìn)一步稀釋到待測(cè)有機(jī)溶劑的色譜峰峰高是基線噪聲的3 倍，作為檢測(cè)限。結(jié)果顯示，當(dāng)信噪比約為10時(shí)，7種有機(jī)溶液濃度分別為：甲醇55.73 μg/mL，乙醇33.98 μg/mL，異丙醇20.50 μg/mL，二氯甲烷2.41 μg/mL，乙酸乙酯35.59 μg/mL，四氫呋喃2.92 μg/mL，甲苯6.58 μg/mL。當(dāng)信噪比約為3 時(shí)，7 種有機(jī)溶液濃度分別為：甲醇15.22 μg/mL，乙醇10.14 μg/mL，異丙醇7.29 μg/mL，二氯甲烷0.72 μg/mL，乙酸乙酯10.64 μg/mL，四氫呋喃0.88 μg/mL，甲苯1.98 μg/mL。

2.6 穩(wěn)定性的考察 精密稱取供試品（R，R）-酒石酸福莫特羅200 mg，置20 mL 頂空瓶中，加入DMF 5.0 mL，密封，溶解，于室溫下分別放置0、1、2、4、6 h，照色譜條件進(jìn)行測(cè)定，均未測(cè)出7 種有機(jī)溶劑殘留。結(jié)果表明，本方法用于測(cè)定（R，R）-酒石酸福莫特羅中殘留有機(jī)溶液，數(shù)據(jù)可靠。

2.7 耐用性的考察 考查載氣流速（0.8 mL/min、1.0 mL/min、1.2 mL/min）、進(jìn)樣口溫度（195 ℃、200 ℃、205 ℃）、檢測(cè)器溫度（245 ℃、250 ℃、255 ℃），在不同條件下測(cè)得RSD 分別為1.3%、1.9%、1.0%，均未大于2.0%，該方法耐用性良好。

2.8 （R，R）-酒石酸福莫特羅有機(jī)溶劑殘留測(cè)定按照1.3和1.4的方法配置精制對(duì)照品及3批樣品，照色譜法進(jìn)行測(cè)定，精制對(duì)照品與3批樣品均未檢出7種殘留有機(jī)溶劑，符合人用藥物注冊(cè)技術(shù)要求國(guó)際協(xié)調(diào)會(huì)（ICH）的有機(jī)溶劑殘留量研究指導(dǎo)原則標(biāo)準(zhǔn)。

3 討論

3.1 柱溫的選擇 本實(shí)驗(yàn)中7 種待測(cè)溶劑在柱溫達(dá)到40 ℃時(shí)能達(dá)到基線分離，但因DMF 的沸點(diǎn)比較高，保留時(shí)間比其他溶劑長(zhǎng)。故在本實(shí)驗(yàn)中采取了程序升溫的方式加快DMF被載氣帶出，從而使實(shí)驗(yàn)時(shí)間縮短。

3.2 溶劑的選擇 本實(shí)驗(yàn)嘗試水作為溶劑，但峰形存在拖尾現(xiàn)象，后采用了DMF，峰形明顯得到改善，分離度良好。

3.3 色譜柱的選擇 在前期實(shí)驗(yàn)中，比較了不同極性的色譜柱，如HP-5、DM-624，四氫呋喃與乙酸乙酯在DM-624毛細(xì)管柱上未達(dá)到基線分離，最終選擇了能有效分離并測(cè)定7種有機(jī)溶劑的HP-5色譜柱。

本研究建立了頂空毛細(xì)管氣相色譜法測(cè)定（R，R）-酒石酸福莫特羅中有機(jī)溶劑殘留量的方法，并對(duì)三批樣品進(jìn)行了有機(jī)溶劑殘留的測(cè)定。該方法靈敏、準(zhǔn)確、快捷，經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證，該方法的專屬性、檢測(cè)限、線性與范圍、精密度、回收率等均滿足藥物質(zhì)量控制的方法學(xué)要求，所建立的方法能夠?qū)Γ≧，R）-酒石酸福莫特羅中有機(jī)溶劑殘留量進(jìn)行有效的測(cè)定?？蔀樵摦a(chǎn)品后續(xù)的研發(fā)等工作提供很好的參考，可作為質(zhì)量控制的方法，為其他類藥物的有機(jī)溶劑殘留的檢測(cè)工作提供參考，具有一定實(shí)用性。