張 靜 牛 喆 范衛(wèi)芳 高鵬飛 吳建慧

(東北林業(yè)大學(xué)園林學(xué)院，哈爾濱 150040)

東北地區(qū)地理環(huán)境特殊，能夠在東北露地越冬的植物種類較少。狹葉黃芩(Scutellariaregeliana)是唇形科(Labiatae)黃芩屬(Scutellaria)多年生草本植物，自然分布在東北地區(qū)，是一種優(yōu)良的野生觀賞植物，可作為地被植物在園林中應(yīng)用。近幾年這類野生植物逐漸進(jìn)入城市園林應(yīng)用，是園林綠化的優(yōu)良材料之一，具有很高的觀賞價(jià)值。黃芩屬的植物生長(zhǎng)緩慢，在自然生長(zhǎng)條件下遠(yuǎn)不能滿足市場(chǎng)的需求。其雖以種子繁殖為主，但在干旱及其他不良環(huán)境下，出苗率難以控制在較高的水平；扦插繁殖易受扦插季節(jié)和插條部位等因素的影響；而分根繁殖則繁殖系數(shù)低；不利于大面積的應(yīng)用[1]。

近年來(lái)，關(guān)于黃芩屬植物組織培養(yǎng)技術(shù)的報(bào)道已有一些。日本學(xué)者最早在LS培養(yǎng)基上接種黃芩(Scutellariabaicalensis)節(jié)段，并得到了淡褐色的愈傷組織[2]。國(guó)內(nèi)學(xué)者在進(jìn)行誘導(dǎo)黃芩愈傷組織試驗(yàn)研究時(shí)，成功誘導(dǎo)出黃芩愈傷組織[3]。以黃芩的子葉、真葉和下胚軸為外植體，吳曉玲等[4]對(duì)黃芩組織培養(yǎng)誘導(dǎo)條件進(jìn)行試驗(yàn)研究，并確定了褐化率為0，誘導(dǎo)率高達(dá)100%的培養(yǎng)基。李富雄等[5]利用組培技術(shù)進(jìn)行黃芩同源四倍體誘導(dǎo)，為將來(lái)選育有用成分含量高的優(yōu)良品種打下基礎(chǔ)。以帶腋芽的粘毛黃芩(Scutellariaviscidula)幼莖為外植體，王淑芳等[6]通過對(duì)植物激素配比及使用濃度的比較選擇，建立出一套高效的粘毛黃芩的組培快繁體系。薛欣等[7]通過試驗(yàn)進(jìn)行黃芩無(wú)菌材料的培養(yǎng)并且優(yōu)化黃芩快繁技術(shù)，確定黃芩繼代和快繁的最佳方法是采用單節(jié)培養(yǎng)。韓淑蘭等[8]研究發(fā)現(xiàn)結(jié)果與其大致相同。近年來(lái)狹葉黃芩因其花色美麗，具有較高的觀賞價(jià)值在園林中逐漸開始應(yīng)用，但狹葉黃芩以種子繁殖的方法耗時(shí)較長(zhǎng)，短時(shí)間內(nèi)無(wú)法滿足應(yīng)用，同時(shí)也未見關(guān)于狹葉黃芩組培方向的報(bào)道，所以本研究以黃芩屬中的狹葉黃芩莖段作為外植體，篩選出適合各階段的培養(yǎng)基配方，建立其組培快繁體系。為有效實(shí)現(xiàn)黃芩屬資源的開發(fā)利用和保護(hù)提供一定能夠的理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)材料取自黑龍江省森林植物園的野生狹葉黃芩，2017年9月栽植到100 mm×90 mm的花盆中，將其放在植物培養(yǎng)室中進(jìn)行緩苗，給予正常的水分和光照管理，待植株恢復(fù)生長(zhǎng)后，選取其當(dāng)年生帶節(jié)莖段作為供試材料進(jìn)行試驗(yàn)。所用培養(yǎng)基每1 L均添加蔗糖25 g、瓊脂7.5～7.8 g、pH值調(diào)為5.8～6.0。培養(yǎng)室溫度為(25±1)℃，空氣相對(duì)濕度保持在50%～60%，光照強(qiáng)度為2 000 lx，光周期為16 h·d-1。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 外植體的處理與消毒

于晴朗的上午剪取健壯且無(wú)病害的當(dāng)年生枝條的嫩莖，將莖段表面清洗干凈，然后將莖段剪成1～2 cm的長(zhǎng)度，使用洗潔精對(duì)莖段進(jìn)行清洗，清洗3 min后流水下沖洗30 min。于超凈工作臺(tái)中無(wú)菌水清洗3遍，75%酒精清洗15 s后再用無(wú)菌水沖洗3～5遍，然后在0.1%的HgCl2或者1% NaClO溶液中浸泡3、5、8、11 min進(jìn)行消毒，最后使用無(wú)菌水沖洗5遍。然后將莖段接種于MS培養(yǎng)基上。每處理接種30個(gè)莖段，每瓶接種一個(gè)，3次重復(fù)。20 d后統(tǒng)計(jì)不同消毒時(shí)間的污染率、褐化率和存活率。

1.2.2 莖段腋芽的誘導(dǎo)

1.2.3 莖段愈傷組織的誘導(dǎo)

將消毒處理后的狹葉黃芩的莖段接種于愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，添加6-BA(0.5、1、2 mg·L-1)，2-4D(0.5、1 mg·L-1)、NAA(0.05、0.1、0.2、0.5 mg·L-1)和TDZ(0.05、0.1 mg·L-1)的組合。以期篩選出莖段最適誘導(dǎo)愈傷的激素配比組合。每處理接種30個(gè)外植體，3次重復(fù)。30 d后統(tǒng)計(jì)愈傷組織誘導(dǎo)率并記錄生長(zhǎng)狀況。

1.2.4 愈傷組織不定芽的分化

以MS為基本培養(yǎng)基作為狹葉黃芩愈傷組織分化培養(yǎng)基，添加6-BA(0.5、1、2 mg·L-1)和NAA(0.1、0.2、0.5、1 mg·L-1)誘導(dǎo)愈傷組織塊進(jìn)行分化。每種處理30個(gè)愈傷組織塊，3次重復(fù)。30 d后觀察統(tǒng)計(jì)不定芽分化率及平均不定芽數(shù)。

1.2.5 腋芽的增殖培養(yǎng)

腋芽增殖培養(yǎng)基和上述9種誘導(dǎo)腋芽的培養(yǎng)基組合相同。后期愈傷組織分化而來(lái)的不定芽增殖培養(yǎng)也使用此培養(yǎng)基。比較兩種激素組合對(duì)芽增殖的差別影響。每種處理30個(gè)外植體，3次重復(fù)。30 d后統(tǒng)計(jì)增殖芽數(shù)，計(jì)算增殖倍數(shù)。

1.2.6 腋芽生根的誘導(dǎo)

根據(jù)系統(tǒng)需求,濾波器性能指標(biāo)如表1所示,可以看到系統(tǒng)對(duì)濾波器的遠(yuǎn)端抑制(≥25 dB@5.95～10 GHz)要求較高。

將生長(zhǎng)健壯，高度為2～3 cm的具有2對(duì)新葉的不定芽接種到生根培養(yǎng)基上，以1/2MS為基本培養(yǎng)基，添加不同濃度的NAA(0.1、0.2、0.3 mg·L-1)或IBA(0.1、0.2、0.3 mg·L-1)組合，以期取得最適宜的生根效果。每個(gè)處理30瓶，每瓶1株，重復(fù)3次，定期觀察狹葉黃芩生根情況并記錄生長(zhǎng)狀況。接種20 d后統(tǒng)計(jì)生根率、平均生根數(shù)、平均根長(zhǎng)。

1.2.7 組培苗的煉苗與移栽

為提高組培苗的成活率并使其能在自然環(huán)境下正常生長(zhǎng)，需在移栽前進(jìn)行煉苗處理。將高度為4～5 cm并且根長(zhǎng)超過2 cm的試管苗打開瓶蓋，倒入清水。將開蓋后的組培苗在組培架上1 d，再移到室溫條件下放2 d，取出后用蒸餾水小心沖洗根上殘留的培養(yǎng)基。然后把沖洗干凈的生根組培苗移栽到基質(zhì)中，放置在背陰處3d后轉(zhuǎn)入植物培養(yǎng)室，在此期間給予正常的水分和光照管理。30 d后統(tǒng)計(jì)移栽成活率及幼苗生長(zhǎng)情況。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析方法

采用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行方差分析和顯著性分析，采用Excel 2007計(jì)算測(cè)定數(shù)據(jù)和圖表制作，數(shù)據(jù)均為3次重復(fù)試驗(yàn)的平均值。

2 結(jié)果與分析

2.1 莖段不同消毒方法的篩選

由表1可知，消毒時(shí)間分別為3、5、8、11 min時(shí)，使用兩種消毒劑處理的褐化率均為0，即無(wú)論采用哪種消毒方法，外植體都沒有褐化現(xiàn)象。1% NaClO在消毒處理時(shí)間為5 min時(shí)效果最好，污染率最低為13.05%，存活率最高為86.95%，與1% NaClO處理的其他時(shí)間差異顯著(P<0.05)。0.1%的HgCl2消毒處理最佳時(shí)間也是5 min，其污染率最低為8.25%，存活率為91.75%，與0.1%的HgCl2消毒處理的3、11 min差異顯著。狹葉黃芩莖段消毒最好的方法是0.1%的HgCl2消毒5 min。

2.2 莖段腋芽的誘導(dǎo)

將狹葉黃芩莖段接種到腋芽誘導(dǎo)的培養(yǎng)基上，一周后腋芽開始萌發(fā)。由表2可知，當(dāng)6-BA濃度為0.5 mg·L-1時(shí)，腋芽誘導(dǎo)率和平均腋芽數(shù)隨著NAA濃度的升高而逐漸降低，但變化趨勢(shì)并不顯著，說(shuō)明此時(shí)NAA濃度的變化對(duì)于腋芽的生長(zhǎng)變化不大。當(dāng)NAA濃度分別為1、2 mg·L-1時(shí)，隨著6-BA濃度的升高，腋芽誘導(dǎo)率和平均腋芽數(shù)也隨之升高。在所有處理組中，8號(hào)處理組腋芽誘導(dǎo)率最高為79.12%，平均腋芽數(shù)也最高為1.49個(gè)，但此時(shí)外植體生長(zhǎng)較慢。當(dāng)6-BA濃度較低(0.5 mg·L-1)或較高(2 mg·L-1)時(shí)，植物生長(zhǎng)狀況不良，表現(xiàn)為葉片泛黃，生長(zhǎng)變慢。而在6-BA濃度為1 mg·L-1時(shí)，植物生長(zhǎng)良好(圖1A)。確定最適宜狹葉黃芩莖段腋芽萌發(fā)的培養(yǎng)基為MS+1 mg·L-16-BA+1 mg·L-1NAA。

表1 不同消毒方法對(duì)狹葉黃芩莖段消毒效果的影響

Table 1 Effect of different disinfection methods on disinfection effect forS.regelianastem segments

消毒劑Disinfectant消毒時(shí)間Disinfection time(min)污染率Pollution rate(%)褐化率Browning rate(%)存活率Survival rate(%)HgCl2319.35±5.59b0±0a80.65±5.59b58.25±1.89c0±0a91.75±1.89a89.68±0.31c0±0a90.32±0.31a1121.42±3.09ab0±0a78.58±3.09bcNaClO325.81±3.23a0±0a74.19±3.23c513.05±1.39c0±0a86.95±1.39a822.58±3.23ab0±0a77.42±3.23bc1118.44±3.02b0±0a81.56±3.02b

注：表中每列的值是平均值±標(biāo)準(zhǔn)差；同列數(shù)據(jù)后不同小寫字母表示在0.05水平上差異顯著(P<0.05)；下表同。

Note:Values represent as Mean±SE;After the same column data, different lower-case letters showed significant difference at 0.05 level(P<0.05);The same as below.

表2 不同激素配比對(duì)狹葉黃芩莖段誘導(dǎo)腋芽的影響

表3 不同激素配比對(duì)狹葉黃芩愈傷組織誘導(dǎo)率的影響

2.3 莖段愈傷組織的誘導(dǎo)

由表3的數(shù)據(jù)可知，在只含有6-BA和2-4D的培養(yǎng)基中，4號(hào)處理組的誘導(dǎo)率最高為91.33%，與2、3、6號(hào)均有顯著差異(P<0.05)，此時(shí)的愈傷綠色、疏松、芽點(diǎn)較多(圖1B)。在添加6-BA、2-4D和NAA的各處理組中，愈傷的誘導(dǎo)率均在80%以上，但此時(shí)的愈傷生長(zhǎng)表現(xiàn)為白色致密，不利于愈傷的后期分化。而在添加TDZ和NAA的培養(yǎng)基上，在TDZ濃度不變時(shí)，愈傷誘導(dǎo)率隨著NAA濃度的升高而逐漸降低，且各處理組的愈傷生長(zhǎng)狀態(tài)不良，甚至有褐化和水樣化的現(xiàn)象發(fā)生。確定狹葉黃芩誘導(dǎo)愈傷的最佳培養(yǎng)基為MS+1 mg·L-16-BA+1 mg·L-12-4D。

2.4 莖段愈傷組織的分化

將愈傷組織接種到分化培養(yǎng)基上，由表4可以看出，在6-BA濃度為0.5 mg·L-1，分化率最高的是3號(hào)處理組，其分化率為20.17%，與其他各組差異顯著(P<0.05)。在6-BA濃度為1 mg·L-1，分化率最高的是7號(hào)處理組，其分化率為44.71%，與其他各組差異顯著(圖1C)。在NAA濃度為1 mg·L-1，愈傷組織的分化率隨著6-BA濃度的升高而增加，且與其他各組差異顯著。其中褐化率最低的是5號(hào)處理組為11.6%，最高的是10號(hào)處理組為28.56%，平均不定芽數(shù)最多的是6.33個(gè)，為7號(hào)處理組。確定愈傷組織分化的最佳培養(yǎng)基為MS+1 mg·L-16-BA+0.5 mg·L-1NAA。

2.5 腋芽的增殖培養(yǎng)

將狹葉黃芩莖段誘導(dǎo)而來(lái)的腋芽接種到增殖培養(yǎng)基上，10天后叢生芽開始萌發(fā)。由表5可知，不同處理組間增殖倍數(shù)差異顯著(P<0.05)。1號(hào)處理組的增殖倍數(shù)最低為1.3，4號(hào)處理組的增殖倍數(shù)最高為5.859(圖1D)，當(dāng)6-BA濃度分別為1、2 mg·L-1時(shí)，芽增殖倍數(shù)隨著NAA濃度的升高而降低且差異顯著。當(dāng)6-BA濃度較高(2 mg·L-1)時(shí)，新芽雖然多但葉片變黃。確定芽增殖的最佳培養(yǎng)基為MS+1 mg·L-16-BA+0.5 mg·L-1NAA。

2.6 腋芽生根的誘導(dǎo)

不定芽的高度達(dá)到1～2 cm時(shí)將外植體轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中。以1/2MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，在培養(yǎng)7天后逐漸有新根產(chǎn)生。由表6可以看出，在只添加IBA的處理組中，隨著IBA濃度的增加，其生根率整體呈下降趨勢(shì)，其中IBA濃度為0.2 mg·L-1時(shí)生根率最高為74.07%，且與其他各組差異顯著(0.1 mg·L-1除外)(圖1E,F)。在只添加NAA的各處理組中，9號(hào)處理組生根率最高為45.98%，且與其他各處理組差異顯著(P<0.05)。當(dāng)IBA或NAA濃度高于0.3 mg·L-1時(shí)對(duì)生根率、平均生根數(shù)、平均根長(zhǎng)產(chǎn)生了一定的不良影響，表現(xiàn)為抑制植物根的生長(zhǎng)。在所有的處理組中，8號(hào)處理組的平均生根數(shù)最高為17.69個(gè)，4號(hào)處理組的平均根長(zhǎng)最長(zhǎng)為3.61 cm。確定莖段生根的最佳培養(yǎng)基為1/2MS+0.2 mg·L-1IBA。

表4 不同激素配比對(duì)狹葉黃芩愈傷組織分化影響

表5 不同激素配比對(duì)狹葉黃芩芽增殖的影響

表6 不同激素配比對(duì)狹葉黃芩不定芽生根的影響

圖1 狹葉黃芩帶芽莖段再生體系的各培養(yǎng)階段 A.莖段誘導(dǎo)腋芽；B.莖段誘導(dǎo)愈傷組織；C.愈傷組織分化不定芽；D.帶芽莖段增殖；E.生根3 d；F.生根15 d；G.組培苗移栽7 d；H.組培苗移栽30 dFig.1 Different culture phases of budded stem regeneration system of S.regeliana A. Stem segment induces axillary buds; B. Callus induced by stem segments; C. Callus differentiation adventitious bud; D. Proliferation of shoot segments with buds; E. Rooting for 3 d; F. Rooting for 15 d; G. Tissue culture seedlings were transplanted for 7 d; H. Tissue culture seedlings were transplanted for 30 d

2.7 煉苗和移栽

蛭石、珍珠巖，園土的比例不同，對(duì)狹葉黃芩移栽成活率有顯著的影響。由表7可知，栽植到三種基質(zhì)下，植物的生長(zhǎng)狀況均為良好，但移栽成活率差異顯著(P<0.05)，其中3號(hào)即蛭石∶珍珠巖∶園土=1∶1∶3時(shí)，移栽成活率最高為79.24%(圖1G,H)。

表7 不同移栽基質(zhì)對(duì)狹葉黃芩移栽成活率的影響

Table 7 Effect of different medium on bud induction forS.regeliana

處理號(hào)Processing number移栽成活率Survival rate of transplantation(%)生長(zhǎng)狀況Growth status174.31±3.76b植株健壯,生長(zhǎng)良好The plants are strong and grow well260.33±4.51c植株健壯,生長(zhǎng)良好The plants are strong and grow well379.24±6.17a植株健壯,生長(zhǎng)良好The plants are strong and grow well

3 討論

外植體的表面滅菌是組培中防治污染至關(guān)重要的一步[9]。對(duì)消毒劑要求易沖洗、易分解，清除微生物又不影響植物材料生長(zhǎng)。不同植物不同部位的外植體對(duì)消毒劑的敏感程度不同[10]。因此消毒劑的種類、濃度和時(shí)間的選擇至關(guān)重要[11]。過長(zhǎng)過短的消毒時(shí)間都不利于植物生長(zhǎng)，恰當(dāng)?shù)南緯r(shí)間能提高存活率。在植物組織培養(yǎng)過程中，常用的消毒劑有NaClO，H2O2、HgCl2、AgNO3等。本研究選擇1% NaClO和0.1% HgCl2作為消毒劑，發(fā)現(xiàn)狹葉黃芩莖段最適宜的消毒方法為0.1% HgCl2消毒5 min。

組織培養(yǎng)中，外植體直接誘導(dǎo)芽是較快捷的方式。本研究表明，狹葉黃芩莖段在2種激素組合上都誘導(dǎo)出腋芽，但平均腋芽數(shù)、腋芽誘導(dǎo)率以及芽生長(zhǎng)狀況均有差異。并且同時(shí)使用6-BA與NAA誘導(dǎo)腋芽的影響效果顯著，誘導(dǎo)率隨著6-BA濃度的升高而升高，隨著NAA濃度的升高呈先升高后下降趨勢(shì)。植物激素是培養(yǎng)基中的關(guān)鍵物質(zhì)，用量雖少但對(duì)愈傷組織的誘導(dǎo)和分化起著重要的調(diào)節(jié)作用[12～13]。在一定范圍內(nèi)，植物激素濃度升高，對(duì)植物的促進(jìn)作用增強(qiáng)，超過這一范圍濃度再升高，就會(huì)抑制植物生長(zhǎng)[14]。同時(shí)多種激素協(xié)同作用效果要遠(yuǎn)大于一種激素單獨(dú)使用效果[15]。

其作用效果與外植體及愈傷組織本身內(nèi)源激素的種類和濃度有重要關(guān)系[16]。有研究發(fā)現(xiàn)2-4D，KT，NAA等植物激素配比使用有利于外植體愈傷組織的形成，且NAA濃度越高，形成的愈傷組織質(zhì)地越好[17]。但在本試驗(yàn)中，在添加6-BA、2-4D和NAA的組合中，狹葉黃芩莖段誘導(dǎo)而來(lái)的愈傷組織質(zhì)地堅(jiān)硬，不利于后期分化培養(yǎng)，這與前人的研究結(jié)果不一致。在添加TDZ和NAA的組合中，愈傷組織有褐化和水樣化的趨勢(shì)，而張璐[18]等對(duì)宜昌百合的研究中發(fā)現(xiàn)，誘導(dǎo)愈傷組織的3種激素中，作用關(guān)系最大的是TDZ，其次是2-4D，最后是NAA。在含有6-BA和2-4D的培養(yǎng)基中，愈傷生長(zhǎng)良好，愈傷組織的誘導(dǎo)率也最高為91.33%，而賀美忠對(duì)黃芩的研究中發(fā)現(xiàn)，當(dāng)使用1 mg·L-1的6-BA和0.5 mg·L-1NAA時(shí)愈傷組織的誘導(dǎo)率達(dá)到最大值[1]。愈傷組織分化階段，在NAA濃度為1 mg·L-1，愈傷組織的分化率隨著6-BA濃度的升高而增加。所有處理組中褐化率最低的為11.6%，平均不定芽數(shù)最多的是6.33個(gè)。在6-BA濃度為1 mg·L-1，NAA濃度為0.5 mg·L-1時(shí)分化率最高為44.71%。建立狹葉黃芩組織培養(yǎng)快繁體系，實(shí)現(xiàn)狹葉黃芩的資源保護(hù)與開發(fā)利用，仍需要進(jìn)一步篩選基本培養(yǎng)基、激素、添加物等因素。

研究發(fā)現(xiàn)不定芽增殖培養(yǎng)時(shí)將6-BA和NAA配合使用，芽苗增殖系數(shù)大且生長(zhǎng)勢(shì)強(qiáng)[19]。本試驗(yàn)中激素組合MS+1 mg·L-16-BA+0.5 mg·L-1NAA，不定芽增殖系數(shù)是所有配比中最大的，這說(shuō)明適宜的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑濃度可以產(chǎn)生較高的增殖系數(shù)。高山林[3]等人在黃芩組培體系優(yōu)化的研究中發(fā)現(xiàn)，使用PP333和6-BA時(shí)黃芩愈傷組織分化出的叢生芽最多，分化率為100%，這一研究結(jié)果可為后續(xù)研究?jī)?yōu)化狹葉黃芩的組培體系提供參考。組培苗生根能力的強(qiáng)弱和根系的生長(zhǎng)狀況直接決定了植株移栽的成活率。組培苗具有強(qiáng)大的根系與生根能力，才能更好的吸收利用土壤中的有效養(yǎng)分[20～21]。有研究認(rèn)為生長(zhǎng)素NAA和IBA對(duì)無(wú)菌苗生根均有促進(jìn)作用[22]，生長(zhǎng)素IBA常用于組培苗不定根的誘導(dǎo)[20,23]，在狹葉黃芩試管苗生根試驗(yàn)中，本研究在1/2MS基本培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上添加不同濃度的IBA和NAA，試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)添加IBA的激素組合整體比添加NAA的生根效果較好，IBA濃度為0.2 mg·L-1時(shí)，生根效果最佳，隨著IBA濃度的升高，生根率下降，說(shuō)明濃度較高的IBA對(duì)根的誘導(dǎo)有抑制作用。王淑芳[6]等人在研究粘毛黃芩的生根培養(yǎng)基時(shí)發(fā)現(xiàn)，IBA濃度為0.5 mg·L-1時(shí)生根效果最好，比狹葉黃芩所需要的濃度要高，這就說(shuō)明在相同濃度IBA下，狹葉黃芩比粘毛黃芩生根較容易。植物在移栽時(shí)根長(zhǎng)應(yīng)適宜，一般為2 cm，根長(zhǎng)過長(zhǎng)影響煉苗，過短影響水分吸收，不利于成活[24]。本試驗(yàn)中狹葉黃芩經(jīng)煉苗后在三種基質(zhì)中生長(zhǎng)均健壯，但移栽成活率差異顯著，其中蛭石∶珍珠巖∶園土=1∶1∶3時(shí)，移栽成活率最高為79.24%，并且此時(shí)園土占比最多，最為經(jīng)濟(jì)。