康朋朋，劉洪博，張紅，白潔

哈勵遜國際和平醫(yī)院 1病理科，2檢驗科，3耳鼻喉科(河北衡水 053000)

子宮內(nèi)膜癌是西方國家發(fā)病率最高的婦科惡性腫瘤，主要發(fā)生于絕經(jīng)后婦女，其發(fā)病與肥胖、糖尿病、高血壓、生育史、口服避孕藥和激素的使用密切相關(guān)。近年來子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病率在國內(nèi)也逐步上升，且趨于年輕化[1]。子宮內(nèi)膜發(fā)生的疾病主要有子宮內(nèi)膜單純性增生、復(fù)雜性增生和子宮內(nèi)膜癌。子宮內(nèi)膜癌又分為很多種類，包括子宮內(nèi)膜樣腺癌、漿液性癌、透明細胞癌等，其中以子宮內(nèi)膜樣腺癌最為常見，多為雌激素依賴性，且具有極強的侵襲性[2]。對子宮內(nèi)膜樣腺癌的早期診斷是提高患者生存率的關(guān)鍵，晚期子宮內(nèi)膜樣腺癌患者的5年生存率不到20%，而早期診斷的患者5年生存率高達90%。由于早期沒有明顯癥狀，當出現(xiàn)出血、腹痛等癥狀時，病情多已晚期且存在腫瘤的浸潤、轉(zhuǎn)移，難以進行根治性腫瘤切除[3]。刮宮是子宮內(nèi)膜樣腺癌診斷評估的金標準，由于部分腫瘤形態(tài)不典型且多樣化，通過免疫組織化學(xué)方法檢測一些相關(guān)蛋白標志物的表達，成為輔助診斷子宮內(nèi)膜樣腺癌的必要手段。因此，近年來對子宮內(nèi)膜樣腺癌的研究已成為熱點，從蛋白及分子水平上尋求相關(guān)標志物，可以對子宮內(nèi)膜樣腺癌的診斷及預(yù)后起到重要的指導(dǎo)作用[4]。研究表明甲狀腺激素受體β1(TRβ1)在多種腫瘤組織中表達均降低甚至完全缺失[5-7]，推測TRβ1可能是一種抑癌基因，可以抑制腫瘤的發(fā)生[8]，但TRβ1在子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中的表達至今鮮見報道，本研究擬對TRβ1在子宮內(nèi)膜樣腺癌及子宮內(nèi)膜單純性增生組織中的表達情況進行研究，并分析其與子宮內(nèi)膜樣腺癌患者臨床病理參數(shù)的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2015年12月至2016年12月我院門診刮宮及手術(shù)切除子宮的標本中病理診斷為子宮內(nèi)膜樣腺癌48例和子宮內(nèi)膜單純性增生27例。子宮內(nèi)膜樣腺癌患者中，年齡≤50歲者30例，年齡>50歲者18例；腫瘤組織≤5 cm者32例，>5 cm者16例；浸潤深度≤1/2肌層者29例，>1/2肌層者19例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者15例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者33例；臨床分期Ⅰ、Ⅱ期者36例，Ⅲ、Ⅳ期者12例；無脈管侵犯者31例，有脈管侵犯者17例。所選取標本的患者之前均未接受放療、化療和激素治療，并排除合并其他重要疾病的患者。

1.2 免疫組織化學(xué)檢測 所有標本采用10%甲醛固定，石蠟包埋，4 μm厚連續(xù)切片，65℃烤片30 min，二甲苯脫蠟，梯度酒精脫水，PBS洗滌3次，3%過氧化氫高壓修復(fù)2 min，PBS洗滌3次，并滴加一抗TRβ1(1∶50)，4℃冰箱過夜，次日滴加二抗，37℃孵育1 h，PBS洗滌3次，進行DAB顯色，蘇木素復(fù)染2 min，自來水沖洗5 min，梯度酒精逆行脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。TRβ1抗體購自美國Santa公司，SP檢測試劑盒、DAB顯色試劑盒均購自北京中杉公司。

1.3 結(jié)果判定 所選取的組織標本均由兩名主治以上的病理醫(yī)師采用雙人雙盲法判定診斷，顯微鏡下進行計數(shù)、讀片。切片染色強度評分淺黃色計1分，棕黃色計2分，棕褐色計3分。陽性細胞百分數(shù)評分：按陽性細胞數(shù)：<10%記為0分，10%～25%記為1分，26%～50%記為2分，>50%記為3分；兩者得分相乘，將≤3分設(shè)為陰性表達，>3分設(shè)為陽性表達。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件，計數(shù)資料比較采用2檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 TRβ1在子宮內(nèi)膜樣腺癌組織和子宮內(nèi)膜單純性增生組織中的表達 TRβ1主要表達于細胞質(zhì)中，陽性顆粒黃色至棕黃色分布，見圖1。48例子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中TRβ1蛋白表達陽性4例，陽性率8.3%，而在子宮內(nèi)膜單純性增生組織中TRβ1蛋白表達陽性25例，陽性率92.6%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(2=51.73，P<0.05)，見表1。

A：TRβ1在子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中的表達；B：TRβ1在子宮內(nèi)膜單純性增生組織中的表達

表1 TRβ1在子宮內(nèi)膜樣腺癌和子宮內(nèi)膜單純性增生組織中的表達 例

2.2 TRβ1的表達與子宮內(nèi)膜樣腺癌患者臨床病理指標的關(guān)系 不同年齡、腫瘤大小、肌層浸潤深度和有無脈管侵犯分組子宮內(nèi)膜樣腺癌患者組織中TRβ1蛋白的陽性表達率比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移：TRβ1蛋白陽性率無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組0.0%(0/33)，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組26.7%(4/15)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。臨床分期：TRβ1蛋白陽性率Ⅰ、Ⅱ期25%(3/12)，Ⅲ、Ⅳ期2.8%(1/36)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

3 討論

子宮內(nèi)膜樣腺癌是女性生殖系統(tǒng)中的常見病和多發(fā)病?；颊叨酁榻^經(jīng)后婦女，以陰道不規(guī)則出血為首要癥狀。腫瘤常呈浸潤性生長，易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠處轉(zhuǎn)移[9]。由于其高發(fā)性和預(yù)后差，近年來關(guān)于子宮內(nèi)膜樣腺癌的研究非常多。研究表明，多種蛋白在子宮內(nèi)膜樣腺癌中均呈高表達狀態(tài)，如VEGF、CD31、IGF-1、CD74、CyclinA1等蛋白，而TSP-1、PAX-2等蛋白在子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中呈低表達狀態(tài)。子宮內(nèi)膜單純性增生是由于體內(nèi)雌孕激素水平失常所致，超聲下主要表現(xiàn)為子宮內(nèi)膜增厚。雌激素持續(xù)升高而缺乏孕激素的拮抗引起子宮內(nèi)膜的腺體和間質(zhì)呈不同比例的增生，導(dǎo)致無排卵性功能性子宮出血，經(jīng)量增多、經(jīng)期延長。如不及時治療，不僅會引發(fā)患者貧血等繼發(fā)表現(xiàn)，還有可能繼續(xù)發(fā)展為子宮內(nèi)膜復(fù)雜性增生甚至不典型增生，所以對子宮內(nèi)膜單純性增生的及時治療和研究也是極為重要的。

表2 TRβ1表達與子宮內(nèi)膜樣腺癌臨床病理指標的關(guān)系 例

甲狀腺激素(TH)對許多組織的正常發(fā)育以及功能調(diào)節(jié)至關(guān)重要，人體內(nèi)的甲狀腺激素主要有兩種，即T3和T4，其中T3生物活性較活躍，與甲狀腺激素受體(TRs)的親和性比T4高20倍左右[10]，它可以通過單羧酸酯膜轉(zhuǎn)運蛋白(MCT8)進入細胞與甲狀腺激素脫碘酶和TRs共同發(fā)揮作用。TRs由兩個人類基因編碼，即THRA和THRB，此外，通過交替的mRNA剪接和不同的啟動子使用產(chǎn)生了4種DNA和T3結(jié)合亞型，即TRα1、TRβ1、TRβ2和TRβ3。前3種廣泛存在于人體各臟器組織中，高度同源，但又有獨特的表達模式[11]。在腸上皮黏膜和視網(wǎng)膜中可以檢測到TRα1和TRβ2 的表達，分別誘導(dǎo)細胞增殖和分化[12]。骨骼肌細胞中的甲狀腺激素主要通過與TRα1結(jié)合發(fā)揮作用。TRβ3僅存在于大鼠中[13]。TRβ1被Weinberger于1986年首次發(fā)現(xiàn)[14]，位于人染色體3p24.1，編碼TRβ1蛋白，屬于核受體超家族。研究表明，TRβ1編碼基因失活會導(dǎo)致聽力障礙[15]。核定位信號鉸鏈域中的NLS-1和NLS-2可以誘導(dǎo)TRβ1進入核內(nèi)，若NLS-1和NLS-2基因突變，會影響TRβ1的核穿梭活動，甚至導(dǎo)致TRβ1定位錯誤，誘發(fā)腫瘤的發(fā)生[16]。TRs與人體代謝、膽固醇和三酰甘油循環(huán)水平的調(diào)節(jié)有關(guān)。TRs是一類轉(zhuǎn)錄因子，其活性可以通過T3的局部利用率來維持，并參與許多調(diào)節(jié)細胞周期控制和細胞分化相關(guān)基因的表達[17]，影響處于不同分化階段的細胞，但不同種類的TRs對細胞增殖和分化的影響是大不相同的，這取決于細胞類型、細胞環(huán)境以及發(fā)育或轉(zhuǎn)化的狀態(tài)。無論在發(fā)育期間還是在成年人中，干細胞對于正常器官的形成、維持和再生都是必不可少的。最近的證據(jù)表明，TRs的某些作用可能是干細胞功能調(diào)節(jié)的次要因素[18]。TRs中研究最多的亞型是TRβ1，有研究人員通過功能獲得方法使體外乳腺癌細胞(MDA-MB-468)重新高表達TRβ1，增加了細胞凋亡，降低了細胞增殖，并阻止了癌細胞的遷移[19]。由此可見，對TRβ1的檢測和干預(yù)已成為腫瘤診斷和治療的新方法[20]。除了調(diào)節(jié)代謝、生長和發(fā)育外，越來越多的證據(jù)表明TRβ1在細胞增殖[21]和惡性轉(zhuǎn)化中具有重要作用。相關(guān)研究表明，將108 bp外顯子序列引入人TRβ1DNA結(jié)合域(DBD)的相應(yīng)位置，構(gòu)建人工修飾的人TRβ1(m-TRβ1)[22]，可以通過上調(diào)Caspase-3和Bak基因的表達抑制體外肝癌細胞(SK-hep1)的增殖并阻止腫瘤細胞遷移，推測TRβ1可能是一種抑癌因子[23]。

本研究顯示，TRβ1在子宮內(nèi)膜樣腺癌中的表達顯著低于子宮內(nèi)膜單純性增生，提示TRβ1的降低可能導(dǎo)致了子宮內(nèi)膜樣腺癌的發(fā)生，推測TRβ1是一種抑癌基因。TRβ1與患者的年齡、腫瘤大小及浸潤肌層深度沒有相關(guān)性，而與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)，提示TRβ1的低表達促進了子宮內(nèi)膜樣腺癌的轉(zhuǎn)移，推測TRβ1在抑制腫瘤的侵襲與轉(zhuǎn)移中也發(fā)揮著重要作用。

由于本次研究收集標本數(shù)量相對較少，不能分析大量的統(tǒng)計數(shù)據(jù)，只是針對本地區(qū)子宮內(nèi)膜樣腺癌患者的研究分析，并做了初步探討，之后會加大研究力度，增加病例標本，以獲得長久、大量準確的統(tǒng)計數(shù)據(jù)及意義。我們提出了利用生物學(xué)上重要的蛋白標記物TRβ1檢測子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中的表達，為子宮內(nèi)膜樣腺癌生物標記物研究的未來方法奠定了基礎(chǔ)，也為臨床早期診斷和治療子宮內(nèi)膜樣腺癌提供新的思路。