謝印乾，王桂花，康京麗

（1.陜西省動物疫病預(yù)防控制中心，陜西西安 710016；2.渭南市動物疫病預(yù)防控制中心，陜西渭南 714000；3.中國動物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心，山東青島 266032）

布魯氏菌病（brucellosis，以下簡稱布病）是由布魯氏菌引起的人獸共患傳染病，可導(dǎo)致牲畜流產(chǎn)、不孕、繁殖成活率低、使役能力下降、產(chǎn)肉量減少、產(chǎn)奶量下降等，會對畜牧業(yè)發(fā)展造成嚴(yán)重影響[1]。該病嚴(yán)重危害公共衛(wèi)生安全，嚴(yán)重威脅人類身體健康，同時嚴(yán)重影響動物產(chǎn)品消費，已成為全球關(guān)注的公共衛(wèi)生問題和社會問題[2]。

綏德縣羊存欄約15 萬只，其中存欄60 只以上規(guī)模場的存欄量占總存欄的75%以上；動物交易頻繁，擁有大型牛羊交易市場5 個，來自山西、內(nèi)蒙古、遼寧等地的羊只多在此地交易，是陜北地區(qū)牛羊交易的主要集散地。近5 年來，該縣累計報告人間布病病例300 多例，為榆林市最高。為有效控制布病流行，多年來，當(dāng)?shù)夭扇×恕懊庖?監(jiān)測+撲殺”的綜合防控措施。但由于存在以下問題，導(dǎo)致監(jiān)測準(zhǔn)確性及精確性差，撲殺效率低下，難以有效防控：免疫后監(jiān)測時間不當(dāng)，難以區(qū)分免疫抗體和感染抗體；沒有充分考慮羔羊和成年羊的易感性，監(jiān)測目標(biāo)群以羔羊為主，存在選擇性偏倚；沒有考慮檢測試驗的敏感性和特異性；抽樣隨機性差且抽樣量?。蝗狈︼L(fēng)險因素研究，導(dǎo)致防控措施盲目、針對性差。

本研究旨在掌握綏德縣羊布病群體水平流行率，通過描述布病在綏德縣的空間分布，尋找群間傳播風(fēng)險因素，從而為提出科學(xué)、有效的控制措施提供依據(jù)。

1 材料與方法

2015 年9—10 月，采用橫斷面研究方法，對綏德縣存欄＞60 只的規(guī)模羊場進行抽樣及問卷調(diào)查，共涉及253 個規(guī)模羊場，其中存欄501～1 000只的62 個，1 001～2 000 只的28 個，＞2 000 只的15 個。

1.1 目標(biāo)群和研究對象

綏德縣每年9—10 月對羊群進行S2 布魯氏菌疫苗集中口服免疫。因布魯氏菌疫苗口服免疫6 個月后難以檢出免疫抗體，以及6 月齡以內(nèi)羔羊?qū)Σ剪斒暇〔灰赘衃3]，所以本研究選擇全縣存欄60只以上的規(guī)模羊場為目標(biāo)群，并以6 月齡以上的未免疫羊和免疫6 個月以后的羊為研究對象。

1.2 實驗室檢測

將現(xiàn)場采集的全血樣品置于一次性采血器中送至實驗室分離血清，置-20 ℃冷凍保存。對采集的血清樣品，先用虎紅平板凝集試驗（RBPT）進行初檢，對檢測陽性的再用試管凝集試驗（SAT）進行復(fù)檢。兩個試驗檢測均為陽性的認定為血清學(xué)陽性樣品，至少檢出1 個血清學(xué)陽性樣品的養(yǎng)殖場定義為陽性場。所有檢測試劑均購自青島易邦生物工程有限公司，操作過程嚴(yán)格按照說明書進行。

1.3 診斷試驗特性

據(jù)相關(guān)資料[4]顯示：針對個體水平，RBPT 試驗的敏感性為0.95≤Se≤1，特異性為0.8≤Sp≤1；SAT 試驗的敏感性為0.85≤Se≤1，特異性為0.9≤Sp≤1。根據(jù)抽樣量計算需要，RBPT 與SAT 垂直試驗的敏感性和特異性分別為0.9≤Se≤1，0.9≤Sp≤1；根據(jù)真實流行率估計需要，RBPT 與SAT 垂直試驗的敏感性和特異性分別為0.81≤Se≤1，0.99≤Sp≤1。

1.4 抽樣策略和抽樣量計算

使用多階段隨機抽樣策略[5]，首先抽取羊場，然后抽取羊場內(nèi)的羊個體。

群體水平抽樣框為全縣253 個存欄＞60 只的規(guī)模羊場，抽樣數(shù)量按95%置信水平（CL），20%預(yù)期流行率（p）和6%可接受誤差（e），用估計流行率方法，按公式（1）計算，共需要抽取102 個場。

個體水平抽樣數(shù)量根據(jù)群內(nèi)研究對象數(shù)量，按95%置信水平（CL），5%預(yù)期流行率（p），用發(fā)現(xiàn)疫病方法進行計算，按照公式（2）計算需要的個體抽樣量。

1.5 空間地理數(shù)據(jù)收集

布病群體水平流行率的空間分布分析，通過GIS 軟件及綏德縣的電子地圖完成。GIS 軟件及綏德縣的電子地圖，由聯(lián)合國糧農(nóng)組織跨境動物疫病應(yīng)急中心中國辦公室（FAO ECTAD China）提供。

2 數(shù)據(jù)分析

2.1 流行率估計

群體水平表面流行率（APh）為陽性群數(shù)除以抽樣總?cè)簲?shù)，群體水平真實流行率結(jié)合群敏感性（HSe）和群特異性（HSp）計算得到，TPh=（APh+HSp-1）/（HSe+HSp-1）。真實流行率的95%置信區(qū)間（CI）通過公式（3）進行計算。

式中：p是真實流行率，Z為標(biāo)準(zhǔn)正態(tài)分布中概率p=0.05 所對應(yīng)的值，n為抽樣數(shù)量。

2.2 風(fēng)險因素分析

結(jié)合當(dāng)?shù)氐娘曫B(yǎng)管理情況，提出群間傳播風(fēng)險因素假設(shè)，并設(shè)計調(diào)查問卷[6-7]；采樣時通過現(xiàn)場訪問完成問卷調(diào)查。結(jié)合所采集樣品的實驗室檢測結(jié)果，用Epi info7 進行發(fā)病風(fēng)險因素分析。

3 結(jié)果

3.1 場群流行率

3.1.1 群敏感性和特異性 根據(jù)預(yù)期流行率、每個場平均采樣量及檢測試驗的敏感性和特異性，分別按照公式（4）和公式（5）計算抽樣場的群敏感性和群特異性[5]。

式中：p是群內(nèi)預(yù)期流行率5%，Se 是試驗敏感性，Sp 是試驗特異性，n為群內(nèi)平均抽樣數(shù)量。計算得到群敏感性HSe=84.4%，群特異性HSp=69.5%。

3.1.2 群流行率 在102 個養(yǎng)殖場中，共采集血清樣品3 693 份（平均每場36.2 份），其中來自49 個場（48.04%）的169 份樣品（4.58%）被檢測為布病血清學(xué)陽性。根據(jù)群敏感性和群特異性，計算得到群體水平的真實流行率為32.6%（95%CI：23.5%～41.6%）。

3.2 風(fēng)險因素分析

對調(diào)查問卷中涉及的每個假定風(fēng)險因素進行單因素分析[9]，結(jié)果見表1。分析發(fā)現(xiàn)，外購混養(yǎng)、流產(chǎn)物隨意丟棄、經(jīng)常消毒、近1 年內(nèi)有羊只引進、生產(chǎn)區(qū)與生活區(qū)不隔離以及2011 年后建場的養(yǎng)殖場布病發(fā)病風(fēng)險率高（P＜0.05）。

表1 風(fēng)險因素的單因素分析結(jié)果

3.3 空間分布

綏德縣布病群陽性率的空間分布見圖1?？臻g分布顯示，布病群陽性率較高的主要分布在以田莊、張家砭為主的西南部鄉(xiāng)鎮(zhèn)和以薛家河、中角為主的中、北部鄉(xiāng)鎮(zhèn)。

圖1 綏德縣各鄉(xiāng)鎮(zhèn)羊布病群陽性率空間分布

4 討論

綏德縣位于陜西北部，與山西省交界，素有羊肉消費的習(xí)俗，羊飼養(yǎng)量大；擁有多個牛羊活畜交易市場，是榆林市和山西省牛羊交易的主要集散地，動物流通頻繁，市場交易量大；飼養(yǎng)、羊絨生產(chǎn)、屠宰和市場流通等環(huán)節(jié)，人暴露于布魯氏菌的潛在風(fēng)險較高。近年來，該縣人間布病病例數(shù)量持續(xù)上升，人的健康受到嚴(yán)重威脅。開展布病流行病學(xué)研究，對于尋找科學(xué)的布病防控方法具有重要的參考意義。

本研究是首次在綏德縣用概率抽樣的方法來了解羊病血清學(xué)流行率。研究發(fā)現(xiàn)，該縣羊病群體水平流行率高達32.6%（95%CI：23.5%～41.6%），說明近年來該縣推行的免疫、檢疫政策以及基于風(fēng)險的監(jiān)測、撲殺措施，對布病的控制顯得無力。這一方面，是因為加強免疫和檢疫政策的落實不到位，動物免疫密度達不到要求，沒有嚴(yán)格限制非免疫區(qū)動物和患病動物的引進；另一方面，是因為長期以來只過度關(guān)注個體流行率，但受群體內(nèi)抽樣方法和抽樣量的局限，群內(nèi)部分陽性個體會被漏檢，導(dǎo)致陽性動物在群內(nèi)長期存在、持續(xù)傳播，因而雖然花費了巨大代價去撲殺陽性個體，但流行率并沒有得到有效降低。

羊布病主要靠胎盤和直接接觸傳播，因此較高的群體流行率提示，感染群與易感群之間有很高的接觸機會。研究發(fā)現(xiàn)羊場感染布病的主要風(fēng)險因素包括，外購混養(yǎng)、流產(chǎn)物隨意丟棄、近1 年內(nèi)有羊只引進、生產(chǎn)區(qū)與生活區(qū)不隔離以及2011 年后建場，并發(fā)現(xiàn)“消毒”為“流產(chǎn)物處理不當(dāng)”的混雜因素。在實際生產(chǎn)中，養(yǎng)殖戶往往只通過加強消毒來控制病原傳播，而忽視對流產(chǎn)物的無害化處理，因而難以達到控制布病的目的。這需要加強引進動物的檢疫、隔離，積極推廣自繁自養(yǎng)的生產(chǎn)模式；對生產(chǎn)區(qū)和生活區(qū)進行有效隔離，切斷疫病群間傳播途徑；加強流產(chǎn)物無害化處理，避免隨意丟棄。既要防止病原在群內(nèi)持續(xù)傳播，又要避免傳染其他羊群。

本研究考慮了血清學(xué)檢測試驗的敏感性和特異性，群陽性預(yù)測值和陰性預(yù)測值分別為97.16%和80.30%。如果不考慮試驗特性，就會低估群體流行率，因而基于表面流行率的控制措施會把一些感染群認為是假陰性，所以提高檢測試驗敏感性或根據(jù)陽性場空間分布、風(fēng)險因素管理水平以及人間病例聚集特征，實施基于風(fēng)險的控制策略對綏德縣布病防控具有重要意義。

本研究設(shè)定群內(nèi)預(yù)期流行率為5%，用發(fā)現(xiàn)疫病方法進行群內(nèi)個體抽樣量計算，導(dǎo)致群內(nèi)流行率低于5%的場群內(nèi)的陽性個體難以被發(fā)現(xiàn)而被認定為陰性場，但考慮到布病在場群內(nèi)傳播快，一旦有病原會蔓延迅速的特點，這對陽性場的鑒別影響不大。場群抽樣量以全縣的場群數(shù)量為抽樣框進行計算，然后根據(jù)各鄉(xiāng)鎮(zhèn)場群比例進行配額，因而存在代表性不足的局限性，在空間分布分析中會造成一定偏倚；同時，場群抽樣采取簡單隨機的抽樣方法，在抽樣框不大的情況下，沒有對抽樣數(shù)量作進一步校正，因而對樣品的代表性會有一定影響。由于存欄60 只以上規(guī)模場存欄的羊占該縣總存欄的75%以上，因此本研究只選取了存欄60 只以上的規(guī)模場為目標(biāo)群，所得到的流行率和風(fēng)險因素也僅適用于該目標(biāo)群，對存欄小于60 只的小養(yǎng)殖場戶的研究還有待下一步開展。