付占斐，王 鑫，王 芳??，董雙林

(1.海水養(yǎng)殖教育部重點實驗室(中國海洋大學)，山東 青島 266003；2.青島海洋科學與技術(shù)試點國家實驗室，海洋漁業(yè)科學與食物產(chǎn)出過程功能實驗室，山東 青島 266237)

虹鱒(Oncorhynchusmykiss)屬硬骨魚綱(Osteichthyes)鮭形目(Salmoniformes)鮭科(Salmonidae)，是一種冷水性魚類[1]，主要包括陸封型和降海洄游型兩類。淡水養(yǎng)殖種類主要指陸封型虹鱒(O.mykiss)，是我國優(yōu)良的養(yǎng)殖種類，硬頭鱒(O.mykiss)是虹鱒的降海洄游型，需在淡水中生活達到最小臨界規(guī)格才可入海[2]。目前我國已有20多個省(市)開展了虹鱒魚養(yǎng)殖，但大多為淡水養(yǎng)殖，海水工廠化養(yǎng)殖仍處于初步階段[3-4]。虹鱒屬廣鹽性魚類，經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，海水馴化后的虹鱒和硬頭鱒可實現(xiàn)在海水中正常生長，且其肌肉品質(zhì)和口味也遠優(yōu)于淡水養(yǎng)殖品種[5-7]。隨著中國淡水資源的日趨緊張，近年來虹鱒海水養(yǎng)殖逐漸盛行，人們十分關(guān)注如何縮短虹鱒在淡水階段養(yǎng)殖時間問題，馴化方式研究日趨引起人們重視。

虹鱒對鹽度環(huán)境有一定的適應(yīng)能力，成魚經(jīng)半咸水過渡即可適應(yīng)海水生活[6]，經(jīng)過適當?shù)柠}度馴化，虹鱒可以適應(yīng)一定的海水環(huán)境，并保持良好的生長性能[8]。研究發(fā)現(xiàn)，虹鱒入海后的存活和生長情況與鹽度馴化方式有關(guān)，且受魚規(guī)格的影響，例如：Johnston發(fā)現(xiàn)[9]，相比較從淡水直接移入海水(鹽度波動范圍為28～29)環(huán)境中，從淡水直接移入河口環(huán)境(鹽度波動范圍為17～29)更適合叉長為15 cm的虹鱒存活、生長。Landless研究發(fā)現(xiàn)[10]，規(guī)格為15 g的虹鱒直接移入鹽度為22的海水網(wǎng)箱中表現(xiàn)出較高的存活率，而體重達55 g時直接移入鹽度為25環(huán)境中仍保持較高的存活率。之前的研究主要針對直接放入對虹鱒存活和生長的影響，而關(guān)于逐步過渡進行鹽度馴化對虹鱒的影響尚未見報道。本研究以初始體重為20 g左右的虹鱒和硬頭鱒幼魚為材料，設(shè)計了4種鹽度馴化方式，通過比較不同鹽度馴化方式下虹鱒和硬頭鱒的存活和生長，確定適用于20 g虹鱒和硬頭鱒的鹽度馴化方法，以期為虹鱒的海水馴化提供科學依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗材料來源和暫養(yǎng)

實驗所用健康的三倍體虹鱒和硬頭鱒幼魚購自山東省日照市萬澤豐漁業(yè)有限公司。虹鱒和硬頭鱒初始體重分別為(20.19 ± 0.32)和(20.11 ± 0.47) g，初始體長分別為(11.32 ± 0.56)和(11.30 ±0.71) cm。魚運回實驗室后暫養(yǎng)于圓形塑料白桶(R=0.4 m，H=0.6 m，160 L)中14 d。暫養(yǎng)期間的用水為曝氣自來水，水溫(16±0.5)℃，DO>6.0 mg/L，光照周期為12L∶12D，日換水1次，每次換水100%，每日08：00和16：00投喂“七好牌”三文魚專用配合飼料2次，投喂1 h后吸除殘餌。

1.2 實驗設(shè)計與過程

實驗設(shè)4種鹽度馴化方式，分別為S2(+2/d)、S4(+4/d)、S6(+6/d)和S8(+8/d)，即每日升鹽幅度分別為2、4、6和8，直至鹽度升至30，以淡水養(yǎng)殖為對照組(S0)。實驗期間水體鹽度變化情況見表1。每組處理設(shè)3個重復(fù)，每個重復(fù)放置6尾魚。鹽度用曝氣自來水與鹽度為30的砂濾海水調(diào)配，采用手持式海水鹽度計(速為LS 10T，0～100)測定鹽度。將暫養(yǎng)結(jié)束后的魚停食24 h，挑選體格健壯、體色正常的用于正式實驗。實驗在水族箱(55 cm×29 cm×36 cm，50 L)中進行，實驗持續(xù)40 d。實驗期間的管理同暫養(yǎng)。每日投喂1 h后虹吸法收集殘餌，所收集的殘餌放入70 ℃烘箱中烘干保存，以根據(jù)飼料溶失率和殘餌量計算實驗魚的攝食量。實驗過程中發(fā)現(xiàn)死魚及時撈出并記錄。實驗結(jié)束后停食1 d，魚經(jīng)MS-222麻醉后用電子天平(HC—C，0.01 g)稱重。

1.3 數(shù)據(jù)計算

特定生長率SGR(Specific growth rate)、攝食量FC(Feed consumption)和飼料轉(zhuǎn)化率FCE(Feed conversion efficiency)計算如下：

SGR(%·d-1) =(lnWt-lnW0) /t×100；

FC(g·d-1·ind-1)=Cw/(n·t)；

FCE(%)=100×(Wt-W0)/Cw。

式中：W0和Wt分別表示幼魚的初始體重和末體重；Cw表示幼魚實驗期間總攝食量；t表示實驗時間;n表示實驗魚尾數(shù)。一般用日攝食量來衡量水產(chǎn)動物的攝食情況。

表1 實驗期間水體鹽度變化情況Table 1 Changes in water salinity during the experiment

1.4 數(shù)據(jù)處理與分析

不同鹽度馴化方式下虹鱒和硬頭鱒的存活率、攝食量、飼料轉(zhuǎn)化率和生長采用單因素方差分析。方差齊性采用Levene’s檢驗，方差分析存在顯著差異時采用Tukey檢驗進行多重比較。相同鹽度馴化方式下虹鱒和硬頭鱒上述指標的差異采用獨立樣本T檢驗。所有數(shù)據(jù)采用平均值±標準差(Mean±SD)表示，統(tǒng)計分析采用SPSS19.0，以P<0.05作為差異顯著水平。

2 結(jié)果

2.1 成活率和生長

不同鹽度馴化方式下虹鱒和硬頭鱒的存活見表2。從表2中可以看出，S0組2種魚的存活率最高，為100%；隨日升鹽幅的增加存活率下降，其中，日升鹽幅為4～8時，虹鱒魚的存活率顯著低于S0和S2組；日升鹽幅為8時，硬頭鱒的存活率顯著低于S0組；同一鹽度馴化方式下，虹鱒和硬頭鱒的死亡率無顯著性差異。

不同鹽度馴化方式下虹鱒和硬頭鱒生長見表2。從表2中可以看出，虹鱒和硬頭鱒的末體重均以淡水組最高，S2組虹鱒末體重顯著高于S8組，與S0、S4和S6組差異不明顯；S2和S4組硬頭鱒的末體重顯著低于S0組，顯著高于S6和S8組。S2和S6組虹鱒末體重顯著高于相應(yīng)處理組的硬頭鱒。SGR呈相似的變化規(guī)律。

表2 不同鹽度馴化方式下虹鱒和硬頭鱒的存活和生長Table 2 Survival and growth rate of rainbow and steelhead trout in different way of salinity acclimation

注：不同的小寫字母和大寫字母分別表示虹鱒和硬頭鱒不同處理下存在顯著差異(P<0.05)?！?”表示虹鱒和硬頭鱒在相同馴化方式下存在顯著差異(P<0.05)。下表同。
Notes:Different lower-case letters represent significant difference among rainbow trout treatments,while different capital letters denote the significant difference among steelhead trout treatments (P<0.05).Stars (*) denote a significant difference between rainbow and steelhead trout under corresponding salinity (P<0.05).The same as below.

2.2 攝食量和餌料轉(zhuǎn)化率

不同鹽度馴化方式下虹鱒和硬頭鱒的攝食情況見表3。從表3可以看出，隨日升鹽幅的增大，2種魚的攝食量皆下降。S0組虹鱒的攝食量顯著高于S4、S6和S8組，與S2組差異不明顯，S8組的攝食量顯著低于對照組和其他3個鹽度馴化組；硬頭鱒FC的變化規(guī)律與虹鱒基本相同；S0組硬頭鱒的攝食量顯著高于S0組的虹鱒，S6組虹鱒顯著高于S6組硬頭鱒。隨日升鹽幅的增大，虹鱒和硬頭鱒的飼料轉(zhuǎn)化率皆下降，均以S0組最高，S2組虹鱒的FCE顯著高于其他3個鹽度馴化組，S2組硬頭鱒的高于其他3個鹽度馴化組，且與S6和S8組差異明顯；S0和S2組虹鱒飼料轉(zhuǎn)化率顯著高于相應(yīng)處理組的硬頭鱒。

表3 不同鹽度馴化方式下虹鱒和硬頭鱒的攝食量(FC)和飼料轉(zhuǎn)化率(FCE)Table 3 Feed Consumption (FC) and Feed conversion efficiency (FCE) of rainbow and steelhead trout in different way of salinity acclimation

3 討論

鹽度是影響水產(chǎn)動物存活和生長的重要環(huán)境因子，適當?shù)柠}度環(huán)境可促進水產(chǎn)動物攝食、生長，但鹽度波動幅度過大則產(chǎn)生不利影響[11-13]。水體環(huán)境發(fā)生較大變化時，魚類應(yīng)激反應(yīng)首先表現(xiàn)為行為適應(yīng)[14-16]。在實驗期間發(fā)現(xiàn)，所有鹽度馴化組升鹽過程中，虹鱒和硬頭鱒幼魚表現(xiàn)出適應(yīng)性的行為變化，如短時間內(nèi)游泳速度加快。S4、S6和S8組由于日升鹽幅較大，在升至鹽度為30的水體環(huán)境后，1～2 d時間內(nèi)幼魚會出現(xiàn)失衡現(xiàn)象或趴于缸底、鰓動頻率加快、活動能力降低、攝食量降低。這與澎澤鯽(Carassiusauratusvar.Pengze)幼魚[17]、后背鱸鯉(Percocyprispingiretrodorsalis)幼魚[18]和點籃子魚(Goldsaddlerabbitfish)[19]等對鹽度耐受能力的研究中觀察現(xiàn)象相一致。

從存活率結(jié)果來看，隨日升鹽幅的增大，虹鱒和硬頭鱒幼魚的存活率均下降，淡水組存活率達100%，S2組的存活率高于70%，而S8組的存活率低于40%。分析原因為：在高鹽環(huán)境中，魚體血漿滲透壓低于水環(huán)境滲透壓，魚類必須通過大量攝入高鹽水補充丟失的水分[20]，日升鹽幅較慢魚體的滲透壓調(diào)節(jié)系統(tǒng)可以勉強實現(xiàn)“排鹽保水”的滲透調(diào)節(jié)；隨著日升鹽幅度增加，滲透壓調(diào)節(jié)系統(tǒng)短時間內(nèi)不能完成“排鹽保水”的滲透調(diào)節(jié)，水分不能得到及時補充，鹽分不能排出，滲透平衡系統(tǒng)被破壞，進而導(dǎo)致個體死亡[21-22]。

有關(guān)鹽度馴化方式對魚類生長發(fā)育的影響已有相關(guān)報道。黃國強等[23]對褐牙鲆(Paralichthysolivaceus)幼魚的研究發(fā)現(xiàn)，以鹽度日變幅7馴化至47鹽度環(huán)境的過程中，幼魚血清滲透壓達到穩(wěn)定需要2 d，以鹽度日變幅14的速度則需要4 d。Iwata等[24]對銀大馬哈魚(Oncorhynchuskisutch)的研究發(fā)現(xiàn)，在稚魚期從淡水向海水過渡中，采用逐漸過渡入海的方式可提高其成活率，并促進生長。這表明，以漸進式方式進行鹽度馴化利于魚類的生長發(fā)育。從本實驗結(jié)果看，鹽度馴化速度顯著影響虹鱒和硬頭鱒幼魚的生長，其生長率隨鹽度馴化速度的加快而顯著降低，S2組的特定生長率顯著高于S6和S8組，這與較大的日升鹽幅度抑制魚的攝食、消化和吸收，從而抑制魚的生長[25-27]有關(guān)。本研究中，S8組的攝食量和飼料轉(zhuǎn)化率顯著低于對照組和其他3個鹽度馴化組，由此推斷，S8組對魚體產(chǎn)生較大的應(yīng)激性，影響消化道內(nèi)消化酶的活力[28-30]，使得飼料轉(zhuǎn)化率降低，且滲透壓調(diào)節(jié)使得能量消耗增加，進而抑制了生長[23]。結(jié)合存活率數(shù)據(jù)可以看出，虹鱒和硬頭鱒對較高的鹽度突變耐受性較差，因此，從淡水向海水馴化時，日升鹽幅為2可能對20 g的虹鱒和硬頭鱒比較適宜。

研究表明，由于遺傳特性的差異，魚類耐鹽能力受種間差異的影響[31-33]。本研究中4種鹽幅馴化下雖然硬頭鱒和虹鱒的存活率未達到統(tǒng)計上的差異顯著水平，但日升鹽幅2～6組的硬頭鱒成活率高于虹鱒，這表明20 g左右的硬頭鱒幼魚對鹽度突變的適應(yīng)能力高于虹鱒。硬頭鱒屬于溯河型鮭科魚類，之前有很多學者對鮭科魚類的耐鹽性進行了比較研究。例如：在較高鹽度下，大鱗大麻哈魚(Oncorhynchustshawytscha)維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)的能力強于虹鱒[34]，進行同樣的鹽度突變，大西洋鮭(Salmosalar)的存活率高于美洲紅點鮭(Salvelinusfontinalis)[35]，這表明溯河型鮭科魚類對鹽度的耐受性比陸封型更強，這在本研究中再次證明。

研究發(fā)現(xiàn)，對大多數(shù)水生動物而言，隨著規(guī)格增大，其對鹽度變化的適應(yīng)性增強[36-39]。因此，采用小規(guī)格試驗魚進行耐鹽性分析，其耐鹽程度可以體現(xiàn)這種魚的耐鹽能力。從本實驗結(jié)果看，20 g虹鱒和硬頭鱒的存活率、特定生長率均在淡水中最高，日升鹽幅為2的馴化方式下虹鱒的生長受影響不大，但硬頭鱒的生長顯著低于淡水下的生長，2種魚的存活率降低近30%，這表明20 g左右的虹鱒和硬頭鱒并不能完全適應(yīng)鹽度變化，不是合適的入海規(guī)格。今后尚需開展進一步的研究，以查明最適入海規(guī)格和馴化方法。

4 結(jié)語

隨日升鹽幅的增大，虹鱒和硬頭鱒幼魚的存活率、特定生長率均下降，S2組的特定生長率顯著高于S8組，這表明以緩慢漸進方式進行鹽度馴化更利于虹鱒和硬頭鱒幼魚的生長發(fā)育。在S2、S4、S6組中，硬頭鱒成活率高于虹鱒，20 g左右的硬頭鱒幼魚對鹽度突變的適應(yīng)能力高于虹鱒。相比較4種不同的鹽度馴化方式，20 g左右的虹鱒和硬頭鱒幼魚存活率、特定生長率均在淡水中達最高，因此，20 g左右的虹鱒和硬頭鱒并不能完全適應(yīng)鹽度變化，不是合適的入海規(guī)格。