劉 鑫， 吳亞俐， 劉凱麗， 崔香麗， 都新新， 張文琴

(山西醫(yī)科大學(xué)生理學(xué)系， 太原 030001)

潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis，UC)是一種慢性，特發(fā)性的炎癥性疾病，其發(fā)病率在全球范圍內(nèi)呈上升趨勢[1]。潰瘍性結(jié)腸炎的炎癥特點是發(fā)作和緩解反復(fù)進(jìn)行，并引起粘膜潰瘍。目前臨床治療潰瘍性結(jié)腸炎的目標(biāo)主要是緩解疾病癥狀和防止疾病復(fù)發(fā)[2]。研究表明，潰瘍性結(jié)腸炎的患者患結(jié)直腸癌(colorectal cancer，CRC)的風(fēng)險約比正常人群高數(shù)倍[3]。Wnt/β-catenin信號通路的激活是一種與損傷相關(guān)的反應(yīng),在結(jié)腸粘膜損傷修復(fù)中起著重要作用。潰瘍性結(jié)腸炎損傷的粘膜中可檢測到活躍的Wnt信號激活[4,5]。然而，Wnt通路長期、持續(xù)的激活對潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)展為潰瘍性結(jié)腸炎相關(guān)結(jié)腸癌具有促進(jìn)作用，這個過程可能經(jīng)歷炎癥性不典型增生到腫瘤的進(jìn)展過程[5]。Wnt信號通路的激活雖然是傷口愈合所必須的，但需要被平衡[5]。抑制過度活躍的Wnt信號有助于防止?jié)冃越Y(jié)腸炎惡變。

潰瘍性結(jié)腸炎的常規(guī)治療藥物有5-氨基水楊酸類，糖皮質(zhì)激素類，免疫抑制劑類等。但是這些藥物具有不同程度的副作用[6-10]。如治療潰瘍性結(jié)腸炎的一線藥物美沙拉嗪可能引起腹瀉、過敏、腎毒性反應(yīng)和急性胰腺炎等[6-8]。糖皮質(zhì)激素長期應(yīng)用會導(dǎo)致全身不良反應(yīng)[9]。硫銼嘌呤(免疫抑制劑類)長期應(yīng)用可能會伴有感染、胰腺炎、頭痛發(fā)熱、肝損傷等不良反應(yīng)的發(fā)生，甚至引發(fā)腫瘤[10]。因此，患者希望尋找成分更加天然和副作用小替代藥物的研究備受關(guān)注。白藜蘆醇(resveratrol，Res)是在葡萄、蔓越莓、桑樹和花生等多種植物中發(fā)現(xiàn)的一種多酚類化合物，具有抗氧化、抗炎、抗腫瘤等多種生理效應(yīng)[11]。作為一種成分天然的抗炎物質(zhì)，白藜蘆醇近年來被廣泛應(yīng)用于潰瘍性結(jié)腸炎預(yù)防和治療的研究[12,13]。然而，現(xiàn)有的白藜蘆醇對于Wnt信號通路作用的研究大多是在結(jié)腸癌中進(jìn)行的[14,15]，白藜蘆醇在潰瘍性結(jié)腸炎中調(diào)控Wnt通路機制的研究仍然較少。

MicroRNA(miRNA)是進(jìn)化上保守的短鏈非編碼RNA,其在多種疾病的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用[16，17]。目前對于miRNA-31在潰瘍性結(jié)腸炎中的研究相對較少。我們前期的基因芯片技術(shù)測定結(jié)果表明，miRNA-31在潰瘍性結(jié)腸炎病人腸炎組織和正常組織中有差異性表達(dá)。此外，我們的前期動物實驗蘇木精-伊紅染色法(hematoxylin-eosin staining，HE)染色結(jié)果表明，miRNA-31過表達(dá)小鼠葡聚糖硫酸鈉鹽(dextran sulfate sodium salt, DSS)誘發(fā)潰瘍性結(jié)腸炎較control組小鼠嚴(yán)重(數(shù)據(jù)待發(fā)表)。此外，白藜蘆醇能夠下調(diào)HCT 116細(xì)胞miRNA-31的表達(dá)[18]?；诒菊n題組前期研究結(jié)果，本研究把miRNA-31作為靶點進(jìn)一步研究其在潰瘍性結(jié)腸炎中的表達(dá)并首次探討其與經(jīng)典Wnt信號通路關(guān)系。本研究使用DSS誘導(dǎo)的潰瘍性結(jié)腸炎小鼠觀察白藜蘆醇對潰瘍性結(jié)腸炎的作用，并初步觀察白藜蘆醇對潰瘍性結(jié)腸炎的效應(yīng)與Wnt/β-catenin信號通路及miRNA-31的關(guān)系，為白藜蘆醇應(yīng)用于潰瘍性結(jié)腸炎的治療提供新的思路。

1 材料與方法

1.1 動物與材料

無特定病原體(specific pathogen free，SPF級)雄性C57BL/6小鼠28只，6-8周齡，體質(zhì)量為19～21 g，購自山西醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心。人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞系HCT 116細(xì)胞購自于中國科學(xué)院細(xì)胞庫。DSS購自美國MP公司。白藜蘆醇(純度≥98%)購自美國sigma公司。羧甲基纖維素鈉(carboxymethylcellulose sodium，CMC-Na)購自天津恒興試劑公司。高鐵飼料購自北京華阜康生物公司。轉(zhuǎn)染試劑，RNA提取、反轉(zhuǎn)錄及擴增相關(guān)的試劑盒購自德國Qiagen公司。鼠、兔二步法免疫組化試劑盒購自北京中杉金橋生物公司。β-catenin兔單克隆一抗、低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白6(LDL receptor related protein-6，LRP-6)兔單克隆一抗、CyclinD1兔單克隆一抗、兔抗小鼠IgG二抗均購自于美國 Cell Signaling公司。c-Myc兔多克隆一抗、β-actin鼠單克隆一抗購自于武漢Proteintech公司，卷曲蛋白3(Frizzled-3，F(xiàn)ZD3)兔單克隆一抗購自于美國Abcam公司，HRP 標(biāo)記羊抗兔 IgG 二抗購自北京全式金公司。

1.2 小鼠DSS誘導(dǎo)潰瘍性結(jié)腸炎模型的建立

28只6～8周齡的C57BL/6雄性小鼠隨機分為4組(n=7)：control組,DSS組,DSS+Res組,Res組。小鼠自由飲用無菌水或1% DSS 水，實驗期3周，各組小鼠均進(jìn)食高鐵飼料。實驗開始前進(jìn)行稱重并標(biāo)記所有小鼠。其中control組和Res組小鼠每天飲用正常無菌水，飲用3周；DSS組和DSS+Res組小鼠第一日飲用1%DSS水，且每隔2 d換一次新鮮的1%DSS水，在第八日換為正常無菌水，一周后繼續(xù)重復(fù)上述的1%DSS水喂養(yǎng)一周。在造模最后一周給予各組小鼠灌胃，其中control組和DSS組每天每只小鼠給予0.2 ml的0.5%CMC-Na灌胃，DSS+Res組和Res組小鼠每天每只給予0.2 ml的0.5%CMC-Na 溶解的8 mg/ml濃度的白藜蘆醇灌胃。處理過程中，每天測小鼠體重，觀察小鼠活動，糞便情況。處理結(jié)束后，小鼠稱重，安樂死。取脾臟測量重量，摘取小鼠結(jié)腸測小鼠結(jié)腸長度，用1×磷酸鹽緩沖液(phosphate buffer saline，PBS)沖洗，縱切，測量長度后放入4%多聚甲醛中浸泡24 h，卷成瑞士卷，之后進(jìn)行石蠟包埋，切片，進(jìn)行HE染色。其余結(jié)腸組織組織立即置-80℃超低溫冰箱中保存待用。

1.3 細(xì)胞培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染

HCT 116 細(xì)胞系用含有10%的胎牛血清及1%雙抗的高糖DMEM培養(yǎng)基于37℃及5%CO2孵箱中培養(yǎng)。細(xì)胞轉(zhuǎn)染取對數(shù)生長期細(xì)胞以每孔6×105個細(xì)胞接種于六孔板，同時進(jìn)行瞬時轉(zhuǎn)染hsa-miR-31-5p的mimic和inhibitor，轉(zhuǎn)染完成后把六孔板放入孵箱孵育48 h。細(xì)胞加藥取對數(shù)生長期細(xì)胞以每孔5×105cells/ml細(xì)胞接種密度接種于六孔板，接種后把六孔板放入孵箱孵育，24 h后加藥組每孔加入10 mg/ml白藜蘆醇2 μl，再將六孔板放入孵箱孵育24 h。

1.4 小鼠結(jié)腸組織HE染色

結(jié)腸組織石蠟包埋后切5 μm片，依次將切片置于蘇木素和伊紅染液中染色，脫水透明，中性樹膠封片。顯微鏡下觀察各組小鼠結(jié)腸組織形態(tài)學(xué)改變。

1.5 小鼠結(jié)腸組織病理學(xué)評分

將結(jié)腸組織切片進(jìn)行HE染色后，在顯微鏡下觀察并進(jìn)行組織損傷程度評分。此評分總共涉及四部分：炎癥程度，炎癥深度，隱窩損傷程度及炎癥范圍。組織損傷程度評分是通過以下前三項組織學(xué)特征中的每一項對應(yīng)評分相加乘以病變范圍百分比對應(yīng)評分來確定的。炎癥程度(0，無；1，輕度；2，中度；3，重度)，炎癥深度(0，無；1，黏膜；2，黏膜和黏膜下層；3，漿膜層)以及隱窩損傷程度(0，無；1，基底三分之一的隱窩受損；2，基底三分之二的隱窩受損；3，隱窩消失，僅有完整的表面上皮；4，全部隱窩及上皮破壞)。炎癥范圍百分比對應(yīng)評分定義為：0，0%；1，1%～25%；2，26%～50%；3，51%～75%；4，76%～100%。因此，最小得分為0，最大得分為40分。

1.6 實時熒光定量PCR(quantitative real-time PCR，qPCR)檢測小鼠結(jié)腸組織miR-31的表達(dá)

按miRNeasy MiniKit說明書提取小鼠結(jié)腸組織總RNA。用NanoDrop2000c分光光度計(Thermo,美國)測定RNA濃度和穩(wěn)定性。應(yīng)用miScript II RT Kit反轉(zhuǎn)錄試劑盒(Qiagen,德國)，以200 ng總RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA。然后使用miScript SYBR Green PCR Kit擴增以mmu-miRNA-31為引物的miR-31的表達(dá)以及內(nèi)參RNU6B(U6)的表達(dá)，反應(yīng)體系在CFX96上機對miR-31和U6進(jìn)行實時熒光定量PCR檢測。根據(jù)miR-31和U6的閾值(CT)測定miR-31表達(dá)與U6表達(dá)的相對倍數(shù)變化。

1.7 Western blot檢測組織和細(xì)胞蛋白的表達(dá)

采用Western blot測定小鼠結(jié)腸組織β-catenin和CyclinD1蛋白、 HCT 116細(xì)胞β-catenin、c-Myc、FZD3、LRP-6蛋白的表達(dá)。 取小鼠結(jié)腸組織約50 mg，用RIPA裂解緩沖液裂解蛋白；收集細(xì)胞轉(zhuǎn)染六孔板和細(xì)胞加藥六孔板的HCT 116細(xì)胞，用RIPA裂解緩沖液裂解蛋白。Bicinchoninic acid(BCA)法測定蛋白質(zhì)總濃度；取含總蛋白 20 μg的結(jié)腸組織/HCT 116細(xì)胞勻漿液10 μl，聚丙烯酰胺凝膠電泳(polyacrylamide gel electrophoresis，SDS-PAGE)后，用半干法將蛋白分子轉(zhuǎn)移至聚偏二氟乙烯膜(polyvinylidene fluoride，PVDF)上; 5%脫脂奶粉( 0.25 g脫脂奶粉+5 ml TBST)封閉2 h,洗膜后分別注入羊抗兔β-catenin一抗(1∶1 000)、羊抗兔Cyclin D1一抗(1∶1 000)、羊抗兔c-Myc一抗(1∶1 000)、羊抗兔FZD3一抗(1∶1 000)、羊抗兔LRP-6一抗(1∶1 000)、羊抗小鼠 β-actin 一抗(1∶1 000)。2 h后回收一抗，洗膜后注入HRP標(biāo)記羊抗兔IgG(1∶2 000)或兔抗小鼠IgG(1∶2 000)二抗，室溫孵育1 h。之后化學(xué)發(fā)光法(Electro-Chemi-Luminescence，ECL)顯影，Bio-RadImageLab凝膠成像系統(tǒng)顯影，并對Western blot條帶進(jìn)行定量分析，確定目的條帶的灰度值。

1.8 統(tǒng)計學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 小鼠一般反應(yīng)及體重變化

與control組相比，DSS組小鼠造模期間體重下降明顯，于第2周開始顯著下降(P<0.05)?；顒訙p少，于第2周開始出現(xiàn)稀便，第3周開始出現(xiàn)血便并持續(xù)不良狀況。給予白藜蘆醇后，小鼠體重下降較DSS組改善，于第3周開始具有顯著性差異(P<0.05)。精神良好，活動一般，稀便減輕，大便成形(圖1)。

Fig.1Changes in body weight of mice during the establishment of mouse colitis model

DSS: Dextran sulfate sodium salt; Res: Resveratrol

2.2 小鼠結(jié)腸長度/體重比值變化

所有小鼠取結(jié)腸后，將結(jié)腸縱行切開，用大頭針固定前端和后端使用直尺測量長度。以結(jié)腸長度/小鼠體重比值進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。表1結(jié)果顯示與control組相比，DSS組小鼠結(jié)腸長度/體重比值下降(P<0.05)；而與DSS組相比，DSS+Res組小鼠結(jié)腸長度/體重比值趨于正常(P<0.05)。Res組小鼠結(jié)腸長度/體重比值與control組相比無顯著差異(表1)。

2.3 小鼠脾臟重量/體重比值變化

切除小鼠脾臟并稱重,初步觀察小鼠免疫功能的變化。以脾臟重量/小鼠體重比值進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。表1結(jié)果顯示與control組相比，DSS組小鼠脾臟重量/體重比值上升(P<0.01)；與DSS組相比，DSS+Res組小鼠脾臟重量/體重比值趨于正常(P<0.05)。Control組和Res組小鼠脾臟重量/體重比值無顯著差異(表1)。

GroupColonic length / body weight (cm/g) Spleen weight / body weight (g/g)Control0.35±0.010.0030±0.0011DSS0.32±0.01?0.0071±0.0013??DSS+Res0.35±0.01#0.0047±0.0002#Res0.33±0.010.0027±0.0002

DSS: Dextran sulfate sodium salt; Res: Resveratrol

*P<0.05,**P<0.01vscontrol group;#P<0.05vsDSS group

2.4 小鼠結(jié)腸HE染色結(jié)果

四組小鼠的 HE 染色結(jié)果顯示，DSS組小鼠腸炎炎癥最嚴(yán)重，鏡下可見黏膜和黏膜下層明顯的中性粒細(xì)胞等炎性細(xì)胞的浸潤，腸壁增厚，隱窩結(jié)構(gòu)嚴(yán)重破壞，杯狀細(xì)胞減少(圖2B)；給予白藜蘆醇后，小鼠腸炎炎癥較DSS組明顯減輕，上皮結(jié)構(gòu)基本完整，炎癥細(xì)胞浸潤減少(圖2C)。通過計算各組的結(jié)腸組織損傷評分總分可以得出，DSS組小鼠組織損傷評分總分(14.40±4.45)較control組小鼠(1.09±0.99)高(P<0.01),給予白藜蘆醇后，小鼠組織損傷評分總分(3.40±1.50)明顯降低(P<0.01)。Res組(1.43±0.90)和Control組小鼠組織損傷評分總分無顯著差異(圖2D)。

2.5 小鼠結(jié)腸組織miRNA-31的表達(dá)

四組小鼠結(jié)腸組織qPCR結(jié)果顯示：與control組相比，DSS組小鼠結(jié)腸組織中miRNA-31表達(dá)增多(P<0.05)；與DSS組相比，DSS+Res組小鼠結(jié)腸組織miRNA-31表達(dá)減少(P< 0.05)；與control組相比，Res組小鼠結(jié)腸組織miRNA-31表達(dá)減少(P<0.05)。說明潰瘍性結(jié)腸炎小鼠結(jié)腸miRNA-31表達(dá)上調(diào)，而白藜蘆醇可以下調(diào)小鼠結(jié)腸組織中miRNA-31的表達(dá)(表2)。

Fig.2HE staining of mouse colon

A: Colon of control group； Left is 100 ×; Right is 200 ×; B: Colon of DSS group； Left is 100 ×; Right is 200 ×; C: Colon of DSS+Res group, Left is 100 ×; Right is 200 ×; D: Colon of the Res group; Left is 100 ×; Right is 200 ×

2.6 小鼠結(jié)腸組織β-catenin、Cyclin D1蛋白的表達(dá)

我們檢測了小鼠結(jié)腸組織wnt/β-catenin信號通路核心蛋白分子β-catenin以及Wnt通路靶蛋白Cyclin D1的表達(dá)。Western blot結(jié)果顯示，與control組相比，DSS組小鼠結(jié)腸組織β-catenin(P<0.05)(圖3A，表2),Cyclin D1(P<0.05，圖3B，表2)蛋白表達(dá)增多；給予白藜蘆醇后，DSS+Res組小鼠結(jié)腸組織β-catenin(P<0.05，圖3A，表2)，Cyclin D1(P< 0.05，圖3B，表2)蛋白表達(dá)減少。Res組小鼠結(jié)腸組織β-catenin，Cyclin D1蛋白表達(dá)與control組相比無顯著差異(圖3A，B，表2)。

Fig.3Relative expressions of β-catenin, Cyclin D1 in mouse colon

A: Western blot results of β-catenin expression; B: Western blot results of Cyclin D1 expression; DSS: Dextran sulfate sodium salt; Res: Resveratrol

GroupmiR-31β-cateninCyclinD1Control1.000±0.0000.480±0.0300.190±0.051DSS2.185±0.235?0.765±0.045?0.500±0.082?DSS+Res1.095±0.025#0.525±0.025#0.250±0.082#Res0.390±0.030?0.420±0.0300.180±0.016

DSS: Dextran sulfate sodium salt; Res: Resveratrol

*P<0.05vscontrol group;#P<0.05vsDSS group

2.7 白藜蘆醇對β-catenin、LRP-6、FZD3、c-Myc表達(dá)的影響

我們用HCT 116細(xì)胞研究了白藜蘆醇對Wnt信號通路相關(guān)蛋白表達(dá)水平的影響。Western blot結(jié)果顯示，與對照組Wnt信號通路核心蛋白β-catenin(0.623±0.189)、Wnt信號通路上游蛋白LRP-6(0.937±0.207)、FZD3(0.938±0.257)、以及Wnt信號通路靶蛋白c-Myc(0.767±0.071)表達(dá)相比，給予白藜蘆醇后，β-catenin(0.268±0.078，圖4A)、LRP-6(0.300±0.172，圖4B)、FZD3(0.518±0.234，圖4C)以及Wnt信號通路靶蛋白c-Myc(0.293± 0.026，圖4D)的表達(dá)均顯著受到抑制(P<0.05或 0.01)，說明白藜蘆醇下調(diào)了Wnt信號通路是通過LRP-6/β-catenin/c-Myc途徑。為了觀察這種調(diào)節(jié)與miR-31的關(guān)系，我們將HCT 116細(xì)胞敲低和過表達(dá)miR-31來觀察Wnt信號的作用有何變化。結(jié)果表明細(xì)胞轉(zhuǎn)染miRNA-31 inhibitor后，β-catenin蛋白表達(dá)(0.190±0.164)較control組(0.570±0.282)減少(P<0.05，圖5)，轉(zhuǎn)染miR-31-mimic后，β-catenin蛋白表達(dá)(0.660±0.270)增加(圖5)。說明β-catenin蛋白的表達(dá)與miRNA-31的表達(dá)相關(guān)。

Fig.4Relative expressions of β-catenin, FZD3, c-Myc, LRP-6 in presence of resveratrol

A: Western blot results of β-catenin expression; B: Western blot results of FZD3 expression; C: Western blot results of c-Myc expression; D: Western blot results of LRP-6 expression; Res: Resveratrol

Fig.5MiR-31 inhibit β-catenin expression

Left: Effect of overexpression and inhibition of miRNA-31 on the expression of β-catenin; Right: Statistical result of the expression of β-catenin in presence and absence of miR-31; mimic: miR-31-mimic; inhibitor: miR-31-inhibitor

*P<0.05vscontrol group

3 討論

白藜蘆醇是一種天然多酚，具有抗氧化，抗炎，抗再灌注性心律失常和抗腫瘤的作用[11，19]。近年來被廣泛應(yīng)用于潰瘍性結(jié)腸炎預(yù)防和治療的研究[12,13,20-23]。臨床研究表明，口服500 mg白藜蘆醇6周后，至少部分通過減輕潰瘍性結(jié)腸炎患者的炎癥反應(yīng)從而提高患者的生活質(zhì)量和減輕臨床疾病活動[20]。在潰瘍性結(jié)腸炎的實驗?zāi)Ｐ椭校邹继J醇能改善疾病活動指數(shù)，降低氧化應(yīng)激和炎癥生物標(biāo)志物，提高組織抗氧化酶的活性[21-23]。本研究表明白藜蘆醇能夠減輕DSS誘導(dǎo)小鼠結(jié)腸炎模型的炎癥癥狀及組織損傷。提示其可成為一個良好的抗結(jié)腸炎藥物成分。

影響典型Wnt通路的關(guān)鍵因素是轉(zhuǎn)錄輔因子β-catenin的調(diào)控[24]。在不含Wnt配體的情況下，胞質(zhì)β-catenin通過蛋白酶體降解而被去除。Wnt受體激活后，β-catenin的破壞復(fù)合物被迅速抑制，從而使β-catenin在胞質(zhì)中積累并隨后轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核。在這里，它與TCF/LEF家族轉(zhuǎn)錄因子合作，驅(qū)動各種靶基因如c-myc、cyclin D1的表達(dá)，這些基因調(diào)控細(xì)胞周期進(jìn)程和細(xì)胞增殖[25]。Wnt信號促進(jìn)正常結(jié)腸粘膜上皮細(xì)胞的定期更新，維護(hù)腸道粘膜屏障，幫助腸道抵抗惡劣的環(huán)境[26,27]。當(dāng)腸道發(fā)生炎癥時，除了TNF-α、NF-κB p65等表達(dá)增高外[28]，Wnt信號在腸道上皮中強烈激活，從而促進(jìn)上皮細(xì)胞增殖，修復(fù)受損區(qū)域[26]。然而，雖然Wnt信號通路的激活是粘膜上皮修復(fù)所必須的，但是潰瘍性結(jié)腸炎患者腸上皮因慢性炎癥而經(jīng)歷反復(fù)的損傷和修復(fù)。上皮屏障功能的反復(fù)破壞可能導(dǎo)致β-catenin活性和上皮增生的長期升高[24]，從而有助于促進(jìn)潰瘍性結(jié)腸炎相關(guān)結(jié)腸癌的發(fā)展[27,29]。因此，在潰瘍性結(jié)腸炎過程中平衡Wnt信號通路的過度激活有助于防止?jié)冃越Y(jié)腸炎惡變[27-30]。本研究表明，在DSS誘導(dǎo)結(jié)腸炎小鼠的結(jié)腸組織和HCT 116細(xì)胞中，白藜蘆醇能夠減少Wnt/β-catenin信號通路核心蛋白分子β-catenin的表達(dá)。本研究還檢測了白藜蘆醇對經(jīng)典Wnt信號通路其他相關(guān)蛋白表達(dá)的影響。LRP-6、FZD3是wnt/β-catenin信號通路的上游蛋白分子，正調(diào)控Wnt信號通路的激活。c-Myc 、Cyclin D1(細(xì)胞周期蛋白D1)是Wnt信號通路的靶蛋白，對增殖具有調(diào)控作用[31]。本研究發(fā)現(xiàn)在白藜蘆醇的作用下，Wnt信號通路上游蛋白和靶蛋白均表達(dá)減少，進(jìn)一步說明了白藜蘆醇對經(jīng)典Wnt信號通路的抑制作用。白藜蘆醇的這一效應(yīng)提示其可能有助于降低潰瘍性結(jié)腸炎惡變的風(fēng)險。

miRNA在多種人類疾病中發(fā)揮重要作用[16，17]。研究表明，miRNA-31在一些人類癌癥包括結(jié)腸癌中上調(diào)[32,33]，但其在潰瘍性結(jié)腸炎中的作用目前研究較少。基于本課題組前期已有的實驗結(jié)果[18]，本研究在各組小鼠的結(jié)腸組織中測定miRNA-31的表達(dá)。結(jié)果表明miRNA-31在潰瘍性結(jié)腸炎小鼠的結(jié)腸組織中表達(dá)上調(diào)，且白藜蘆醇能夠下調(diào)miRNA-31的表達(dá)。為了進(jìn)一步研究miRNA-31的表達(dá)與Wnt信號的關(guān)系，本研究在HCT 116細(xì)胞中轉(zhuǎn)染miRNA-31 mimic和inhibitor并檢測Wnt信號核心蛋白分子β-catenin的表達(dá)。結(jié)果表明轉(zhuǎn)染miRNA-31 inhibitor后，HCT 116細(xì)胞中β-catenin蛋白表達(dá)減少。這一結(jié)果至少提示β-catenin蛋白的表達(dá)與miRNA-31的表達(dá)有關(guān)，而進(jìn)一步提示白藜蘆醇對經(jīng)典Wnt信號的抑制作用可能與其對miRNA-31表達(dá)的下調(diào)作用有關(guān)。

綜上所述，本研究表明白藜蘆醇能夠改善潰瘍性結(jié)腸炎炎癥和組織損傷，下調(diào)結(jié)腸炎組織miRNA-31的表達(dá)和結(jié)腸Wnt信號，且白藜蘆醇對Wnt信號的抑制作用可能與下調(diào)miRNA-31的表達(dá)有關(guān)。本研究為白藜蘆醇應(yīng)用于潰瘍性結(jié)腸炎的治療提供了新的思路。