張 瓊, 謝 璐，陳水親，宋 濤，劉志平，曾招林

(贛南醫(yī)學(xué)院 1.2016級(jí)臨床醫(yī)學(xué)本科生；2.基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院；3.第一附屬醫(yī)院皮膚科，江西 贛州 341000)

茶油是從山茶科油茶種子中獲得的，是我國(guó)最古老的木本食用植物油之一。茶油含不飽和脂肪酸高達(dá)85%～97%，其中油酸75%～83%，亞油酸7%～13%，以及多種功能性成分如山茶甙、角鯊烯等，被稱為 “東方的橄欖油”，國(guó)際糧農(nóng)組織將其列為重點(diǎn)推廣的健康食用油[1]。茶油在民間被認(rèn)為具有養(yǎng)顏烏發(fā)、防輻射和延緩衰老的功效，口服或外用治療牙痛、口腔潰瘍、便秘、鵝口瘡以及燒傷、燙傷等疾病[2-3]。

茶油富含的不飽和脂肪酸可作為自由基攻擊的標(biāo)靶，減輕或修復(fù)脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)對(duì)細(xì)胞膜不飽和脂肪酸的損傷，從而起到抗氧化作用。茶油中茶多酚、山茶甙、角鯊烯等成分也有抗氧化作用[4]。茶油與皮膚親和性好，有較好的滲透性，易于皮膚吸收[5]。

有研究使用紫外分光光度法分析化妝品用茶油的光譜特性，與常用的油類橄欖油及乙二醇進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)茶油在250～370 nm對(duì)紫外線有很好的吸收，可作為化妝品用油類油脂[6]。茶油在臨床上已經(jīng)用于對(duì)多種疾病引起的皮膚炎癥的治療，包括失禁相關(guān)性皮炎、ICU腹瀉患者肛周皮膚損傷和尿布皮炎等[7-9]。

隨著全球環(huán)境的劇烈變化，人類生存活動(dòng)收到紫外線輻射的威脅日益加劇，皮膚在接受紫外線照射過(guò)程中可能出現(xiàn)皮膚粗糙、皺紋形成、彈性下降、色素沉著增多等，甚至可能引起各種良性或惡性腫瘤等[10-12]。日光中的 UV包括短波紫外線(UVC，100～290 nm)、中波紫外線(UVB，290～320 nm)和長(zhǎng)波紫外線(UVA，320～400 nm)。由于大氣層中存在臭氧層，UVC 幾乎被全部吸收，天然環(huán)境中幾乎不存在，所以到達(dá)地面人體接受的UV輻射主要為由UVA 和 UVB組成。日光中的中波紫外線成分是引起皮膚腫瘤的主要原因，長(zhǎng)波紫外線因主要作用于真皮而與皮膚老化有關(guān)，UVB則因主要靶部位在表皮細(xì)胞而成為皮膚腫瘤產(chǎn)生的最主要因素。UVB照射可引起免疫系統(tǒng)異常和細(xì)胞凋亡，造成皮膚細(xì)胞DNA損傷，誘導(dǎo)DNA突變，甚至導(dǎo)致皮膚癌腫的發(fā)生[13-14]。UV反復(fù)長(zhǎng)期暴露可以引起皮膚多種損害，如免疫抑制、皮膚炎癥反應(yīng)、皮膚光老化以及腫瘤形成等。皮膚光老化是由長(zhǎng)期反復(fù)的UV皮膚損傷引起，臨床表現(xiàn)為皮膚干燥粗糙、增厚、皺紋形成、彈性改變、色素沉著、毛細(xì)血管擴(kuò)張、紫癜和皮膚腫瘤發(fā)病率增高等。其組織學(xué)改變通常包括表皮增厚，伴有角質(zhì)形成細(xì)胞異質(zhì)性和角化不良，以及部分真皮成分變化如彈性纖維變性、膠原纖維異常等。臨床上，茶油也用于放射線照射后的皮膚損傷恢復(fù)[15-16]。小鼠是一種較為理想的皮膚慢性UV損傷的動(dòng)物模型，其價(jià)廉且操作較簡(jiǎn)單、重復(fù)性強(qiáng)。

因此，本研究擬通過(guò)建立UV損傷小鼠模型，檢測(cè)茶油是否能減輕小鼠UV照射造成的皮膚損傷，為下一步治療UV損傷提供候選方案。

1 材料與方法

1.1小鼠的來(lái)源C57 BL/6小鼠從南京模式動(dòng)物研究所購(gòu)買，之后動(dòng)物飼養(yǎng)在贛南醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。

1.2紫外線照射和茶油處理紫外照射用SH2 B型紫外光療儀(F0.5AL250V，飛利浦)，茶油選用金山上精制山茶油(江西瑞金)。將小鼠分成4組，包括對(duì)照組(Sham)，UV照射組(UV)，UV照射+茶油組(UV+Camelliaoil)和UV照射+尿素軟膏組(UV + Urea Cream)。首先用10%水合氯醛麻醉小鼠。之后，對(duì)照組小鼠僅刮毛處理，UV照射組僅刮毛并且UV-B照射，UV照射+茶油組小鼠接受刮毛、紫外線照射并且在照射后涂抹茶油，UV照射+尿素軟膏組小鼠接受刮毛、紫外線照射后涂抹尿素軟膏，每?jī)商煺丈湟淮?，共進(jìn)行14天。

1.3組織學(xué)分析收集皮膚組織，在10%福爾馬林中固定，然后包埋在石蠟塊中并對(duì)組織塊進(jìn)行切片。使用蘇木素伊紅(HE)染色試劑盒和Masson三色染色試劑盒(索萊寶，北京)進(jìn)行HE、彈力纖維和膠原纖維染色。

1.4熒光定量PCR測(cè)定目標(biāo)基因表達(dá)使用Trizol方法提取皮膚組織RNA，逆轉(zhuǎn)錄成cDNA, 然后通過(guò)細(xì)胞因子的特異性引物，使用 Sybergreen 試劑盒通過(guò)熒光定量PCR檢測(cè)基因表達(dá)情況。IL-6的引物序列為：Forward: 5’-CCA AGA GGT GAG TGC TTC CC-3’，Reverse：5’-CTG TTG TTC AGA CTC TCT CCC T-3’;TNF-α的引物序列為：Forward: 5’TGG TGA CCA GGC TGT CGC TAC A-3’, Reverse: 5’-TAC AGT CAC GGC TCC CGT GGG -3’; IL-1β的引物序列為：Forward: 5’-GAT CCA CAC TCT CCA GCT GCA-3’, Reverse: 5’-CAA CCA ACA AGT GAT ATT CTC CAT G-3’; MCP-1的引物序列為：Forward: 5’-CTT CTG GGC CTG CTG TTC A-3’, Reverse: 5’-CCA GCC TAC TCA TTG GGA TCA-3’。使用β-actin為內(nèi)參, 序列為：Forward: 5’-GGC TGT ATT CCC CTC CAT CG-3’， Reverse: 5’-CCA GTT GGT AAC AAT GCC ATG T-3’。反應(yīng)條件為95 ℃ 10 min預(yù)變性，之后95 ℃ 15 s和60 ℃ 60 s，進(jìn)行40個(gè)循環(huán)。

2 結(jié) 果

為了研究茶油對(duì)UV照射造成皮膚損傷的作用，我們對(duì)小鼠使用UV照射，之后使用茶油或尿素軟膏進(jìn)行涂抹。對(duì)小鼠皮膚照射部位進(jìn)行拍照后結(jié)果顯示：UV照射造成皮膚出現(xiàn)粗糙干裂、皺紋形成、彈性下降、色素沉著增多等。而茶油或者尿素軟膏涂抹減輕了這些損傷(圖1)。與之一致的是，HE染色顯示UV照射造成的皮膚表皮增厚和炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)，而茶油或尿素軟膏涂抹組減輕了表皮增厚及炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)(圖 2)。

實(shí)驗(yàn)組:UV+Camellia oil與UV+Urea cream;對(duì)照組:Sham與UV。

實(shí)驗(yàn)組:UV+Camellia oil與UV+Urea cream;對(duì)照組:Sham與UV。

另外，膠原蛋白是皮膚的主要組成成份，對(duì)皮膚損傷的恢復(fù)至關(guān)重要。UV照射造成了皮膚膠原蛋白的減少，但是茶油和尿素軟膏的涂抹逆轉(zhuǎn)了膠原蛋白的減少，提示皮膚從損傷中的恢復(fù)，兩者效果沒有明顯的區(qū)別(圖3)。

實(shí)驗(yàn)組:UV+Camellia oil與UV+Urea cream;對(duì)照組:Sham與UV。

為了系統(tǒng)研究茶油對(duì)于促炎癥細(xì)胞因子產(chǎn)生的影響，我們檢測(cè)了UV照射及茶油或者尿素軟膏的涂抹對(duì)促炎癥細(xì)胞因子的基因表達(dá)水平的影響。結(jié)果顯示，UV照射造成了促炎性細(xì)胞因子IL-6、TNF-α、IL-1β、MCP-1的基因表達(dá)上升。而茶油處理和尿素軟膏處理組與UV照射組比較，促炎性細(xì)胞因子IL-6、TNF-α、IL-1β、MCP-1的表達(dá)水平下降，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，提示茶油可能通過(guò)抗炎癥的作用來(lái)減輕皮膚損傷(表1)。

表1 茶油對(duì)小鼠皮膚炎癥細(xì)胞因子表達(dá)水平的影響

注：與UV組比較，**P<0.01; ***P<0.001。

3 討 論

茶油在民間常用來(lái)治療皮膚損傷，在一些日用美容化妝品中也有茶油的成份，但是茶油對(duì)于UV照射造成的皮膚損傷的實(shí)驗(yàn)性研究尚缺乏。

我們現(xiàn)有的研究通過(guò)UV照射小鼠皮膚造成損傷的動(dòng)物模型，然后進(jìn)行了茶油涂抹，比較了大體照片、HE染色、膠原蛋白染色及通過(guò)熒光定量PCR檢測(cè)促炎癥細(xì)胞因子的基因表達(dá)。這些結(jié)果顯示，茶油處理可以減輕UV照射造成的皮膚損傷，這可能和促進(jìn)膠原蛋白的生成，下調(diào)皮膚促炎癥細(xì)胞因子的基因表達(dá)有關(guān)。茶油的效果和尿素軟膏的效果比較接近，提示茶油可以作為防曬霜成份的候選。

雖然我們研究了茶油對(duì)UV照射造成皮膚損傷的作用，但是對(duì)于其機(jī)制的了解尚處于比較初級(jí)的階段，茶油作用是否通過(guò)下調(diào)NF-κB和MAPK信號(hào)通路？后續(xù)研究可以通過(guò)Western-blot方法分析各種處理方式的皮膚組織或者皮膚上皮細(xì)胞的信號(hào)通路來(lái)闡明。此外，茶油通過(guò)抑制這些炎癥形成的信號(hào)通路的靶點(diǎn)也是值得研究的問(wèn)題。

此外，對(duì)于茶油的成份還未深入研究，特別是茶油減輕紫外照射損傷的具體成份還未研究。目前認(rèn)為茶油中的不飽和脂肪酸、角鯊烯和茶多酚都有抗炎癥的作用，這些成份在減輕紫外線照射造成的皮膚損傷和修復(fù)及下調(diào)炎癥細(xì)胞因子的產(chǎn)生中的具體作用值得進(jìn)一步研究。不同產(chǎn)地、品系及加工方法的茶油也可能有不同的成份，是否有類似減輕紫外照射造成的損傷作用也還未知。其他類似的植物油(如橄欖油)是否也有類似的作用？最后，我們使用UV-B照射小鼠，茶油是否對(duì)其他紫外線照射如UV-A也有保護(hù)作用？

總之，通過(guò)本研究，我們初步明確了茶油減輕紫外線照射造成的皮膚損傷的作用療效，并且提示其療效可能和促進(jìn)膠原蛋白的生成及降低炎癥細(xì)胞因子的產(chǎn)生有關(guān)，這將為以后中國(guó)南方特有油料用于皮膚保護(hù)和美容提供理論基礎(chǔ)。