董宏偉,王彥華,薛 雙

(1.駐馬店市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心,河南 駐馬店 463000；2.河南省飼草飼料站，河南 鄭州 450008)

禽流感(Avian influenza, AI)是禽流行性感冒的簡稱，是由禽流感病毒引起的一種動(dòng)物傳染病，其嚴(yán)重程度取決于病毒毒株以及被感染禽的種類、日齡和有無并發(fā)癥等因素。其中H5和H7兩個(gè)血清型可以引起高致病性禽流感(HPAI)，以傳播快、發(fā)病急、死亡率高為特征，?？蓪?dǎo)致感染雞群的全軍覆沒，造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(OIE)將其列為A類烈性傳染病。2013年7月至2017年1月，國家禽流感參考實(shí)驗(yàn)室從二十多個(gè)省的活禽市場、家禽養(yǎng)殖場和屠宰場共采集11萬多份樣品，分離到293株H7N9流感病毒。基因組解析發(fā)現(xiàn)這些病毒頻繁重組，共形成23種不同的基因型，90%以上的毒株具有對人易感的分子特點(diǎn)。2017年1月在廣東分離的7株病毒在血凝素基因裂解位點(diǎn)發(fā)生變異，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，這類變異株對雞具有高致死性[1]。

為了有效預(yù)防家禽H7N9流感疫情的發(fā)生，我國從2017年秋季開始，在家禽免疫H5亞型禽流感的基礎(chǔ)上，全面開展了H7N9流感免疫。為掌握駐馬店市家禽H7N9流感的免疫效果，也為科學(xué)評估疫苗提供依據(jù),我們分別于免疫前(2017年5月)和免疫后(2017年12月、2018年5月)對全市家禽H7N9流感抗體進(jìn)行了抽檢與分析,報(bào)告如下。

1 材料

1.1 樣品

共采集駐馬店市24家規(guī)模養(yǎng)殖場和部分散養(yǎng)戶的健康家禽血清樣品908份，其中免疫前血清樣品272份，包括規(guī)模禽場血清樣品210份, 散養(yǎng)戶禽血清樣品62份。免疫后血清樣品636份，包括規(guī)模禽場血清樣品510份，散養(yǎng)戶禽血清樣品126份。其中2017年12月采集樣品298份(包括240份規(guī)模場禽血清樣品和58份散養(yǎng)戶禽血清樣品)，2018年5月采集樣品338份(270份規(guī)模場禽血清樣品和68份散養(yǎng)戶禽血清樣品)。

1.2 試劑

1%雞紅細(xì)胞懸液，按照《高致病性禽流感診斷技術(shù)》(GB/T18936-2003)規(guī)定的方法制備；禽流感病毒H7亞型(H7N9)血凝抑制試驗(yàn)抗原及陰性血清、陽性血清，購自哈爾濱維科生物技術(shù)公司；接種疫苗均為政府采購重組禽流感病毒(H5+H7)二價(jià)滅活疫苗，來自5個(gè)禽流感疫苗生產(chǎn)企業(yè)。

1.3 主要儀器及耗材

恒溫培養(yǎng)箱(型號(hào)：DHP-9052)，上海一恒科學(xué)儀器有限公司生產(chǎn)；移液器，Eppendorf公司生產(chǎn)；滴頭，Axygen公司生產(chǎn)；96孔“V”形微量反應(yīng)板，海門市如意實(shí)驗(yàn)器材廠生產(chǎn)。

2 方法

2.1 檢測方法

利用血凝試驗(yàn)(HA)檢測H7N9流感標(biāo)準(zhǔn)抗原的血凝價(jià)并制備4血凝單位(HAU)抗原，然后利用血凝抑制試驗(yàn)(HI)檢測樣品抗體效價(jià)。具體操作方法按照《高致病性禽流感診斷技術(shù)》(GB/T 18936-2003)進(jìn)行。

2.2 結(jié)果判定

試驗(yàn)成立的條件:陰性對照孔血清滴度不大于2 1og2,陽性對照孔血清誤差不超過 1個(gè)滴度,判定試驗(yàn)結(jié)果有效。以完全抑制 4 HAU 抗原的血清最高稀釋倍數(shù)作為HI滴度，HI 價(jià)小于或等于 3 1og2判定為陰性； HI 大于或等于4 1og2判定為陽性。

3 結(jié)果與分析

3.1 免疫前后H7N9流感抗體檢測結(jié)果與分析

3.1.1 本試驗(yàn)共檢測H7N9流感免疫前血清樣品272份，結(jié)果全部為陰性；共檢測免疫后血清樣品636份，其中533份抗體為陽性，陽性率為83.81%。其中2017年12月采集的298份樣品中220份抗體為陽性，陽性率為73.83%；2018年5月采集的338份樣品中，313份抗體為陽性，陽性率為92.6%。詳見表1。

表1 免疫前后H7N9流感抗體陽性率比較

3.1.2 本試驗(yàn)共檢測免疫前血清樣品272份，結(jié)果顯示：抗體滴度均小于等于2 log2，其中255份抗體滴度小于1 log2(93.75%)； 2017年12月采集的免疫后血清樣品檢測結(jié)果顯示：抗體滴度分布前三名的是6 log2(27.18%)、5 log2(21.14%)、<1 log2(19.80%)；2018年5月采集的免疫后血清樣品檢測結(jié)果顯示：抗體滴度分布前三名的是8 log2(25.44%)、7 log2(24.56%)、≥10 log2(14.50%)。詳見表2。

表2 免疫前后H7N9流感抗體水平檢測結(jié)果

3.2 不同養(yǎng)殖規(guī)模的家禽H7N9流感免疫抗體檢測結(jié)果與分析

本試驗(yàn)共檢測免疫后家禽血清樣品636份,其中510份來自規(guī)模場,126份來自散養(yǎng)戶。

510份規(guī)模場血清樣品中475份免疫抗體合格，35份免疫抗體不合格，整體免疫抗體合格率為93.14%；126份散養(yǎng)戶血清樣品中58份免疫抗體合格，68份免疫抗體不合格，整體免疫抗體合格率為46.03%。詳見表3。

表3 不同養(yǎng)殖規(guī)模的家禽H7N9流感免疫抗體檢測結(jié)果

4 討論

據(jù)表1和表2，家禽接種重組禽流感病毒(H5+H7)二價(jià)滅活疫苗后抗體滴度從免疫前的全部小于等于2 log2，上升到大部分(83.31%)大于等于5 log2，最高可達(dá)到10 log2以上，說明家禽接種重組禽流感病毒(H5+H7)二價(jià)滅活疫苗后能很快產(chǎn)生較高滴度的H7N9流感抗體，證明目前我市家禽使用的重組禽流感病毒(H5+H7)二價(jià)滅活疫苗具有良好的H7N9流感免疫效果。

據(jù)表2，2017年12月采集的樣品H7N9流感抗體水平雖較免疫前明顯升高，但是僅為73.83%，剛剛達(dá)到國家要求的群體免疫抗體合格率70%以上的標(biāo)準(zhǔn)，抗體滴度也主要集中在6 log2附近，與2018年5月采集的樣品抗體水平相比存在明顯差距。這可能與我市2017的免疫實(shí)施情況有一定關(guān)系。我市從2017年秋季開始使用免疫重組禽流感病毒(H5+H7)二價(jià)滅活疫苗(H5N1Re-8株+H7株)，因疫苗生產(chǎn)及調(diào)撥發(fā)放時(shí)間等因素，到2017年12月采樣時(shí)，部分養(yǎng)禽場戶只進(jìn)行了1次疫苗免疫接種，免疫抗體水平還較低，持續(xù)時(shí)間也較短。而2018年5月采集樣品時(shí)很多養(yǎng)殖場戶都已按照免疫程序進(jìn)行了多次免疫接種，抗體水平比較高，持續(xù)時(shí)間比較長。

據(jù)表3，規(guī)模禽場的H7N9流感免疫抗體水平(免疫抗體合格率為93.14%,抗體滴度最高可達(dá)10 log2以上)遠(yuǎn)高于家禽散養(yǎng)戶(免疫抗體合格率為46.03%,抗體滴度也主要集中在7 log2上下)，這是因?yàn)橐?guī)模養(yǎng)禽場大多建立了完善的免疫制度，免疫程序比較規(guī)范合理，定期進(jìn)行了免疫接種。而家禽散養(yǎng)戶大多依賴防疫員的集中免疫接種，缺乏規(guī)范合理的免疫程序，免疫實(shí)施存在一定漏洞。