李 存,張亞利,何愛(ài)武,尹星星

(陜西醫(yī)藥控股醫(yī)藥研究院有限公司，陜西 西安 710075)

凝膠指的是一類由2種及以上組分組成的半固態(tài)的大分子體系[1]。丹參中有效成分丹酚酸B具有清除氧自由基、抗氧化、抗炎、抗纖維化等藥理作用[1]。凝膠劑主要由6大部分組成,包含基質(zhì)、增溶、促透、助溶、保濕、防腐等[1]，其中，凝固劑的質(zhì)量會(huì)隨著輔料用量的多少以及輔料種類的差別而產(chǎn)生變化。本實(shí)驗(yàn)采用單因素及正交試驗(yàn)法，將凝膠劑的流變學(xué)指標(biāo)、外觀和黏度作為衡量凝膠劑質(zhì)量的重要指標(biāo)，在此基礎(chǔ)上，討論卡波姆、黃原膠等不同基質(zhì)和助溶劑、保濕劑搭配用量的不同對(duì)凝固劑質(zhì)量產(chǎn)生的影響[1]，篩選出最優(yōu)的凝膠劑配方,并對(duì)其透皮吸收等進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)研究。

1 祛斑凝膠劑成型工藝優(yōu)化

1.1 儀器與試藥

PB3002-S分析天平(梅特勒-托利多常州測(cè)量技術(shù)有限公司)、PL202-L粗天平(梅特勒-托利多儀器上海有限公司)、pH酸度計(jì)(上海雷磁儀器廠)、NDJ-5s型轉(zhuǎn)子黏度計(jì)、(上海精密科學(xué)儀器有限公司)、丙三醇(天津市天力化學(xué)試劑有限公司)、三乙醇胺(天津市天力化學(xué)試劑有限公司)、無(wú)水乙醇(天津市天力化學(xué)試劑有限公司)、卡波姆940(原葉生物)、卡波姆941(原葉生物)、羥乙基纖維素(成都市科龍化工試劑廠)、黃原膠(天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所)、山梨酸鉀(天津市瑞金特化學(xué)品有限公司)、TK-12B型透皮擴(kuò)散試驗(yàn)儀(上海鍇凱科技貿(mào)易有限公司)。

1.2 動(dòng)物

SD大鼠購(gòu)自西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。

2 方法與結(jié)果

2.1 復(fù)方丹參提取物的制備

取處方量的丹參，加入到植物本體質(zhì)量10倍的乙醇溶液當(dāng)中提取2次，提取時(shí)間為1 h，乙醇溶液的濃度是60%，2次提取完成后的提取液，將其混合在一起，采用0.45 μm的過(guò)濾膜進(jìn)行過(guò)濾，濾液進(jìn)行減壓濃縮，控制溫度在60 ℃以下。備用處方中其他藥物，加入20倍于植物重量的蒸餾水回流提取1次，3h，取上清液濃縮，濃縮微孔濾膜過(guò)濾，獲得植物提取物，與丹參提取物合并。

2.2 膠劑的制備方法

稱取適量的基質(zhì)，加入適量的甘油將其潤(rùn)濕，再逐步加水溶脹，放置過(guò)夜。

2.3 復(fù)方丹參凝膠劑的制備

取“2.1”項(xiàng)下的濃縮液加入“2.2”項(xiàng)基質(zhì)中充分?jǐn)嚢?，在攪拌下加入三乙醇胺至凝膠形成，后加入適量的山梨酸鉀。用三乙醇胺調(diào)節(jié)pH=5～6，加入蒸餾水至100 mL，均質(zhì)15～20 min，即得。

2.4 基質(zhì)輔料種類的篩選

常用的凝膠基質(zhì)材料為卡波姆940、卡波姆941、黃原膠、羥乙基纖維素，因此，通過(guò)試驗(yàn)觀察，篩選出復(fù)方丹參凝膠劑的最佳基質(zhì)材料。

選用0.5%卡波姆940、0.5%卡波姆941、0.6%黃原膠、1%羥乙基纖維素進(jìn)行對(duì)比試驗(yàn)，以制備凝膠的外觀穩(wěn)定性為指標(biāo)，通過(guò)離心試驗(yàn)(3 000 r/min×30 min)、耐熱試驗(yàn)(55 ℃水浴放置6 h)、耐寒試驗(yàn)(-18 ℃放置24 h)考察制劑穩(wěn)定性。篩選凝膠劑的基質(zhì)材料。

表1 篩選不同凝膠基質(zhì)材料 (%)

按“2.3”方法制備以上4種基質(zhì)材料的凝膠，結(jié)果顯示，凝膠劑成型性最差的是以黃原膠為基質(zhì)制備的，以羥乙基纖維素為基質(zhì)制備的凝膠劑在耐熱試驗(yàn)后，黏度降低。以卡波姆940為基質(zhì)制備的凝膠劑，外觀性：氣味適宜、光滑細(xì)膩、涂抹均勻、光澤度較好、鋪展性好、有適宜的黏度，以卡波姆940為基質(zhì)制備的凝膠劑優(yōu)于其他基質(zhì)制備的凝膠劑。

2.5 凝膠劑輔料的篩選

以凝膠劑的成型性、細(xì)膩性、鋪展性、均勻性為評(píng)價(jià)指標(biāo)，考察卡波姆、甘油、無(wú)水乙醇和對(duì)復(fù)方丹參凝膠劑的成型工藝影響，通過(guò)單因素試驗(yàn)，結(jié)果表明卡波姆、pH、無(wú)水乙醇和甘油的用量對(duì)凝膠劑的成型工藝均有影響。

2.6 凝膠處方優(yōu)化

2.6.1 正交試驗(yàn) 根據(jù)單因素試驗(yàn)結(jié)果，考察卡波姆、甘油、無(wú)水乙醇和pH對(duì)復(fù)方丹參凝膠劑的成型工藝影響。采用4因素3水平的正交試驗(yàn)，以凝膠劑屈服值、外觀、觸變性、黏度為評(píng)價(jià)指標(biāo)，選取最佳成型工藝。因素水平見(jiàn)表2，試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3，方差分析見(jiàn)表4。

2.6.2 評(píng)價(jià)指標(biāo)測(cè)定方法 (1)黏度測(cè)定：用黏度計(jì)測(cè)定各基質(zhì)處方在23℃和32℃下的黏度。(2)觸變性[1]：取適量的凝膠測(cè)定，釆用2號(hào)轉(zhuǎn)子，通過(guò)數(shù)字式黏度計(jì)測(cè)定黏度，按以下步驟完成：①將旋轉(zhuǎn)黏度計(jì)的轉(zhuǎn)速逐漸增大，并記錄各轉(zhuǎn)速下的黏度；②將旋轉(zhuǎn)黏度計(jì)的轉(zhuǎn)速逐漸減小，并記錄各轉(zhuǎn)速下的黏度；③根據(jù)假塑性流體公式D=Sn/ηn(D為切變速度，Sn為切變應(yīng)力，ηn為表觀黏度)，計(jì)算切變應(yīng)力并繪制不同轉(zhuǎn)速下剪切應(yīng)力的上升曲線和下降曲線；④通過(guò)流變學(xué)曲線確定流體性質(zhì)，并用繪圖軟件計(jì)算上升和下降曲線之間所夾區(qū)域?yàn)闇蟓h(huán)面積，即為觸變性。(3)屈服值[1]：將繪制的流變學(xué)曲線的上升曲線外推延伸與縱軸相交，取相交的應(yīng)變力值。(4)綜合評(píng)分[1]：根據(jù)各個(gè)指標(biāo)對(duì)基質(zhì)質(zhì)量的重要性，分別賦予一定的權(quán)重，23℃黏度，23℃屈服值，室溫觸變性，32℃黏度，32 ℃屈服值，權(quán)重?cái)?shù)分別為2∶2∶4∶1∶1。綜合評(píng)分=23 ℃黏度/a×20+23 ℃屈服值/b×20+觸變性/c×40+32 ℃黏度/a×10+32 ℃屈服值/b×10。(a=最大黏度值，b=最大屈服值，c=最大觸變性)。

表2 正交因素水平

表3 正交試驗(yàn)結(jié)果

表4 方差分析結(jié)果

由表4極差分析可知，影響產(chǎn)品品質(zhì)的主次因素為A>C>B>D，即卡波姆>甘油>無(wú)水乙醇>pH，由此可得，咀嚼片黏合劑的最佳組合為A3B2C3D2。因素A對(duì)凝膠基質(zhì)質(zhì)量有顯著性影響，而B(niǎo)、C、D無(wú)顯著性影響。因此，復(fù)方丹參凝膠劑優(yōu)選基質(zhì)處方為0.4%卡波姆940，無(wú)水乙醇15 mL，甘油8g，pH=5～6。

2.7 透皮實(shí)驗(yàn)

2.7.1 體外鼠皮的制備[1]健康大鼠，雄性，體質(zhì)量150～200 g，實(shí)驗(yàn)前用剪刀減去大鼠腹部的毛，涂上脫毛膏，放置1～2 min后刮去脫毛膏，用水沖洗，將大鼠的頸部和背部皮膚剝下，然后將這個(gè)皮膚平攤在玻璃片上面，將皮毛向上，對(duì)皮中的脂肪進(jìn)行清除，然后采用氯化鈉溶液對(duì)其進(jìn)行洗滌，采用濾紙擦干皮表面的水分，鼠皮用錫箔紙包裹后放置于-20 ℃的冰箱中保存，保質(zhì)期為7天，在每次透皮吸收實(shí)驗(yàn)之前，均需要對(duì)鼠皮的質(zhì)量進(jìn)行檢查，如果發(fā)現(xiàn)有任何劃痕和破損，均不能用于實(shí)驗(yàn)。

2.7.2 體外透皮吸收實(shí)驗(yàn) 在實(shí)驗(yàn)之前需要將鼠皮拿出來(lái)，不能加水解凍，需要自然解凍，同時(shí)采用氯化鈉溶液清洗到?jīng)]有渾濁為止，然后運(yùn)用濾紙將鼠皮表面的水分吸干凈。將大鼠皮膚固定在擴(kuò)散池的上、下兩室之間，角質(zhì)層朝上，準(zhǔn)確稱取凝膠1.0 g 置于供應(yīng)室，恒溫( 37±1) ℃下保持恒速(300 r/min)，不斷攪拌。取涂藥后的1、2、3、4、5、6 h，接受液進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。

2.7.3 體外透皮吸收結(jié)果 體外透皮吸收實(shí)驗(yàn)中丹酚酸B隨著時(shí)間的增加，累積滲透量逐漸增加，丹酚酸B的滲透透過(guò)量與時(shí)間作關(guān)系圖，見(jiàn)圖1。

圖1 丹酚酸B不同時(shí)間透過(guò)量

3 討論

卡波姆是由丙烯酸與烯丙基蔗糖交聯(lián)而成的高分子聚合物，這種高分子材料是種多用途的藥用輔料?？ú?40是外用凝膠劑的理想材料，卡波姆這種基質(zhì)符合了水溶性基質(zhì)的特點(diǎn)，容易涂抹，而且無(wú)油膩感，舒適性好，并對(duì)皮膚及黏膜無(wú)刺激性，再者其具有釋藥快的特點(diǎn)，是局部藥物的優(yōu)良載體。甘油作為處方中的保濕劑，可使卡波姆在水中更好溶脹。凝膠基質(zhì)pH對(duì)基質(zhì)黏度有較大影響。無(wú)水乙醇具有溶解活性成分、抑菌、促滲作用。

本實(shí)驗(yàn)建立了凝膠基質(zhì)與流體學(xué)參數(shù)相關(guān)關(guān)系函數(shù)，利用本法獲得外觀細(xì)膩、黏度適中、觸變性良好的復(fù)方丹參凝膠劑。通過(guò)透皮實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)復(fù)方丹參凝膠劑經(jīng)皮給藥能充分發(fā)揮其作用。