鄭春海 張祥宇

乳腺癌為臨床上常見(jiàn)的女性惡性腫瘤之一，在我國(guó)部分地區(qū)的發(fā)病率已位居第一位。而由于乳腺癌侵襲生長(zhǎng)和播散轉(zhuǎn)移的存在，使得患者的晚期治愈率明顯減低[1-2]。早期診斷乳腺癌，加強(qiáng)相關(guān)位點(diǎn)與標(biāo)志物的早期檢測(cè)，對(duì)于評(píng)估患者的預(yù)后具有重要意義[3-4]?，F(xiàn)代研究表明乳腺癌的發(fā)生是1個(gè)多基因變異積累及相互作用的復(fù)雜的過(guò)程，原癌基因的激活和抑癌基因功能喪失與乳腺癌發(fā)生密切相關(guān)[5]。15%左右的乳腺癌有家族遺傳背景，部分是由于高外顯率基因突變?cè)斐傻?，主要就是乳腺癌易感基?(breast cancer susceptible gene 1，BRCA1)和BRCA2[6]。BRCA1和BRCA2基因是目前所發(fā)現(xiàn)的最重要的乳腺癌易感基因之一，其突變形式主要為移碼突變、終止碼突變、錯(cuò)義突變等，歐美人群中家族性乳腺癌的BRCA1突變率較高，并且突變率與家族中具有乳腺癌病史的人數(shù)呈正相關(guān)[7-9]。相關(guān)研究出了發(fā)現(xiàn)BRCA1和BRCA2的致病性突變外，還有許多位點(diǎn)存在單核苷酸多肽(SNP)的現(xiàn)象，可能與乳腺癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)有關(guān)[10-11]。本文具體探討了乳腺癌患者BRCA1和BRCA2突變特點(diǎn)與臨床病理特征相關(guān)性，希望為闡述乳腺癌的遺傳病因機(jī)制以及為乳腺癌的早期診治奠定基礎(chǔ)。現(xiàn)總結(jié)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象

2016年2月到2018年2月選擇在我院腫瘤外科診治的乳腺癌患者140例作為研究對(duì)象，納入標(biāo)準(zhǔn)：經(jīng)病理確診，采樣前未經(jīng)放化療；女性；醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)了此次研究；患者在自愿條件下簽署了知情同意書(shū)；臨床與病理資料完整；單側(cè)發(fā)?。凰谢颊邿o(wú)血緣關(guān)系。排除標(biāo)準(zhǔn)：臨床資料不完整者；妊娠與哺乳期婦女；合并自身免疫性疾病等患者。年齡29～78歲，平均年齡(55.09±6.29)歲；分化程度：高分化74例，中分化36例，低分化30例；臨床分期：Ⅰ期40例，Ⅱ期45例，Ⅲ期40例，Ⅳ期15例；轉(zhuǎn)移情況：轉(zhuǎn)移100例，未轉(zhuǎn)移40例。

1.2 BRCA1和BRCA2突變檢測(cè)

取所有患者的癌組織樣本與癌旁組織標(biāo)本，后者均肉眼下取自癌組織0.5 cm之外黏膜，且經(jīng)組織病理學(xué)檢查均未見(jiàn)癌細(xì)胞浸潤(rùn)。用酚/氯仿法提取組織樣本的DNA，操作按天根Genomic DNA Kit 說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，選擇BRCA1和BRCA2的編碼區(qū)、5'和3'端非翻譯區(qū)、外顯子內(nèi)含子拼接區(qū)用PCR(聚合酶鏈反應(yīng))進(jìn)行擴(kuò)增，由在線引物設(shè)計(jì)程序進(jìn)行設(shè)計(jì)，由上海生工公司合成引物序列。PCR反應(yīng)體系為25 μl，95 ℃ 3 min預(yù)變性后進(jìn)行15個(gè)周期的溫度遞減循環(huán)，(94 ℃ 30 s，63 ℃～56 ℃ 1 min，每個(gè)周期遞減0.5 ℃，72 ℃ 1 min)，隨后20個(gè)周期恒溫循環(huán)(94 ℃ 30 s，56 ℃ 1 min，72 ℃ 1 min)，72 ℃延伸10 min。所有擴(kuò)增的序列測(cè)序后進(jìn)行Blast分析，所檢測(cè)到的位點(diǎn)在乳腺癌信息中心網(wǎng)站數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行比對(duì)，確定突變情況。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 22.00軟件對(duì)所有數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)(BRCA1和BRCA2突變頻率)以%、百分比表示，對(duì)比為χ2檢驗(yàn)，計(jì)量數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，對(duì)比為t檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Logistic 回歸分析與Spearman相關(guān)分析，以α=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。

2 結(jié)果

2.1 BRCA1和BRCA2突變對(duì)比

乳腺癌組織的BRCA1和BRCA2突變率分別為13.6%和14.3%，癌旁組織分別為0.7%和1.4%，對(duì)比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 不同組織的BRCA1和BRCA2突變情況對(duì)比(例，%)

2.2 BRCA1和BRCA2突變與與臨床病理特征的相關(guān)性

在140例癌組織中，不同臨床分期、分化程度與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組織中的BRCA1、BRCA2突變率對(duì)比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 BRCA1和BRCA2突變與臨床病理特征的相關(guān)性(例，%)

2.3 相關(guān)性分析

Spearman相關(guān)分析顯示乳腺癌組織的BRCA1與BRCA2突變呈現(xiàn)顯著正相關(guān)性(γ=0.672,P=0.000)。Logistic回歸分析顯示乳腺癌的臨床分期、分化程度與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移都為影響B(tài)RCA1、BRCA2突變的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05)。見(jiàn)表3與表4。

表3 影響乳腺癌組織BRCA1突變的主要因素

表4 影響乳腺癌組織BRCA2突變的主要因素

3 討論

乳腺癌是女性最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，在我國(guó)部分大城市已位居大城市女性腫瘤的第一位，乳腺癌的早發(fā)現(xiàn)、早診斷和早治療，是改善預(yù)后的有效途徑[12]?，F(xiàn)代研究證明乳腺癌的發(fā)生是環(huán)境因素和遺傳因素共同作用的結(jié)果，部分乳腺癌的發(fā)生有一定的家族遺傳傾向，許多外顯基因參與其中，改變了個(gè)體對(duì)乳腺癌發(fā)病因素的易感性[13-14]。不過(guò)當(dāng)前我國(guó)只有不到15%的遺傳性乳腺癌患者可檢測(cè)到BRCA1、BRCA2基因的致病性突變，多數(shù)遺傳性乳腺癌的遺傳因素并不明確[15]。

BRCA1和BRCA2是通過(guò)基因連鎖分析發(fā)現(xiàn)的與家族性發(fā)病密切相關(guān)的兩個(gè)基因。BRCA1位于人類染色體17q2l帶上，編碼1863個(gè)氨基酸，具有23個(gè)外顯子[16]。BRCA2位于人類染色體13q12帶上，編碼3418個(gè)氨基酸，包括27個(gè)外顯子。BRCA1和BRCA2是兩個(gè)功能復(fù)雜、涉及多條通路的關(guān)鍵基因，有研究顯示BRCA1突變攜帶者，在50歲時(shí)患乳腺癌的累計(jì)發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)為30%左右，到70歲時(shí)累計(jì)發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)為80%左右，特別是BRCA1突變組的對(duì)側(cè)乳腺癌發(fā)生率明顯升高，并且總生存期較短[17]。本研究顯示乳腺癌組織的BRCA1和BRCA2突變率分別為13.6%和14.3%，癌旁組織分別為0.7%和1.4%，對(duì)比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。還有研究顯示BRCA1和BRCA2是1個(gè)抑癌基因，BRCA1和BRCA2基因突變可造成機(jī)體對(duì)乳腺癌的易感性增高[18]。BRCA1和BRCA2基因突變?cè)l(fā)乳腺癌患者對(duì)側(cè)乳腺癌的25年累積發(fā)病率為50%左右，BRCA1突變者乳腺癌的年齡與對(duì)側(cè)乳腺癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)呈正相關(guān)[19]。

BRCA1和BRCA2相關(guān)性乳腺癌具有雌激素受體和孕激素受體陰性率高、CerbB-2陰性率高、p53陽(yáng)性率高特點(diǎn)。有研究顯示在雌激素受體陰性且腫瘤分級(jí)為Ⅲ級(jí)的乳腺癌患者中，不論是否具有乳腺癌家族史，BRCA1突變的檢出率高達(dá)30%左右，BRCA1基因突變患者更容易出現(xiàn)發(fā)病年齡低、腫瘤組織的分化程度差、更容易發(fā)生腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等病理特征[20-21]。本研究顯示在140例癌組織中，不同臨床分期、分化程度與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組織中的BRCA1、BRCA2突變率對(duì)比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。當(dāng)前也有研究顯示不同種族人群BRCA1和BRCA2突變率的報(bào)道差別很大，來(lái)自遺傳性乳腺癌家族的個(gè)體表現(xiàn)出最高的BRCA突變頻率，BRCA突變可雙側(cè)乳腺癌中具有很高的突變率[22-23]。

本研究Spearman相關(guān)分析顯示乳腺癌組織的BRCA1與BRCA2突變呈現(xiàn)顯著正相關(guān)性(γ=0.672,P=0.000)；Logistic回歸分析顯示乳腺癌的臨床分期、分化程度與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移都為影響B(tài)RCA1、BRCA2突變的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05)。相關(guān)研究顯示遺傳性乳腺癌中BRCA1基因突變檢出率更高，可達(dá)90%，帶BRCA1基因的女性至70歲以前發(fā)生乳腺癌的機(jī)率為70%左右，且其發(fā)生乳腺癌或卵巢癌的時(shí)間較散發(fā)性患者要早[24]。通過(guò)對(duì)攜帶BRCA1或者BRCA2基因突變的高危人群進(jìn)行篩查、隨訪和監(jiān)測(cè)，有利于乳腺癌的早發(fā)現(xiàn)。不過(guò)未對(duì)BRCA1和BRCA2突變相關(guān)性乳腺癌的免疫組化及病理特點(diǎn)進(jìn)行詳細(xì)回歸分析，主要由于是樣本數(shù)量比較少，待進(jìn)一步加大樣本量進(jìn)行分析。

總之，乳腺癌患者BRCA1和BRCA2突變比較常見(jiàn)，與臨床分期、組織學(xué)分化與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等病理學(xué)特征顯著相關(guān)。