郭 苗 李王麗

甲狀腺乳頭狀癌(papillary thyroid carcinoma，PTC)是甲狀腺癌最常見的組織學類型，占比在70%以上[1-2]。甲狀腺微小乳頭狀癌(papillary microcarcinoma，PMC)為直徑≤1 cm的甲狀腺乳頭狀癌，在臨床上具有惡性程度低、預后良好等特點，可長期處于亞臨床狀態(tài)，甚至終身無癥狀[3-4]，早期診斷可減少不必要的手術創(chuàng)傷及術后并發(fā)癥，改善患者的預后[5-6]。PMC的病理組織學多呈濾泡樣結(jié)構(gòu)，缺乏邊界，常無包膜；不過甲狀腺乳頭狀增生也常常會表現(xiàn)為有乳頭結(jié)構(gòu)，與PMC的病理特征有一定的相似，常規(guī)的影像學診斷可出現(xiàn)漏診情況[7]。長鏈非編碼RNA(LncRNA)是一類長度超過200 nt，不具有編碼蛋白質(zhì)功能的基因片段，在腫瘤細胞的增殖、凋亡、侵襲、轉(zhuǎn)移、分化中發(fā)揮重要作用[8]。BARF基因激活的非編碼RNA(BARF activated long non-coding RNA，BANCR)是新發(fā)現(xiàn)的一種lncRNA，BRAF基因可通過Ras/ERK信號通路參與調(diào)控細胞生長、分裂、凋亡、分化等生物學事件，其異常表達可能導致腫瘤形成[9]。有研究表明BANCR在肺癌、胃癌、結(jié)腸直腸癌、非小細胞肺癌等惡性腫瘤的發(fā)生和發(fā)展過程中起重要的作用[10-11]，但是在PMC中的表達情況還無相關報道。本文具體探討了PMC的病理特征與BANCR表達的相關性，現(xiàn)總結(jié)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

研究時間為2015年2月到2018年1月，選擇在我院診治的83例PMC患者作為觀察組。納入標準：符合PMC的診斷標準，且在術中得到確認；單側(cè)發(fā)病；均未接受放、化療；除外合并其它惡性腫瘤患者。同期選擇在我院診治的83例甲狀腺乳頭狀增生患者作為對照組，符合甲狀腺乳頭狀增生的診斷標準。2組患者的年齡、體重指數(shù)、發(fā)病位置、病灶直徑、性別等基線資料對比，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表1。2組患者的臨床與隨訪資料完整，研究得到了醫(yī)院倫理委員會的批準，患者也在自愿條件下簽署了知情同意書。

表1 2組一般資料對比

1.2 試劑與儀器

RNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、qRT-PCR試劑盒由大連TaKaRa公司提供，RNA提取試劑TRIzol購于美國Sigma公司。熒光實時定量PCR(real-timequantitative PCR， qRT-PCR)試劑盒購自上海生工公司。BANCR引物、GAPDH引物用DNAMAN軟件設計并由大連TaKaRa公司合成。

引物序列：GAPDH正向引物：5'-AGAGGCAGGGATGATGTTCTG-3'，反向引物：5'-GACTCATGACCACAGTCCATGC-3'；BANCR正向引物：5'-ACAGGACTCCATGGCAAACG-3'，反向引物：5'-ATGAAGAAAGCCTGGTGCAGT-3'。

1.3 檢測方法

采用TRLzol一步法提取2組病灶組織標本的總RNA，紫外分光光度計檢測RNA濃度，反轉(zhuǎn)錄為cDNA后，進行qRT-PCR操作(20 μl)：50×ROX mix 0.4 μl，SYBRqPCR Mix 10 μl，cDNA產(chǎn)物1 μl，上下游引物各1 μl(10 μmol/l)，加去RNase水補足至20 μl，反應條件：95 ℃預變性1 min，95 ℃ 15 s、60 ℃ 1 min，35個循環(huán)。根據(jù)公式2-ΔΔCt可以計算BANCR在不同組織中的相對表達量，相對表達量≥1.5為高表達。

1.4 病理數(shù)據(jù)收集

記錄觀察組患者的臨床病理參數(shù)，包括臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠處轉(zhuǎn)移、分化程度等。

1.5 統(tǒng)計方法

選擇SPSS 22.00軟件對本研究的計量數(shù)據(jù)與計數(shù)數(shù)據(jù)分析，以均數(shù)±標準差、率等進行表示，采用卡方χ2檢驗對計數(shù)數(shù)據(jù)進行分析，采用t檢驗對計量數(shù)據(jù)進行分析，多因素分析采用多因素逐步回歸方法，檢驗水準為α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 BANCR表達情況對比

觀察組BANCR相對表達量為(2.05±0.17)，高表達率為48.2%；對照組分別為(0.45±0.07)和3.6%，觀察組顯著高于對照組(P<0.05)，見表2。

表2 2組BANCR表達情況對比

2.2 BANCR表達與PMC病理特征的相關性

在觀察組中，BANCR高表達與PMC的臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠處轉(zhuǎn)移、分化程度都有顯著相關性(P<0.05)，見表3。

2.3 影響因素分析

在觀察組中，以BANCR高表達作為因變量，以臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠處轉(zhuǎn)移、分化程度作為自變量并給予賦值，多因素逐步回歸方法分析結(jié)果顯示臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠處轉(zhuǎn)移、分化程度均為BANCR高表達主要的危險因素(P<0.05)，見表4。

表3 PMC患者的BANCR表達與病理特征的相關性(例，%)

3 討論

PMC占甲狀腺癌總數(shù)的70.0%左右，女性發(fā)病率高于男性，當前在我國的發(fā)病人數(shù)和死亡人數(shù)呈上升趨勢[12]。雖然惡性腫瘤具有異質(zhì)性，但是由于PMC與良性腫瘤的臨床特點比較類似，導致診斷困難。雖然借助病理診斷可以減少漏診率，但是術中冰凍切片的局限性限制了診斷的準確率[13]。常規(guī)影像學診斷的特異性也有待提高，且檢查費用也相對比較高。為此建立可靠、可行的檢測手段，對于PMC患者的早期診斷和治療具有重要的臨床價值[14]。

研究表明PMC的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移是一個涉及多分子和多基因相互作用的復雜過程，其中腫瘤抑制基因的突變、原癌基因的異常表達等均與PMC發(fā)生發(fā)展相關[15]。LncRNAs可以調(diào)控蛋白編碼基因的表達，其是通過影響鄰近基因順式調(diào)節(jié)編碼蛋白質(zhì)的基因進行反式調(diào)節(jié)，并可參與調(diào)節(jié)細胞增殖、遷移、侵襲、凋亡和重新編程等過程[16]。相關研究證據(jù)顯示LncRNAs常常在多種不同腫瘤類型中呈現(xiàn)異常表達情況，與相關腫瘤的診斷和預后有一定的相關性[17]。BRAF基因位于7號染色體長臂，是鼠類肉瘤濾過性毒菌致癌同源體，為一種原癌基因。BRAF在細胞外環(huán)境和細胞核之間起著連接作用，可使2個酪氨酸激酶受體發(fā)生二聚化，可被多種生長因子及激素激活，進而活化下游蛋白，與腫瘤的生成、增殖、分化有很好的相關性。本研究顯示觀察組BANCR相對表達量為(2.05±0.17)，高表達率為48.2%；對照組分別為(0.45±0.07)和3.6%，觀察組顯著高于對照組(P<0.05)，表明BANCR在PMC中呈現(xiàn)高表達狀況。相關研究也發(fā)現(xiàn)BANCR可以通過自噬機制促進PMC的增殖，通過抑制細胞周期蛋白來影響甲狀腺癌細胞株TSHR的表達，影響甲狀腺癌細胞的增殖和生長[18]。

表4 PMC患者BANCR表達的影響因素分析(n=83)

PMC生長緩慢，可在甲狀腺內(nèi)局限數(shù)年至數(shù)十年，預后相對比較好，但其中也有大約15.0%的患者存在侵襲表型[19]。在病理診斷過程中，由于部分PMC的形態(tài)特征不明顯，特別是呈濾泡狀排列的病例，需要與某些增生性病變進行合理鑒別診斷。BANCR是一類位于人9號染色體上長度為693 bp的LncRNA，可在腫瘤細胞生長和轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮重要作用。BANCR能提高MEK/ERK通路的活性，降低E鈣黏素表達，改變整合素的表達，從而促進癌細胞侵襲和轉(zhuǎn)移[20]。相關研究也表明BANCR高表達組的生存時間較BANCR低表達組顯著縮短，提示BANCR的高表達可能與PMC的預后不良有關[21]。本研究顯示在觀察組中，BANCR高表達與腫瘤的臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠處轉(zhuǎn)移、分化程度都有顯著相關性(P<0.05)。相關研究表明BANCR可通過調(diào)節(jié)E-cadherin表達，在腫瘤細胞的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化中發(fā)揮重要作用，是腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中的關鍵因子[22]。

當前手術與放療治療PTC的效果比較好，但是依然有部分患者可出現(xiàn)復發(fā)與轉(zhuǎn)移情況。有研究顯示在甲狀腺癌組織及細胞中BANCR表達量較正常甲狀腺組織顯著升高，過表達BANCR能夠激活細胞自噬，抑制細胞凋亡，促進細胞的自我更新，從而促進甲狀腺癌細胞增殖[23]。本研究多因素逐步回歸方法分析結(jié)果顯示臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠處轉(zhuǎn)移、分化程度為BANCR高表達主要的危險因素(P<0.05)。相關研究也發(fā)現(xiàn)BANCR表達下調(diào)可促進上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化從而增強了肺癌侵襲性，增加了患者的不良預后風險[24]。不過本研究也有一定的局限性，樣本量還不夠大，沒有對患者預后進行隨訪，可能存在一定的研究偏差，將在下一步研究中進行深入分析。

總之，BANCR在PMC中呈現(xiàn)高表達狀況，與臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠處轉(zhuǎn)移、分化程度等病理特征有顯著相關性，有利于輔助鑒別診斷PMC。