王宇 高華偉

隨著科技的進(jìn)步，人們工作和生活的節(jié)奏大為加快，與職業(yè)、交通等相關(guān)的大面積組織缺損病例逐年增加［1］；組織缺損較多時(shí)，無(wú)法直接縫合，植皮修復(fù)創(chuàng)面有局部抗感染能力差、無(wú)法重建組織功能、瘢痕增生等問(wèn)題，同時(shí)骨骼、血管、神經(jīng)、肌腱外露不能植皮，只能選用皮瓣修復(fù)創(chuàng)面［2］，最常用的皮瓣是隨意皮瓣，隨意皮瓣的存活有較為嚴(yán)格的長(zhǎng)寬比限制，除面部等少數(shù)血供豐富的區(qū)域可達(dá)長(zhǎng)寬比3∶1外［3］，其他部位長(zhǎng)寬比一旦＞1.5～2∶1，皮瓣遠(yuǎn)端就會(huì)出現(xiàn)缺血壞死。前列地爾是一種高生物活性的內(nèi)源性物質(zhì)，其作用為擴(kuò)張血管，抑制血小板的聚集，增加紅細(xì)胞的變形能力［4］。本文探討前列地爾對(duì)大鼠超長(zhǎng)皮瓣存活面積的影響及機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及試劑 SD大鼠40只，體重（250±30）g，雌雄不限，由西南醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（TGF-β）、白介素-1β（IL-1β）酶聯(lián)免疫夾心ELISA法檢測(cè)試劑盒均購(gòu)自北京博奧森生物技術(shù)有限公司，前列地爾注射液購(gòu)自北京泰德制藥股份有限公司。實(shí)驗(yàn)時(shí)間2016年3月至8月。

1.2 皮瓣模型制作及藥物處理 動(dòng)物模型的建立：術(shù)前1d 7% 硫化鈉對(duì)腹部脫毛，術(shù)前6h禁食飲水，12%水合氯醛300mg/kg腹腔注射麻醉，麻醉完成后將大鼠仰臥位固定于操作臺(tái)上，碘伏消毒、鋪巾，在大鼠腹部制作長(zhǎng)×寬為9cm×3cm達(dá)深筋膜層的隨意皮瓣模型，切口周圍以碘伏消毒后涂金霉素軟膏，防止局部感染。40只大鼠隨機(jī)分為觀察組和對(duì)照組，每組各20只。觀察組：術(shù)后即刻及連續(xù)7d，腹腔注射前列地爾稀釋液（5μg前列地爾加入500ml生理鹽水）10ml/（kg·d）。對(duì)照組：術(shù)后即刻及連續(xù)7d，腹腔注射生理鹽水10ml/（kg·d），術(shù)后大鼠單籠飼養(yǎng)，均為其帶上頸套防止大鼠自我回咬傷口［5］。為避免手術(shù)操作帶引起誤差，所有手術(shù)均由同一組醫(yī)師完成，確保實(shí)驗(yàn)室通氣良好，將室溫控制在21℃～23℃。

1.3 觀察指標(biāo) （1）皮瓣存活率：皮瓣壞死以皮膚顏色變黑、組織回縮彈性差、質(zhì)地變硬、切割組織不出血為標(biāo)準(zhǔn)。術(shù)后第7d，乙醚麻醉大鼠后，仰臥位放置于良田高拍儀上，掃描后予Image-proplus 6軟件分析皮瓣壞死區(qū)域，計(jì)算皮瓣存活率（皮瓣存活表面積/皮瓣總面積×100%）［6］。（2）ELISA檢測(cè)血清VEGF、IL-1β、TGF-β1含量：每只大鼠于皮瓣存活率檢查完成后行斷尾取血約5ml，離心后取血清，-80℃凍存，依照試劑說(shuō)明書嚴(yán)格操作，檢測(cè)VEGF、IL-1β、TGF-β1含量。（3）病理切片：觀察皮瓣中段血管再生及皮下組織情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用 SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以（±s）表示，組間比較用t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 皮瓣存活面積比較 觀察組皮瓣壞死面積較小，存活面積比（75.13±5.26）%，遠(yuǎn)端基底炎癥反應(yīng)較輕，表皮質(zhì)軟，觸之有出血；對(duì)照組皮瓣壞死面積大，存活面積比（49.55±2.85）%，遠(yuǎn)端表面發(fā)黑、質(zhì)硬，焦痂狀，基底有嚴(yán)重炎癥反應(yīng)，切割組織不出血。觀察組皮瓣成活面積比顯著高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），見(jiàn)圖1。

2.2 血清VEGF、TGF-β1含量 與對(duì)照組比較，觀察組血清VEGF、TGF-β1含量均顯著升高，而IL-1β則明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表1。

圖1 兩組組腹部皮瓣的成活面積比較

表1 術(shù)前與術(shù)后血清VEGF、IL-1β、TGF-β1含量比較［ng/L，（±s）］

表1 術(shù)前與術(shù)后血清VEGF、IL-1β、TGF-β1含量比較［ng/L，（±s）］

分組 VEGF IL-1β TGF-β1觀察組 1854.65±175.23 180.25±56.10 97.07±5.92對(duì)照組 1425.08±109.29 218.21± 15.95 78.44±3.40 P值 0.02 0.03 ＜0.01

2.3 皮瓣中段血管再生及組織狀況比較 觀察組血管輕度擴(kuò)張，新生血管明顯，炎細(xì)胞浸潤(rùn)較輕，皮下纖維組織增生明顯，見(jiàn)圖2。對(duì)照組皮下組織萎縮，血管新生不明顯，大量炎細(xì)胞浸潤(rùn)，皮下纖維增生不明顯，見(jiàn)圖3。

圖2 觀察組（HE×100）

圖3 對(duì)照組（HE×100）

3 討論

皮瓣靜脈危象的重要原因是吻合口或血管蒂部血管痙攣、扭曲、損傷、狹窄或血栓形成，使血液回流不暢引起皮瓣血運(yùn)循環(huán)障礙［7］，病理特征表現(xiàn)為微血管數(shù)量減少，紅細(xì)胞聚集，白色血栓形成等，較長(zhǎng)時(shí)間缺血再次獲得血液灌注或供氧時(shí)，皮瓣情況不但不會(huì)改善，反而加重組織損傷即缺血再灌注損傷，及時(shí)恢復(fù)皮瓣血供可明顯降低靜脈危象和缺血再灌注損傷的發(fā)生率，當(dāng)皮瓣生成新生血管時(shí)，其微循環(huán)可明顯好轉(zhuǎn)［8］。

前列地爾不僅能抑制毛細(xì)血管平滑肌收縮、減少血小板聚集、抑制血栓烷 A2 生成、減少紅細(xì)胞聚集、增加紅細(xì)胞變形能力，還能作用于血管內(nèi)皮，從而減少其分泌內(nèi)皮素，使內(nèi)皮型一氧化氮合酶的活性和表達(dá)升高，增加血清一氧化氮含量，發(fā)揮抑制神經(jīng)損傷、預(yù)防和逆轉(zhuǎn)動(dòng)脈粥樣脂質(zhì)斑塊的作用，前列地爾也可以促進(jìn)血管生成減輕組織的缺血再灌注損傷［9］，并通過(guò)上調(diào)Wnt信號(hào)通路促進(jìn)創(chuàng)面愈合［10］。VEGF能特異性地直接作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞并促進(jìn)其增殖分化，加快皮瓣與受區(qū)及切口緣之間新生血管的形成和血運(yùn)的重建，改善皮瓣遠(yuǎn)端微循環(huán)［11］，TGF-β1是血小板、循環(huán)纖維細(xì)胞、巨噬細(xì)胞及部分免疫細(xì)胞等分泌的細(xì)胞因子，可促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的出芽和管腔形成，加快膠原沉積和血管新生，與VEGF有協(xié)同作用［12］。

綜上所述，前列地爾能夠顯著提高大鼠血清VEGF及TGF-β1含量、減少IL-1β含量，促進(jìn)新生血管的生成，降低機(jī)體炎性反應(yīng)的強(qiáng)度［13］，減輕皮瓣組織水腫，提高皮瓣存活面積，及皮瓣轉(zhuǎn)移術(shù)成功率，為臨床擴(kuò)大皮瓣應(yīng)用范圍提供良好實(shí)驗(yàn)依據(jù)。