華帥 丁雄 熊光軼

【摘 要】 目的：優(yōu)選辣木籽茶的最佳制備工藝條件。方法：以辣木籽總黃酮的包合率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，利用正交試驗(yàn)L9（34）優(yōu)選辣木籽醇提浸膏的包合條件。采用單因素試驗(yàn)，以合格率、總黃酮的釋放量、外觀性狀為評(píng)價(jià)指標(biāo)，優(yōu)選辣木籽茶的最佳制備工藝。結(jié)果：辣木籽醇提浸膏包合物最佳包合條件為：超聲時(shí)間30min、β-環(huán)糊精質(zhì)量與醇提浸膏質(zhì)量比3∶1、超聲功率100w、冷藏時(shí)間3h。辣木籽茶最佳制備工藝：以EC+MCC（EC∶MCC=1∶1）為稀釋劑、以10%EC為黏合劑擠壓成型。結(jié)論：此辣木籽茶制備工藝可操作性強(qiáng)，且工藝穩(wěn)定。

【關(guān)鍵詞】? 辣木籽;總黃酮;包合物;辣木籽茶;成型工藝;研究

【中圖分類號(hào)】R284.1 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號(hào)】1007-8517（2019）3-0029-05

辣木 （ Moringa oleifera） 為辣木科辣木屬多年生木本植物，原產(chǎn)于熱帶、南亞熱帶的干旱或半干旱地區(qū)?，F(xiàn)在，世界上大約有 30 多個(gè)國(guó)家開展辣木引種栽培，中國(guó)的廣東、廣西、海南、四川和云南等省份分別從印度、緬甸等國(guó)家引進(jìn)辣木種子或者栽培技術(shù)，興起了辣木的規(guī)?；N植的熱潮，目前初步形成了一定數(shù)量的辣木原料種植基地[1]。辣木籽作為純天然綠色食品，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)含量非常豐富，食用辣木籽可預(yù)防疾病、延緩衰老、改善睡眠、增強(qiáng)免疫力和記憶力[2]。經(jīng)初步分析，辣木籽中含有黃酮類化合物。黃酮類化合物的生理活性比較廣泛，具有清除自由基、抗氧化、抗癌、防癌、治療心血管病、降血糖等作用。近年來對(duì)辣木的開發(fā)已成熱點(diǎn)，但從辣木籽中提取黃酮類化合物的研究鮮有報(bào)道[3]。

包合技術(shù)是指一種分子包合于另一種分子的空穴結(jié)構(gòu)內(nèi)形成包合物的技術(shù)。這種包合物由主分子和客分子組成，主分子具有較大空穴結(jié)構(gòu)，它將客分子容納在空穴中形成分子囊。其主要作用歸結(jié)如下：增加藥物的穩(wěn)定性;增加藥物溶解度;減少刺激和毒副作用;調(diào)節(jié)釋藥速度;提高藥物生物利用度;用于有效成分含量測(cè)定[4]。本研究以辣木籽為原料，經(jīng)水提、醇提后，將辣木籽乙醇提的浸膏制備成包合物，加入輔料，擠壓制備出辣木籽茶，不僅掩蓋原辣木籽不良?xì)馕?，更使辣木籽茶湯色透亮、口感較佳。

1 儀器與材料

1.1 儀器 UV-1800型紫外可見分光光度計(jì)（上海翱藝儀器有限公司）;FA2014電子分析天平（上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司）;JA-20001電子天平（廣州玉治儀器有限公司）;DLSB-5/10低溫冷卻液循環(huán)泵（鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司）;SG250HPT超聲波清洗器（上海冠特超聲儀器有限公司）;HH-4數(shù)顯恒溫水浴鍋（國(guó)華電器有限公司）;BCD-186KB冰箱（青島海爾股份有限公司）;電熱鼓風(fēng)干燥箱（北京市光明醫(yī)療儀器廠）;JBZ-300型多功能微丸包衣造粒機(jī)（中國(guó).遼寧醫(yī)聯(lián)新藥技術(shù)研究所）。

1.2 材料 辣木籽（經(jīng)云南中醫(yī)學(xué)院鑒定教研室楊竹雅副教授鑒定）為辣木科（Moringa-ceae） 辣木屬（ Moringa Adans） 植物辣木的種子;β-環(huán)糊精、乙基纖維素（EC）、微晶纖維素（MCC）、淀粉、聚維酮（PVP）、聚乙二醇6000均為藥用輔料（安徽山河藥用輔料股份有限公司）;醫(yī)用酒精（廣東華光科技股份有限）;蘆丁對(duì)照品（批號(hào)：PRF8012042，成都普瑞法科技開發(fā)有限公司）;純凈水（昆明娃哈哈啟力飲料有限公司）。

2 方法

2.1 總黃酮含量的測(cè)定

2.1.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取蘆丁對(duì)照品6mg，用少量60%乙醇溶解，再定容至25mL，充分搖勻，備用。

2.1.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 分別取蘆丁對(duì)照品溶液0、0.50、1.00、1.50、2.00、2.50于25mL容量瓶中，各加5%NaNO2溶液1mL，放置6min后，加10%A1（ NO3 ） 3溶液1mL，放置6min，加4%NaOH溶液10mL，用60%乙醇溶液定容至刻度，搖勻。以不加對(duì)照溶液的相應(yīng)溶液為空白，在510nm處測(cè)定吸光度[8-9]，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2.1.3 辣木籽總黃酮含量測(cè)定 將辣木籽原藥材粉碎，精密稱取5g置于500mL圓底燒瓶中，加40mL60%乙醇回流提取2h，收集濾液，濾渣加入30mL60%乙醇回流提取1h，合并兩次濾液于100mL容量瓶中，濾渣用60%乙醇洗滌3次，定容。精密量取5mL溶液按2.1.2項(xiàng)下顯色方法進(jìn)行顯色，測(cè)定藥材中的總黃酮含量。

2.1.4 辣木籽醇提浸膏總黃酮含量測(cè)定 精密稱取0.5g醇提浸膏于25mL容量瓶中，加入適量60%乙醇，超聲30min，用60%乙醇定容至刻度。濾過，取續(xù)濾液即供試品溶液，備用。按2.1.2項(xiàng)下顯色方法進(jìn)行顯色，測(cè)定各浸膏中總黃酮的含量。

2.1.5 辣木籽醇提浸膏包合物中總黃酮含量測(cè)定 精密稱取0.5gβ-環(huán)糊精于25mL容量瓶中，加入適量60%乙醇，超聲30min，用60%乙醇定容至刻度。濾過，取續(xù)濾液按2.1.2項(xiàng)下顯色方法進(jìn)行顯色，置200～800nm波長(zhǎng)下掃描。

精密稱取辣木籽醇提浸膏包合物0.5g于25mL容量瓶中，加入無水乙醇適量，超聲30min，用60%乙醇定容至刻度，濾過;精密量取續(xù)濾液5mL溶液按2.1.2項(xiàng)下顯色方法進(jìn)行顯色，測(cè)定辣木籽醇提浸膏包合物的總黃酮含量，并按包合率計(jì)算方法計(jì)算黃酮包合率。

包合率（%）=（辣木籽包合物質(zhì)量×包合物中的總黃酮含量）/（辣木籽黃酮浸膏質(zhì)量×浸膏中總黃酮含量）×100%

2.1.6 辣木籽茶中總黃酮累積釋放量測(cè)定 精密稱取適量辣木籽茶，按照傳統(tǒng)泡茶方法，加入100mL沸水沖泡15min，過濾，濾渣按上述操作繼續(xù)沖泡三次，濾過;精密量取續(xù)濾液5mL溶液按2.1.2項(xiàng)下顯色方法進(jìn)行顯色，測(cè)定辣木籽茶總黃酮的含量，并計(jì)算總黃酮釋放量。黃酮釋放量=C1V1+C2V2+C3V3+C4V4……

2.2 辣木籽茶的制備

2.2.1 辣木籽乙醇提取工藝研究 以辣木籽醇提浸膏中總黃酮的轉(zhuǎn)移率為評(píng)價(jià)指標(biāo)， 采用L9 （ 34 ）正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，進(jìn)行微波提取。因數(shù)水平表見表1。

2.2.2 辣木籽水提工藝研究 以辣木籽水提干膏得率為評(píng)價(jià)指標(biāo)， 采用L9 （34 ）正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，進(jìn)行煎煮提取。因數(shù)水平表見表2。

2.2.3 辣木籽醇提浸膏包合物制備正交試驗(yàn)設(shè)計(jì) 采用超聲法制備，稱取適量β-CD置于燒杯中，加一定量的水?dāng)嚢柚苽涑娠柡腿芤?。將辣木籽醇提浸膏溶于適量的70%乙醇，再將其緩慢加入β-CD飽和溶液中，混合后超聲，冷藏，抽濾，用乙醇洗滌，沉淀低溫干燥，稱重即得[10]。以包合物的包合率為考察指標(biāo)，以超聲時(shí)間、主客分子比、超聲功率、冷藏時(shí)間為因素，設(shè)計(jì)四因素三水平實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見表3。

2.2.4 辣木籽茶的制備方法 取辣木籽醇提浸膏包合物12g、未包合醇提浸膏5g、辣木籽水提浸膏4g、稀釋劑10g混合均勻，并加入適量黏合劑，擠壓成型，干燥，整粒，即得辣木籽茶。

2.2.5 輔料的篩選 ① 稀釋劑的篩選以合格率、總黃酮釋放量、外觀性狀為評(píng)價(jià)指標(biāo)，以淀粉、乙基纖維素（EC）、微晶纖維素（MCC）、乙基纖維素+微晶纖維素（EC+MCC）為稀釋劑，按2.2.1項(xiàng)進(jìn)行制備。②黏合劑篩選以合格率、外觀性狀為評(píng)價(jià)指標(biāo)，分別以10%淀粉、3%聚維酮（PVP）、30%聚乙二醇6000（PEG6000）、3%EC為黏合劑，按2.2.1進(jìn)行制備。

2.3 驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn) 取三份藥材，每份2kg，經(jīng)水提、醇提;醇提后，將辣木籽醇浸膏制備包合物，并與未包合醇提浸膏、辣木籽水提浸膏按比例混合，加入輔料擠壓制備成辣木籽茶。

3 結(jié)果

3.1 總黃酮含量測(cè)定

3.1.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線 標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為Y=7.5868X-0.003（R2=0.9993），結(jié)果表明：蘆丁在0.0048～0.0384mg/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。如圖1所示。

3.1.2 辣木籽包合物中總黃酮含量測(cè)定 經(jīng)200～800nm波長(zhǎng)下掃描，β-環(huán)糊精在510nm處無吸收。

3.2 辣木籽茶的制備

3.2.1 辣木籽乙醇提取工藝研究正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)結(jié)果 由表4中分析，最終確定最佳工藝條件為A1B3C3D2，即微波提取時(shí)間為3min，料液比1∶10，乙醇濃度為80%，提取次數(shù)為2次。

3.2.2 辣木籽水提工藝研究正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)結(jié)果 從表5中分析，最終確定最佳工藝條件為A1B3C3，即煎煮時(shí)間為1h，料液比1∶10，煎煮3次。

3.2.3 辣木籽醇提浸膏包合物制備正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)結(jié)果 從表6中分析，最佳包合工藝為A1B3C1D1，各因素的影響程度為D>B>C>A。直觀分析得到超聲法的最佳包合條件為超聲時(shí)間為30min、β-環(huán)糊精質(zhì)量與醇提浸膏的質(zhì)量比為3∶1超聲功率為100w、冷藏時(shí)間為3h。

3.2.4 辣木籽茶制備方法結(jié)果 稀釋劑篩選結(jié)果：由表7數(shù)據(jù)分析可篩選出稀釋劑為EC+MCC。外觀性狀顆粒干燥、均勻、色澤一致，無吸潮、軟化、結(jié)塊、潮解等現(xiàn)象。黃酮釋放量操作及計(jì)算見2.1.6。由表8數(shù)據(jù)分析可篩選出稀釋劑比例為EC+MCC。

3.4 驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn) 由表12可知，辣木籽醇提浸膏包合物12.00g、未包合醇提浸膏5.31g、辣木籽水提浸膏4.39g、稀釋劑為EC+MCC為10g（EC∶MCC=1∶1）、黏合劑為10%EC6.00mL的條件穩(wěn)定。

4 討論

本實(shí)驗(yàn)中通過正交試驗(yàn)得出了辣木籽醇提浸膏β-CD包合物的最佳包合條件，該工藝具有對(duì)設(shè)備能耗條件要求較低、實(shí)際包合率均較高的特點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)通過制備成包合物增加了辣木籽茶中黃酮的溶解度，解決了辣木籽黃酮水溶性差、口服吸收效果不好的問題。用β-CD制備的辣木籽黃酮包合物可進(jìn)一步制備成其它劑型。本實(shí)驗(yàn)將辣木籽原藥材制備成辣木籽茶，其合格率較高，并且有效地改善了湯色和口感，增加服用者的接受度。按照傳統(tǒng)泡茶方法，需將茶沖泡四次，并且黃酮釋放不宜過快，本實(shí)驗(yàn)按照最佳工藝制備的辣木籽茶，能達(dá)到一個(gè)較好的釋放效果，并為辣木籽的進(jìn)一步綜合開發(fā)利用提供參考依據(jù)。

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（收稿日期：2018-12-04 編輯：程鵬飛）