張琳++周潤天++李興華

摘要：目的考察不同提取方法對生、制骨碎補(bǔ)中總黃酮提取效果的影響。方法分別采用超聲提取法、索氏提取法、回流提取法對骨碎補(bǔ)生品和砂燙品進(jìn)行提取，通過紫外-可見分光光度（UV-Vis）法檢測總黃酮的含量。結(jié)果回流提取法測得的總黃酮含量最高。結(jié)論骨碎補(bǔ)中總黃酮的提取方法以回流提取法為佳。

關(guān)鍵詞：骨碎補(bǔ)；總黃酮；提取方法

中圖分類號：R284文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B文章編號：1007-2349（2016）11-0075-02

骨碎補(bǔ)是較常用中藥，具有補(bǔ)腎強(qiáng)骨、養(yǎng)傷止痛之功效，用于腎虛腰痛、耳鳴耳聾、牙齒松動、跌撲閃挫、筋骨傷折等癥[1]。其活性成分是以柚皮苷為主的二氫黃酮類化合物[2]。筆者采用超聲提取法、索氏提取法、回流提取法3種方法提取生、制骨碎補(bǔ)中總黃酮的含量，以比較不同提取方法對總黃酮提出量的影響。

1實(shí)驗(yàn)材料

1.1儀器752紫外分光光度計(jì)（上海菁華科技儀器有限公司）；電子天平（賽多利斯科學(xué)儀器有限公司）。

1.2藥品骨碎補(bǔ)藥材（購于亳州市藥材總公司第二中藥批發(fā)部）；骨碎補(bǔ)生品和砂燙品均按《中國藥典》一部方法制備[1]。柚皮苷（批號110722-201312，購于中國藥品生物制品檢定所）；甲醇為AR級。

2方法與結(jié)果

2.1樣品提取方法

2.1.1超聲提取法取骨碎補(bǔ)生品及砂燙品粗粉于70℃干燥8 h，各精密稱取1.0 g，加甲醇80 mL，超聲提取1 h。提取液濾過，置于100 mL容量瓶中，用甲醇定容至100 mL。

2.1.2索氏提取法取骨碎補(bǔ)生品及砂燙品粗粉于70℃干燥8 h，各精密稱取1.0 g，置于索氏提取器中，加80 mL甲醇，抽提1 h，將提取液轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶中，甲醇定容至刻度。

2.1.3回流提取法取骨碎補(bǔ)生品及砂燙品粗粉于70℃干燥8 h，各精密稱取1.0 g，加甲醇80 mL水浴回流提取1 h，提取液濾過，置于100 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度。

2.2總黃酮含量測定

2.2.1供試品溶液的制備精密吸取上述三種提取方法提取液各1 mL至25 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，作為供試品溶液。

2.2.2對照品溶液的制備精密稱取柚皮苷標(biāo)準(zhǔn)品4.9 mg，置于50 mL容量瓶中，以甲醇定容至刻度，作為對照品溶液（0.098 mg/mL）。

2.2.3標(biāo)準(zhǔn)曲線制備精密吸取對照品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5.、3.0 mL置于10 mL容量瓶中，分別以甲醇定容至刻度，以甲醇為空白在283 nm處測定吸收度。以吸收值（A）為縱坐標(biāo)，濃度（C）為橫坐標(biāo)，得標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程：A=0.052C+0.0208，r=0.9996，線性范圍為4.9～19.6 ug/mL。

2.2.4精密度試驗(yàn)取對照品溶液，進(jìn)行6次平行實(shí)驗(yàn)，測定含量。結(jié)果表明RSD為0.36%（n=6），精密度良好。

2.2.5重復(fù)性試驗(yàn)取同一批骨碎補(bǔ)生品粗粉，按超聲提取法制備供試品溶液，并測定含量，結(jié)果表明RSD為2.96%。

2.2.6穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一供試品溶液5份，分別在0、30、60、90、120 min時(shí)測定A值，結(jié)果表明RSD為0.55%，供試品溶液在2 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.7加樣回收率試驗(yàn)精密稱取已知總黃酮含量（1.34%）的骨碎補(bǔ)生品粗粉5份，每份0.2 g，分別精密加入1.29 mg/mL柚皮苷對照品溶液2 mL，按超聲提取法制備供試品溶液，并測定含量，計(jì)算回收率，平均回收率為98.05%，RSD為2.43%。

2.2.8各樣品的含量測定分別取上述各供試品溶液，以甲醇為空白，283 nm為測定波長，測定吸收值。將測得的吸收值A(chǔ)代入回歸方程，計(jì)算濃度，結(jié)果見表2。

2討論

從以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果來看，在三種提取方法中，用回流法提取最好，快速提取率高，索氏提取法其次，超聲法提取率最低。

參考文獻(xiàn)：

[1]國家藥典委員.中華人民共和國藥典.一部[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社：2010：239-240.

[2]周銅水，周榮漢.骨碎補(bǔ)對大鼠實(shí)驗(yàn)性骨損傷愈合的影響[J].中草藥，1994，25（5）：249-251.

（收稿日期：2016-07-16）