韓 雪，王雅冰，郝建雄*宮彬彬，李研東，趙丹丹， 白利琴， 顧夢(mèng)茹， 郭旭茜， 王 雯

（1.河北科技大學(xué)，河北石家莊 050018；2.邢臺(tái)學(xué)院，河北邢臺(tái) 054001；3.河北省獸藥監(jiān)察所，河北石家莊 050035）

細(xì)菌素（Bacteriocin）是某些細(xì)菌產(chǎn)生的具有抗菌活性的多肽、蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)復(fù)合物，細(xì)菌素由核糖體合成，可殺死與產(chǎn)生菌種屬相近的其他細(xì)菌（Perez等，2018）。乳酸菌細(xì)菌素不僅具有與抗生素相似的抗菌作用，而且不會(huì)在動(dòng)物體內(nèi)蓄積而引起不良反應(yīng)，無副作用、無殘留、無抗藥性，不污染環(huán)境 ，它的使用可以降低飼料的殺菌溫度，從而較好的保持飼料的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和風(fēng)味（付燕等，2009）。棉籽榨油后的副產(chǎn)物棉籽粕仍然具有一定的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，其蛋白質(zhì)含量通常為33%～35%。但是由于棉籽粕含有有毒成分棉酚，動(dòng)物長(zhǎng)期采食會(huì)引起慢性中毒，因而限制了棉籽粕在畜牧養(yǎng)殖業(yè)中的應(yīng)用（劉建成等，2018）。

為了驗(yàn)證發(fā)酵棉籽粕的飼喂效果和功能性，本研究以海蘭褐殼蛋雞為試驗(yàn)對(duì)象，從病死率、產(chǎn)蛋能力、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化率、腸道pH、腸道微生物數(shù)量、免疫器官指數(shù)、骨骼肌ATP水平等方面進(jìn)行分析評(píng)價(jià)，旨在提高棉籽粕的利用率，降低飼料原料成本。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 試驗(yàn)選取體重相近，生產(chǎn)性能良好均一的50周齡海蘭褐殼蛋雞240只，隨機(jī)分為四組，每組 60只。分別置于立體籠的上、中、下 3層飼養(yǎng)，基礎(chǔ)飼糧參照《雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)》（NY/T33-2004）蛋雞營(yíng)養(yǎng)需要配制。對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)飼糧，試驗(yàn)組分別在基礎(chǔ)飼糧中添加20%、40%、60%乳酸菌發(fā)酵棉籽粕（表1），預(yù)試期 3 d，試驗(yàn)期為 45 d。

表1 日糧組成與營(yíng)養(yǎng)水平%

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 蛋雞抗病效果分析 每天觀察雞群的精神、食欲、健康狀況等情況，記錄死亡數(shù)、病雞數(shù)，計(jì)算發(fā)病率、死亡率。

發(fā)病率/%=組內(nèi)已發(fā)病蛋雞數(shù)量/組內(nèi)總雞數(shù)×100；

死亡率/%=整個(gè)試驗(yàn)期組內(nèi)死亡雞只數(shù)/組內(nèi)總雞數(shù)×100。

1.2.2 生產(chǎn)性能分析 日常觀察記錄產(chǎn)蛋數(shù)、蛋重、總采食量，用以計(jì)算各組雞的平均日采食量、產(chǎn)蛋率、平均蛋重、料蛋比、日產(chǎn)蛋量、軟破殼率（馬曉婷等，2017）。

1.2.3 營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率測(cè)定 試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，采集飼料樣本和糞樣測(cè)定以下指標(biāo)：酸不溶灰分、粗蛋白質(zhì)、粗脂肪、粗灰分，計(jì)算表觀代謝能（李笑櫻等，2011）。

1.2.4 腸道pH測(cè)定 試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，每組選取6只蛋雞取回腸和結(jié)腸內(nèi)容物冷凍保存，用于測(cè)定腸道 pH（劉炎等，2014）。

1.2.5 腸道微生物 試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，每組隨機(jī)選取5只雞稱重、記錄并屠宰取樣。取回腸內(nèi)容物，并迅速冷凍保存，采用平板計(jì)數(shù)法測(cè)定其中微生物菌群數(shù)量（大腸桿菌、乳酸菌、雙歧桿菌）。

1.2.6 免疫器官指數(shù) 試驗(yàn)結(jié)束后，每組隨機(jī)選取3只雞，將選取的雞稱重后屠宰，摘取脾臟稱重。

脾臟指數(shù)/%=脾臟鮮重/雞活種×100。

1.2.7 血清中抗體效價(jià) 分別在試驗(yàn)的第30天和第45天，每個(gè)重復(fù)各選取 2只體重接近的健康蛋雞，翅靜脈采血，分離血清，-20℃保存，采用血凝抑制試驗(yàn)法分別測(cè)定新城疫和禽流感抗體效價(jià)。

1.2.8 ATP水平測(cè)定 利用ATP與熒光素+熒光素酶的熒光反應(yīng)原理，采用ATP檢測(cè)試劑盒制備ATP標(biāo)準(zhǔn)曲線和測(cè)定骨骼肌樣品中ATP含量。

1.3 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析 各項(xiàng)指標(biāo)測(cè)試結(jié)果以“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，用SPSS 13.0軟件進(jìn)行單因素方差分析。用LSD方法對(duì)各組間數(shù)據(jù)進(jìn)行多重比較，以 P ＜ 0.05（差異顯著），P ＜ 0.01（差異極顯著），P＞0.05（差異不顯著）作為差異顯著性判斷標(biāo)準(zhǔn)。

圖2中豎坐標(biāo)表示子批量，縱坐標(biāo)表示選擇的工藝路線，橫坐標(biāo)表示工藝路線下的所有工序；式(25)中，數(shù)組O=[ot,r]4×r分別記錄了工序加工所選擇的機(jī)床、刀具、夾具、搬運(yùn)設(shè)備，r表示工序個(gè)數(shù)；式(26)中，數(shù)組W=[we,r]w×r存儲(chǔ)了調(diào)度過程中工序在機(jī)床上加工的順序。

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 發(fā)酵棉籽粕對(duì)蛋雞抗病能力的影響 如圖1所示，發(fā)酵棉籽粕添加量為40%時(shí)，蛋雞的發(fā)病率為1.73%，死亡率為0.18%，與對(duì)照組相比，均具有顯著性差異（P＜0.05）。該結(jié)果說明在相同的飼喂環(huán)境下，產(chǎn)細(xì)菌素乳酸菌發(fā)酵棉籽粕的適量添加，可提高蛋雞的免疫能力，有效降低蛋雞的發(fā)病率與死亡率。

圖1 發(fā)酵棉籽粕對(duì)蛋雞抗病能力的影響

2.2 發(fā)酵棉籽粕對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能的影響 由表2可知，試驗(yàn)組產(chǎn)蛋率、平均蛋重、料蛋比和軟破殼率等指標(biāo)與對(duì)照組相比均不存在顯著性差異（P＞0.05）。但是，40%組蛋雞的平均日采食量為165.17 g，與對(duì)照組相比差異顯著（P ＜ 0.05），說明在基礎(chǔ)飼料中添加40%發(fā)酵棉籽粕可以有效提高蛋雞的采食量，對(duì)蛋雞的健康維持具有一定意義。

表2 發(fā)酵棉籽粕對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能的影響

2.3 發(fā)酵棉籽粕對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化率的影響 由表3可知，發(fā)酵棉籽粕組能量、纖維、脂肪、鈣消化利用率與對(duì)照組相比無顯著差異 （P＞0.05），但是，飼喂添加40%、60%發(fā)酵棉籽粕的蛋雞對(duì)蛋白質(zhì)和磷的利用率明顯提高，分別提高65.68%和65.25%、34.69%和 34.79%（P ＜0.05）。

表3 蛋雞日糧營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化率%

2.4 發(fā)酵棉籽粕對(duì)蛋雞腸道pH的影響 腸道pH的穩(wěn)定可保證腸道內(nèi)環(huán)境的平衡與健康，更利于營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收。由表4可知，與對(duì)照組相比，添加不同比例的發(fā)酵棉籽粕飼喂蛋雞后，蛋雞回腸與結(jié)腸內(nèi)的pH并沒有發(fā)生顯著性變化，均維持在7.20～7.51。但是，隨著發(fā)酵棉籽粕添加量的增加，回腸內(nèi)pH有一定的下降趨勢(shì)。

2.5 發(fā)酵棉籽粕對(duì)蛋雞腸道微生物數(shù)量的影響與對(duì)照組相比，發(fā)酵棉籽粕組腸道內(nèi)大腸桿菌群數(shù)量有降低的趨勢(shì)，其中添加60%發(fā)酵棉籽粕組的大腸桿菌數(shù)量降到了5.72 lg cfu/g（mL），與對(duì)照組的6.73 lg cfu/g（mL）相比，存在顯著性差異（P＜0.05）。同時(shí)，發(fā)酵棉籽粕組腸道內(nèi)乳酸菌數(shù)量有提高的趨勢(shì)，40%組乳酸菌的數(shù)量可達(dá)到9.72 lg cfu/g（mL）（P ＜ 0.05）。 結(jié)果如表 5所示。

2.6 發(fā)酵棉籽粕對(duì)蛋雞免疫器官指數(shù)的影響由圖2可以看出，添加發(fā)酵棉籽粕對(duì)蛋雞的脾臟指數(shù)并未產(chǎn)生顯著影響（P＞0.05）。

圖2 發(fā)酵棉籽粕對(duì)蛋雞脾臟指數(shù)的影響

圖3 骨骼肌ATP水平

3 討論

飼喂發(fā)酵棉籽粕后，試驗(yàn)組（40%）蛋雞的發(fā)病率與對(duì)照組相比均顯著降低，這說明采用產(chǎn)細(xì)菌素乳酸菌發(fā)酵的棉籽粕飼喂蛋雞后其抗病能力有所提高，這與蛋雞免疫力、身體素質(zhì)的提高具有一定的相關(guān)性，在后續(xù)的脾臟指數(shù)測(cè)定試驗(yàn)結(jié)果中也得到證實(shí)。

益生菌是一類對(duì)宿主健康有益的活性微生物,定植于動(dòng)物腸道或生殖系統(tǒng)內(nèi)，具有提高消化酶活性、維持腸道微生態(tài)平衡及調(diào)節(jié)宿主黏膜與免疫系統(tǒng)等功能（謝強(qiáng)等，2017）。Abd El-Hack等（2017）研究表明，飼喂枯草芽孢桿菌后，蛋雞的產(chǎn)蛋性能和抗病能力顯著提高。本研究中，試驗(yàn)組蛋雞腸道pH維持穩(wěn)定，大腸桿菌數(shù)量下降1.01 lg cfu/g（mL）（60%組），乳酸菌數(shù)量提高 0.19 lg cfu/g（mL）（40%組）。日糧中添加40%發(fā)酵棉籽粕組的平均日采食量與對(duì)照組相比提高了10 g，產(chǎn)蛋率提高了一個(gè)百分點(diǎn)。結(jié)果說明乳酸菌發(fā)酵棉籽粕的添加對(duì)蛋雞的腸道內(nèi)環(huán)境和生產(chǎn)性能均有良好的穩(wěn)定與提高作用。

有益微生物在體內(nèi)產(chǎn)生的各種消化酶，可以將淀粉、纖維素、半纖維素、果膠等分解為葡萄糖、半乳糖酸，產(chǎn)生能量并提高飼料轉(zhuǎn)化率。閆鳳蘭等（1996）研究表明，肉雞日糧中添加枯草芽孢桿菌后空腸內(nèi)容物中可消化淀粉酶活性顯著提高 （P＜0.05）。趙新海等（2008）發(fā)現(xiàn)，微生態(tài)益生菌發(fā)酵飼料可代替部分豆粕、魚粉和抗生素、復(fù)合酶的使用，降低飼料成本，并能改善飼養(yǎng)環(huán)境，提高肉蛋品質(zhì)。本研究中，飼喂發(fā)酵棉籽粕后，蛋雞對(duì)蛋白質(zhì)和磷的利用率均有所提高。蛋白質(zhì)與機(jī)體各個(gè)器官的功能密切相關(guān)，蛋白質(zhì)利用率的提高對(duì)蛋雞的身體素質(zhì)、生長(zhǎng)發(fā)育與生產(chǎn)能力都將產(chǎn)生有利影響。機(jī)體對(duì)磷的消化吸收增加可提高鈣的吸收效率，促進(jìn)生長(zhǎng)發(fā)育，對(duì)其所產(chǎn)蛋品質(zhì)有積極的影響。

4 結(jié)論

產(chǎn)細(xì)菌素乳酸菌發(fā)酵棉籽粕飼喂蛋雞，在提高蛋雞免疫力及抗病力的同時(shí)，能夠較好的提高蛋雞對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化與利用能力。