何亞濤，高丹丹，甘森寧，孫婷，蔡葵蒸，劉俊林

（西北民族大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院，蘭州 730124）

隨著人們對食品安全問題的普遍關(guān)注，綠色無公害的天然色素的使用便引起了人們的重視[1-2]。紅曲色素作為我國傳統(tǒng)的紅色天然食用色素，近些年來發(fā)現(xiàn)其不僅可用于食品染色，還具有抑制膽固醇合成、降低血壓、抗疲勞、治療骨質(zhì)疏松、預(yù)防老年癡呆等多種保健功能。紅曲色素穩(wěn)定性好，安全性高，并不斷有新的功效被發(fā)現(xiàn)，值得深入研究[3-4]。

藥用植物內(nèi)生真菌普遍存在于健康植物組織和器官中，種類繁多，分布廣泛，是一個巨大的菌種資源寶庫[5]。雖然許多種藥用植物的化學(xué)成分及藥效功能已明確，但是其共生的微生物類群及其和微生物的生理互作還有待闡明[6]。植物 懷 地 黃（Rehmannia glutinosa）為玄參科（Scrphulariaceae）地黃屬（Rehmannia）多年生草本植物，有清熱涼血，養(yǎng)陰生津的功效[7]。近幾年的研究表明，懷地黃內(nèi)生菌及其代謝產(chǎn)物具有抑菌、促生等活性作用[8-9]。

紅曲霉（Monascus）為子囊菌門（Ascomycecota）散囊菌目（Eurotiales）的絲狀真菌。至今，紅曲霉屬及其屬內(nèi)物種的分類地位在國際上都沒有被統(tǒng)一。血紅紅曲霉（Monascus sanguineus）于1995年被分離于伊拉克的阿拉伯河（Shatt-al-Arab River）[10]，還曾在印度尤納塔克邦（Karnataka）的石榴（Punica granatum）中被分離得到[11]。盡管在我國紅曲霉應(yīng)用歷史悠久，但菌種來源相對單一，大多分離自紅曲米、釀酒大曲、發(fā)酵糟、紅腐乳、丟糟、酒醅等材料中[12-15]。菌種的分類地位大都為紅色紅曲霉進(jìn)化枝（SectionRubri），包括紅色紅曲霉（M.ruber）和紫色紅曲霉（M.purpureus）[16]。本研究從藥用植物懷地黃中首次分離得到能夠產(chǎn)生豐富可溶性紅色素的內(nèi)生真菌M.sanguineus，為我國紅曲霉屬菌種拓展了新的來源，通過2個M.sanguineus培養(yǎng)菌株的形態(tài)學(xué)觀察和基因序列分析相結(jié)合的手段對菌株RJL03進(jìn)行了詳細(xì)的描述和鑒定，初步探討了菌種M.sanguineus與M.purpureus的關(guān)系，為懷地黃及紅曲霉屬真菌的進(jìn)一步研究和開發(fā)應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 材料來源

藥用植物懷地黃于2016年10月采自河南省焦作市武陟縣北郭鄉(xiāng)東安村地黃人工種植基地（海拔97 m，35.01°N，113.20°E），取回后立即進(jìn)行內(nèi)生真菌分離（圖1）。菌株M.sanguineus（SICC 3.292）購自四川省工業(yè)微生物菌種保藏管理中心（Sichuan Center of Industrial Culture Collection,SICC）。

圖1 藥用植物材料懷地黃Fig.1 Plant material Rehmannia glutinosa

1.1.2 培養(yǎng)基

馬鈴薯葡萄糖瓊脂（potato dextrose agar,PDA）培養(yǎng)基（貨號：P8931）、麥芽浸粉瓊脂（malt extract agar,MEA）培養(yǎng)基（貨號：LA4980），購自北京索萊寶科技有限公司；查氏酵母膏瓊脂（Czapek yeast extract agar,CYA）培養(yǎng)基（貨號：M4208B），購自山東拓普生物工程有限公司。

1.1.3 主要試劑和儀器

2.5%戊二醛固定液（貨號：P1126），購自北京索萊寶科技有限公司；1×磷酸鹽緩沖液（貨號：SH30256.01），購自美國HyClone公司；Taq酶（貨號：DTM-101），購自日本東洋紡公司；HWS型智能恒溫恒濕箱，購自寧波東南儀器有限公司；BME生物顯微鏡，購自上海徠卡顯微系統(tǒng)有限公司；JSM-5600LV低真空掃描電子顯微鏡，購自日本電子光學(xué)公司。

1.2 內(nèi)生真菌的分離培養(yǎng)

取新鮮的懷地黃塊根先在自來水下沖洗干凈，并在無菌條件下，依次用70%乙醇表面殺菌1 min，無菌水沖洗3次，0.1%氯化汞溶液浸泡3 min，最后用無菌水清洗5次，晾干。再將其切成0.5 cm×1 cm×0.5 cm的小塊，然后接種于含有1%雙抗溶液（mycillin，100 IU/L）的PDA培養(yǎng)基上，于28℃環(huán)境下培養(yǎng)3～5 d，待懷地黃塊周圍長出真菌后，轉(zhuǎn)移到新鮮PDA培養(yǎng)基上，直至得到菌落單一的純化菌株[17]。將分離得到的菌株RJL03用于后續(xù)試驗(yàn)。

1.3 真菌的形態(tài)學(xué)鑒定

將菌株RJL03和SICC 3.292分別接種于PDA、MEA、CYA培養(yǎng)基上，置于25℃環(huán)境下培養(yǎng)7 d。其間記錄其生長速率并詳細(xì)描述其菌落特征。光學(xué)顯微鏡觀察采用透明膠帶法制片，在載玻片上滴1滴乳酸酚棉藍(lán)染液，用透明膠帶將菌絲粘上。在菌絲面滴1滴乙醇，放在有染液的玻片上，再在膠帶上表面滴1滴染液，覆上蓋玻片，置于顯微鏡下觀察菌絲、孢子、孢子梗、孢子囊等的顯微特征。掃描電鏡觀察采用插片培養(yǎng)法培養(yǎng)菌株，待菌絲爬片后輕輕取出蓋玻片進(jìn)行處理。附有菌的玻片放入2.5%的戊二醛固定液中固定4 h以上，然后用1×磷酸鹽緩沖液漂洗3次。采用不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)梯度（50%、70%、80%、90%、95%、100%）的乙醇依次浸泡脫水20 min，最后轉(zhuǎn)入純的乙酸異戊酯中置換1 h，噴金后進(jìn)行菌株形態(tài)觀察[18]。

1.4 真菌基因組提取及序列擴(kuò)增

使用真菌基因組提取試劑盒提取菌株RJL03和SICC 3.292 的 DNA，使 用 通 用 引 物 ITS1（5′-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3′）/ITS4（5′-TCCT CCGCTTATTGATATGC-3′）對rDNA的ITS片段進(jìn)行擴(kuò)增，進(jìn)行聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction,PCR），反應(yīng)條件為：94℃預(yù)變性2 min；94 ℃變性30 s，50.3 ℃退火30 s，68 ℃延伸90 s，35個循環(huán)；最后72℃延伸7 min。使用通用引物NS1（5′-GTAGTCATATGCTTGTCTC-3′）/NS8（ 5′-TCCG CAGGTTCACCTACGG-3′）對rDNA的18S片段進(jìn)行擴(kuò)增。PCR反應(yīng)條件為：94℃預(yù)變性4 min；94℃變性45 s，50.3 ℃退火30 s，68 ℃延伸1 min 45 s，35個循環(huán)；最后72℃延伸10 min。PCR擴(kuò)增采用20 μL反應(yīng)體系，包括預(yù)混Taq酶 10 μL，ddH2O 6.6 μL，DNA 1.8 μL，上下游引物各 0.8 μL[19]。PCR 產(chǎn)物經(jīng)1%的瓊脂糖凝膠電泳檢測并純化后送至天津金唯智生物科技有限公司進(jìn)行雙向測序。

1.5 真菌的系統(tǒng)發(fā)育學(xué)分析

對雙向測序得到的基因序列拼接并檢查，將測序結(jié)果提交到GenBank。使用菌株RJL03的ITS和18S rDNA序列作為查詢序列，在NCBI（https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi）中進(jìn)行BLAST比對，下載與查詢序列相似的序列，得到15條18S rDNA序列，17條ITS rDNA序列，所得序列用于后續(xù)的系統(tǒng)發(fā)育分析。采用MAFFT網(wǎng)頁服務(wù)器（https://mafft.cbrc.jp/alignment/server/）對同源序列進(jìn)行多序列比對，使用MEGA 7.0軟件手動調(diào)整序列[20]。核苷酸替換模型使用MrModeltest 2.3進(jìn)行選擇，采用raxmlGUI 1.5軟件[21]按照最大似然法（maximum likelihood,ML）構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，其中自展數(shù)（bootstrap）為1 000，模型為GTR+I。

2 結(jié)果和分析

2.1 產(chǎn)紅色素真菌的形態(tài)學(xué)鑒定

RJL03培養(yǎng)7 d后，CYA培養(yǎng)基上菌落直徑為24～26 mm，PDA上為28～31 mm，MEA上為29～32 mm（圖2A～C）。菌株在CYA培養(yǎng)基上生長受限，而在PDA與MEA上生長速率相當(dāng)。在不同培養(yǎng)基上，菌落初均為白色，后產(chǎn)色素變紅，絨氈狀，可溶性紅色素在MEA培養(yǎng)基中存在最為明顯。菌絲分枝，分隔；分生孢子倒梨形，單生或至多10個成短鏈狀，大小為（8.0～16.5）μm×（7.5～14.0）μm；孢子囊球形，外殼褐色，直徑32～70 μm；孢子梗菌絲狀，子囊孢子橢圓形，子囊孢子橢圓形，大小為（6.0～7.5）μm×（4.0～5.0）μm，表面平滑，無色或紅色（圖2D～G）。菌株SICC 3.292（非模式菌株）與RJL03宏觀形態(tài)略有不同，其產(chǎn)色素量較RJL03略低，而微觀形態(tài)基本一致。通過與《真菌鑒定手冊》等資料[22-25]比對，可以確定菌株RJL03為紅曲霉屬（Monascus）物種。然而，僅依據(jù)形態(tài)學(xué)特征很難準(zhǔn)確地將物種鑒定到種一級水平，尤其是紅曲霉屬的物種分類還未被統(tǒng)一，這更加給RJL03物種的確定增加了難度。因此，我們進(jìn)一步采用序列分析的分子學(xué)手段來獲得更多的分類信息。

2.2 真菌的ITS和18S序列分析

測序后得到菌株RJL03和SICC 3.292的18S序列長度分別為1655和1680bp。整理后提交GenBank，獲得ITS序列號為MF175372和MF372833。如圖3所示，根據(jù)18S rDNA序列構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹可以看出，RJL03與SICC 3.292菌株處于同一分支，親緣關(guān)系最近，相似度達(dá)93%。而且可以看出，物種M.sanguineus進(jìn)化枝與M.purpureus進(jìn)化枝親緣關(guān)系較近，相似度達(dá)91%。18S rDNA序列在進(jìn)化上比較保守，同屬菌株的18S rDNA序列堿基差異較小，在系統(tǒng)發(fā)育研究中可以鑒定到屬及以上。而且GenBank中除本研究得到的2條M.sanguineus的18S序列外，無可用比對序列，故進(jìn)一步對ITS rDNA序列進(jìn)行分析。ITS區(qū)進(jìn)化較快，在真菌的種間存在著豐富的變異，而在種內(nèi)不同菌株間卻高度保守，可以用它鑒定到種及以下水平。

測序得到RJL03和SICC 3.292菌株的ITS序列長度分別為589和584 bp（序列號分別為MF175371和MF372832）。如圖4所示，根據(jù)ITS序列構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹可以看出，5個M.sanguineus菌株處于同一分支，親緣關(guān)系達(dá)100%。另外，物種M.sanguineus與M.purpureus進(jìn)化枝親緣關(guān)系較近，相似度達(dá)92%。M.sanguineus、M.purpureus和M.ruber與其他4個紅曲霉屬物種親緣關(guān)系較遠(yuǎn)。結(jié)合形態(tài)學(xué)結(jié)果及根據(jù)2個基因序列的分析結(jié)果，可將RJL03鑒定為血紅紅曲霉（Monascus sanguineus），并且菌株SICC 3.292也被確定為物種M.sanguineus。

圖2 內(nèi)生真菌RJL03的形態(tài)特征Fig.2 Morphology of endophytic fungi RJL03

3 討論

本研究根據(jù)形態(tài)觀測和序列分析的結(jié)果將RJL03鑒定為M.sanguineus。但值得提出的是，BARBOSA等[16]在2017年采用多相方法對紅曲霉屬的研究中，根據(jù)多基因序列分析暫時提出將M.sanguineus與M.purpureus視為同一物種，在圖3和圖4中的M.sanguineus、M.purpureus和M.ruber被視為紅色紅曲霉組合（SectionRubri），保留其下2個物種M.purpureus和M.ruber，另外的如M.floridanus等7個物種被視為佛羅里達(dá)紅曲霉組合（SectionFloridani）。其中佛羅里達(dá)紅曲霉組合中的7個物種親緣關(guān)系都較遠(yuǎn)，把它們分別視為獨(dú)立物種無疑，但是廣泛存在于我國的紅色紅曲霉組合中的物種來源復(fù)雜，其內(nèi)物種多樣性問題值得深入研究[10-11,26]。本研究中在同條件下培養(yǎng)對比SICC 3.292與RJL03發(fā)現(xiàn)其培養(yǎng)特征仍有差異。與BARBOSA等[16]的M.purpureus對比存在較大差別，故本研究傾向于大多數(shù)學(xué)者的觀點(diǎn)，仍視M.sanguineus為獨(dú)立物種[23，25，27-29]。

圖3 基于18S rDNA序列的RJL03與SICC 3.292進(jìn)化樹Fig.3 Maximum likelihood tree based on RJL03 and SICC 3.292 18S rDNAgene sequences

圖4 基于ITS rDNA序列的RJL03與SICC 3.292進(jìn)化樹Fig.4 Maximum likelihood tree based on RJL03 and SICC 3.292 ITS rDNAgene sequences

目前關(guān)于M.sanguineus所產(chǎn)紅色素的應(yīng)用研究還不是很多，有如RASHMI等采用響應(yīng)面法對其液態(tài)發(fā)酵產(chǎn)色素條件進(jìn)行優(yōu)化，紅色素產(chǎn)量可達(dá)55.67 CVU/mL[11]，并對其作為天然紅色素潛在來源進(jìn) 行 了 探 索[30]。 稻 屬 植 物（Oryzaspp.）是M.sanguineus好的固態(tài)發(fā)酵底物，該紅色素有革蘭氏陽性細(xì)菌的抑菌活性，可產(chǎn)生霉桔素（citrinin）[31]。另外，筆者也對該菌作為天然紅色素的來源進(jìn)行了探索，發(fā)現(xiàn)其固態(tài)培養(yǎng)菌絲中紅色素提取液最大吸收波長在515 nm處[17]，而液態(tài)發(fā)酵液中水溶性色素成分不單一，最大吸收波長在474 nm處[32]，色素產(chǎn)量較高，存在進(jìn)一步進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵或液態(tài)發(fā)酵研究其產(chǎn)紅色素最佳條件的價值。

本研究從購自河南焦作人工種植的懷地黃中初步分離得到了13株植物內(nèi)生真菌，這些真菌包括青霉屬（Penicilliumsp.）、曲霉屬（Aspergillussp.）、木霉屬（Trichodermasp.）等，并且首次從懷地黃中分離鑒定得到了Monascus sanguineus描述種，拓寬了紅曲霉屬菌種資源的來源。初步探討了M.sanguineus與M.purpureus的關(guān)系，認(rèn)為M.sanguineus應(yīng)為獨(dú)立物種，以期為紅曲霉屬菌種資源的分類鑒定及開發(fā)利用提供理論依據(jù)。

參考文獻(xiàn)(References):

［1］徐春明,王曉丹,焦志亮.食用微生物色素的研究進(jìn)展.中國食品添加劑,2015(2):162-168.XU C M,WANG X D,JIAO Z L.Research progress of edible pigments by microorganisms.China Food Additives,2015(2):162-168.(in Chinese with English abstract)

［2］張水軍,張軍兵,熊勇.天然食用色素的研究進(jìn)展.中國食品添加劑,2014(8):172-177.ZHANG S J,ZHANG J B,XIONG Y.Research advances of natural food pigment.China Food Additives,2014(8):172-177.(in Chinese with English abstract)

［3］周文斌,賈瑞博,李燕,等.紅曲色素組分、功效活性及其應(yīng)用研究進(jìn)展.中國釀造,2016,35(7):6-10.ZHOU W B,JIA R B,LI Y,et al.Research progress of components,biological activity and application ofMonascuspigment.Forum and Summary,2016,35(7):6-10.(in Chinese with English abstract)

［4］賈氏臣,孟金明,穆紅霞,等.紅曲菌發(fā)酵產(chǎn)物中的新功能性成分及功效的研究進(jìn)展.中國食品添加劑,2015(4):179-184.JIASC,MENGJM,MUHX,etal.Advancesofnewfunctional ingredients and efficacy onMonascusfermented products.China Food Additives,2015(4):179-184.(in Chinese with English abstract)

［5］邢曉科.藥用植物內(nèi)生真菌資源:一個亟待開發(fā)的寶庫.菌物學(xué)報,2018,37(1):14-21.XING X K.Endophytic fungal resource of medicinal plants:a treasure need to be developed urgently.Mycosystema,2018,37(1):14-21.(in Chinese with English abstract)

［6］郭順星.藥用植物內(nèi)生真菌研究現(xiàn)狀和發(fā)展趨勢.菌物學(xué)報,2018,37(1):1-13.GUO S X.The recent progress and prospects of research on endophytic fungi in medicinal plants.Mycosystema,2018,37(1):1-13.(in Chinese with English abstract)

［7］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典:一部.北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2015:124-125.Chinese Pharmacopoeia Commission.Pharmacopoeia of the People’s Republic of China:1st part.Beijing:China Medical Science Press,2015:124-125.(in Chinese)

［8］楊清香,謝永生,張昊,等.懷地黃活性內(nèi)生菌的分離鑒定及抗菌抗腫瘤活性.微生物學(xué)通報,2010,37(10):1467-1474.YANG Q X,XIE Y S,ZHANG H,et al.Isolation,identification and antagonism on microorganisms and cancer cells by active endophytes fromRehmannia glutinosaLibosch.Microbiology China,2010,37(10):1467-1474.(in Chinese with English abstract)

［9］元輝明,朱金華,馬廣強(qiáng).地黃內(nèi)生菌的分離鑒定及其抑菌活性測定.江西中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報,2015,27(1):86-88.YUAN H M,ZHU J H,MAG Q.Isolation,identification and antibacterial activities of endophytes in freshRehmannia.Journal of Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine,2015,27(1):86-88.(inChinesewithEnglishabstract)

［10］CANNON P F,ABDULLAH S K,ABBAS B A.Two new species ofMonascusfrom Iraq,with a key to known species of the genus.Mycological Research,1995,99(6):659-662.

［11］RASHMI D,PADMAVATHI T.Statistical optimization of pigment production byMonascus sanguineusunder stress condition.Preparative Biochemistry&Biotechnology,2014,44(1):68-79.

［12］王柱,宋萍,張曉娟,等.紅曲霉菌種資源的收集及標(biāo)準(zhǔn)化整理.食品與發(fā)酵科技,2012,48(3):10-12.WANG Z,SONG P,ZHANG X J,et al.Collection and standardized arrangement of resources forMonascusstrains.Food and Fermentation Technology,2012,48(3):10-12.(in Chinese with English abstract)

［13］孫艷君.紅曲中紅曲菌的分離、鑒定及產(chǎn)色素的研究.武漢:武漢工業(yè)學(xué)院,2011:9-18.SUN Y J.Isolation,identification and pigment production research ofMonascusfrom red yeast rice.Wuhan:Wuhan Polytechnic University,2011:9-18.(in Chinese with English abstract)

［14］許璐.分子標(biāo)記技術(shù)在紅曲菌菌種鑒別中的應(yīng)用.武漢:華中農(nóng)業(yè)大學(xué),2007:19-30.XU L.Application of molecular markers for the identification strains inMonascusspp.Wuhan:Huazhong Agricultural University,2007:19-30.(in Chinese with English abstract)

［15］邢旺興,蘇國同,王曉明.關(guān)于紅曲霉分類地位的認(rèn)識.解放軍藥學(xué)學(xué)報,2004,20(2):119-121.XING W X,SU G T,WANG X M.Knowledge about the status ofMonascustaxa.Pharmaceutical Journal of Chinese People’s Liberation Army,2004,20(2):119-121.(in Chinese)

［16］BARBOSA R N,LEONG S L,VINNERE-PETTERSSON O,et al.Phylogenetic analysis ofMonascus,and new species from honey,pollen and nests of stingless bees.Studies in Mycology,2017,86:29-51.

［17］何亞濤,高丹丹,鄭田留,等.產(chǎn)紅色素真菌Monascus sanguineus的分離及其色素提取條件研究.天然產(chǎn)物研究與開發(fā),2017(11):1952-1958.HE Y T,GAO D D,ZHENG T L,et al.Isolation and extraction optimization of red pigment fromMonascus sanguineus.Natural Product Research and Development,2017(11):1952-1958.(in Chinese with English abstract)

［18］QIU M,XIE R S,SHI Y,et al.Isolation and identification of endophytic fungus SX01,a red pigment producer fromGinkgo bilobaL.World Journal of Microbiology and Biotechnology,2010,26(6):993-998.

［19］王曉敏,王惠,劉天行,等.一株不產(chǎn)生孢子的鹽生海蘆筍內(nèi)生真菌鑒定.食品科學(xué),2013,34(17):146-149.WANG X M,WANG H,LIU T X,et al.Identification of sterile endophytic fungus isolated fromSalicornia bigelovii.FoodScience,2013,34(17):146-149.(in Chinese with English abstract)

［20］KUMAR S,STECHER G,TAMURA K.MEGA7:molecular evolutionary genetics analysis version 7.0 for bigger datasets.Molecular Biology&Evolution,2016,33(7):1870-1874.

［21］DANIELE S,INGO M.raxmlGUI:a graphical front-end for RAxML.Organisms Diversity&Evolution,2012,12(4):335-337.

［22］魏景超.真菌鑒定手冊.上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社,1979:129-134.WEI J C.Fungal Identification Manual.Shanghai:Shanghai Science and Technology Press,1979:129-134.(in Chinese)

［23］李鐘慶.紅曲霉屬的一個新種.微生物學(xué)報,1982,22(2):118-122.LI Z Q.A new species of the genusMonascus.Acta Microbiologica Sinica,1982,22(2):118-122.(in Chinese with English abstract)

［24］LI Z Q,GUO F.A further studies on the species ofMonascus.Mycosystema,2004,23(1):1-6.

［25］WEI Y H,HSIEH S Y,YUAN G F,et al.Re-identification ofMonascusstrains based on molecular and morphological characteristics.Fungal Science,2012,27(2):139-145.

［26］MANAN M A,SAMAT N,KASRAN M,et al.Proximate and amino acids composition ofMonascusfermented products with potential as functional feed ingredients.Cogent Food&Agriculture,2017,3(1):1295767.

［27］PARK H G,JONG S C.Molecular characterization ofMonascus,strains based on the D1/D2regions of LSU rRNA genes.Mycoscience,2003,44(1):25-32.

［28］SHAO Y C,LEI M,MAO Z J,et al.Insights intoMonascus,biology at the genetic level.Applied Microbiology&Biotechnology,2014,98(9):3911-3922.

［29］CHEN W P,HE Y,ZHOU Y X,et al.Edible filamentous fungi from the speciesMonascus: early traditional fermentations,modern molecular biology,and future genomics.Comprehensive Reviews in Food Science&Food Safety,2015,14(5):555-567.

［30］RASHMID,PADMAVATHIT.ExploringMonascus sanguineusas a potential natural source for pigment production.International Research Journal of Biological Sciences,2013,2(5):59-67.

［31］DIKSHIT R,TALLAPRAGADA P.Comparative study ofMonascus sanguineusandMonascus purpureusas potential sources for red pigment production.International Journal of Pharma&Bio Sciences,2012,3(4):885-895.

［32］何亞濤,劉俊林,鄭青波,等.產(chǎn)紅色素真菌Monascussanguineus的液態(tài)發(fā)酵條件研究.天然產(chǎn)物研究與開發(fā),2018(3):438-443.HE Y T,LIU J L,ZHENG Q B,et al.Optimization of flask fermentation conditions for the production of red pigment fromMonascus sanguineus.Natural Product Research and Development,2018(3):438-443.(in Chinese with English abstract)