王鵬杰，岳川，陳笛，鄭玉成，鄭知臨，林浥，楊江帆，葉乃興

（福建農(nóng)林大學(xué)園藝學(xué)院/茶學(xué)福建省高校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，福州 350002）

茶樹[Camellia sinensis(L.)O.Ktunze]作為一種多年生常綠木本植物，是我國南方最重要的經(jīng)濟(jì)作物之一，茶葉的優(yōu)質(zhì)、高產(chǎn)、穩(wěn)產(chǎn)與茶樹品種、栽培環(huán)境及栽培措施密切相關(guān)。茶樹喜溫怕寒，其生長及茶葉加工生產(chǎn)易受多種自然災(zāi)害制約[1]。

植物WRKY基因家族是一類對生長發(fā)育及逆境脅迫響應(yīng)有著重要作用的轉(zhuǎn)錄因子家族[2]，每個(gè)家族成員均含有1個(gè)或2個(gè)由60個(gè)氨基酸組成的WRKY結(jié)構(gòu)域，N端具有高度保守的WRKYGQK核心基序，該序列的氨基酸突變會導(dǎo)致DNA結(jié)合活性的顯著減弱；而C端通常為一段鋅指結(jié)構(gòu)C2H2（C-X4-5-C-X22-23-H-X-H）或C2HC（C-X7-C-X23-H-X-C）。WRKY轉(zhuǎn)錄因子通過特異性結(jié)合靶基因啟動子區(qū)域的W-box元件以調(diào)節(jié)相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄[3]。自1994年ISHIGURO等首次從甘薯中克隆得到第1個(gè)WRKY轉(zhuǎn)錄因子SPF1[4]以來，研究者已相繼在煙草[5]、楊樹[6]、擬南芥[7]、棉花[8]等植物上鑒定得到WRKY轉(zhuǎn)錄因子。近年來，隨著部分植物基因組數(shù)據(jù)的公布，發(fā)現(xiàn)擬南芥WRKY基因家族至少有74個(gè)成員[9]，番茄有81個(gè)[10]，楊樹有104個(gè)[11]，蘋果有132個(gè)[12]。已有大量研究表明，WRKY轉(zhuǎn)錄因子產(chǎn)物作為正調(diào)控或者負(fù)調(diào)控蛋白參與多種生物及非生物脅迫的響應(yīng)調(diào)節(jié)[13-14]；此外，還作為重要調(diào)節(jié)因子參與植物胚胎發(fā)育、種子萌發(fā)、葉片衰老、生物合成途徑及激素信號傳導(dǎo)等生理發(fā)育過程[15-17]。例如轉(zhuǎn)白菜BcWRKY46基因的煙草對低溫、鹽害及滲透脅迫的敏感性降低[18]；AtWRKY18和AtWRKY60作為正調(diào)控因子參與脫落酸（abscisic acid,ABA）信號途徑，抑制擬南芥種子萌發(fā)、根生長及對鹽脅迫和滲透脅迫的敏感性[7]；青蒿中的AaWRKY1可與倍半萜合酶紫穗槐-4，11-二烯合酶基因（amorpha-4,11-diene synthase,ADS）啟動子區(qū)域中的W-box元件結(jié)合，從而激活A(yù)DS基因表達(dá)來促進(jìn)青蒿素的生物合成[19]；辣椒CaWRKY40可通過介導(dǎo)水楊酸（salicylic acid,SA）、茉 莉 酸（jasmonic acid,JA）、乙 烯（ethylene,ETH）信號途徑來防御青枯病的入侵，并提高植株的耐熱性[20]。

目前,對茶樹WRKY轉(zhuǎn)錄因子的研究較少，美國國立生物技術(shù)信息中心（National Center for Biotechnology Information,NCBI）上 僅 公 布 了CsWRKY2（JQ739460.1）和CsWRKY40（JQ820201.1）2條WRKY基因序列。相關(guān)研究在茶樹轉(zhuǎn)錄組上通過生物信息學(xué)鑒定的方法初步得到50和45個(gè)WRKY轉(zhuǎn)錄因子[21-22]；另有報(bào)道表明,茶樹CsWRKY2和CsWRKY57通過介導(dǎo)ABA信號途徑參與非生物脅迫響應(yīng)[23-24]。相比于擬南芥、煙草、水稻等模式植物，茶樹WRKY轉(zhuǎn)錄因子的轉(zhuǎn)錄調(diào)控研究才剛起步。本研究根據(jù)茶樹基因組[25]數(shù)據(jù)，以茶樹品種‘鐵觀音’cDNA為模板，克隆獲得茶樹基因CsWRKY6、CsWRKY31和CsWRKY48的cDNA序列，對它們進(jìn)行生物信息學(xué)分析，探索其在不同組織、低溫條件、干旱條件和ABA濃度脅迫下的表達(dá)模式，為系統(tǒng)研究WRKY基因在茶樹逆境脅迫中的功能提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 材料及其處理

以茶學(xué)福建省高校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室種植的生長健壯、無病原菌的兩年生盆栽‘鐵觀音’茶樹為試驗(yàn)材料，參考姚雪倩等[26]的方法采集以下4類樣品：1）對茶樹根、莖、嫩葉、老葉、花和果實(shí)等6個(gè)不同組織部位進(jìn)行取樣；2）對置于人工氣候室4℃低溫處理0、6、12、24、48、72 h后的茶樹部位進(jìn)行取樣；3）對用10%聚乙二醇-6000（PEG-6000）模擬干旱處理0、6、12 h后的茶樹部位進(jìn)行取樣；4）對茶樹葉片均勻施用外源100 μmol/L的ABA溶液處理0、6、12、24、48、72 h后的茶樹部位進(jìn)行取樣。其中3類模擬脅迫處理的樣品均取枝條頂端第2—3片成熟葉為樣品，設(shè)3次重復(fù)，并用錫箔紙包裹標(biāo)記，液氮速凍后存于－80℃冰箱中，備用。

1.2 總RNA提取及cDNA合成

使用天根多糖多酚植物總RNA提取試劑盒提取樣品總RNA，用NanoDrop2000超微量分光光度計(jì)檢測總RNA的濃度和純度，用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測總RNA質(zhì)量，用全式金Easyscript One-step gDNA Removal and cDNA synthesis superMix試劑盒合成cDNA，用于逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（reverse transcription-polymerase chain reaction,RTPCR）和實(shí)時(shí)熒光定量PCR（quantitative real-time PCR,qRT-PCR）。

1.3 基因分離

在茶樹品種‘云抗10號’基因組數(shù)據(jù)庫網(wǎng)站（http://www.plantkingdomgdb.com/tea_tree/）中下載基因組數(shù)據(jù)，根據(jù)序列注釋的信息篩選出相關(guān)的WRKYs編碼cDNA序列，并在NCBI網(wǎng)站上與其他植物進(jìn)行BLASTn比對并獲得更為詳細(xì)的注釋，最后得到3個(gè)包含完整開放閱讀框（open reading frame,ORF）的cDNA序列。參照王鵬杰等[27]的方法進(jìn)行分離驗(yàn)證。在ORF兩端設(shè)計(jì)RT-PCR引物（表1），以‘鐵觀音’芽葉cDNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，反應(yīng)程序：95℃預(yù)變性30 s；55℃變性30 s，72℃延伸2 min，35個(gè)循環(huán)。PCR產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳檢測后在紫外燈下切割，使用天根DNA純化回收試劑盒進(jìn)行回收純化，然后連接到pEASYT1載體上，轉(zhuǎn)化至Trans1-T1感受態(tài)細(xì)胞，挑取陽性克隆送至上海鉑尚生物技術(shù)有限公司測序。

表1 引物序列Table 1 Primer sequences

1.4 生物信息學(xué)分析

采用UltraEdit軟件分析茶樹基因組數(shù)據(jù)；用NCBI網(wǎng)站中的ORFfinder在線查詢ORF并翻譯出其氨基酸序列，對核酸序列及氨基酸序列分別進(jìn)行BLASTn和BLASTp同源性分析；采用在線軟件ProtParam（https://web.expasy.org/protparam/）分析蛋白理化性質(zhì)；用SignalP 4.1 Server在線軟件（http://www.cbs.dtu.dk/services/SignalP/）進(jìn)行信號肽分析；采用WOLF PSORT軟件進(jìn)行亞細(xì)胞定位預(yù)測，用cNLS Mapper軟件進(jìn)行核定位信號預(yù)測；采用SWISS-MODEL軟件預(yù)測蛋白三維結(jié)構(gòu)，再用Pymol軟件編輯輸出；采用DNAman軟件對相關(guān)蛋白進(jìn)行多序列比對；在MEGA 5.0軟件中用鄰接法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，Boostrap值為1 000；采用STRING 10.5軟件進(jìn)行WRKYs互作蛋白網(wǎng)絡(luò)分析，互作蛋白設(shè)置為10個(gè)，置信度設(shè)置為0.15。

1.5 實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析

以茶樹不同組織及3種非生物脅迫處理的樣品總RNA為模板，通過全式金的Easyscript One-step gDNA Removal and cDNA synthesis superMix試劑盒逆轉(zhuǎn)錄成cDNA作為熒光定量PCR模板。選取茶樹β-actin作為茶樹不同組織表達(dá)差異的內(nèi)參基因[28]，TATA 結(jié)合蛋白基因（TATA-box binding protein gene,TBP）作為非生物脅迫處理的內(nèi)參基因[29]，設(shè)計(jì)CsWRKY6、CsWRKY31和CsWRKY48的熒光定量引物（表1），設(shè)置3個(gè)生物學(xué)重復(fù)。使用Bio-Rad的CFX96 Touch熒光定量PCR儀進(jìn)行qRT-PCR反應(yīng)，反應(yīng)體系參照Transstart?Tip Green qPCR superMix試劑盒的方法，反應(yīng)程序：94℃預(yù)變性30 s；94 ℃變性5 s，60 ℃延伸30 s，40個(gè)循環(huán)。試驗(yàn)數(shù)據(jù)釆用2－△△CT算法[30]進(jìn)行分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 CsWRKYs基因的分離及序列分析

以‘鐵觀音’芽葉總RNA逆轉(zhuǎn)錄的cDNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，獲得3條WRKY轉(zhuǎn)錄因子的cDNA序列，使用1%的瓊脂糖凝膠電泳檢測，長度與預(yù)期相符（圖1）。對其核苷酸序列及氨基酸序列分別進(jìn)行BLASTn和BLASTp同源性分析，根據(jù)與擬南芥WRKY家族的同源性分別命名為CsWRKY6、CsWRKY31和CsWRKY48，GenBank登錄號分別為 MG298953、MG298958 和 MG298961。CsWRKY6、CsWRKY31和CsWRKY48的ORF長度依次為1 734、1 299和960 bp，各編碼577、432和319個(gè)氨基酸，與擬南芥中WRKY同源基因的序列相似度均在50%以上（表2）。

圖1 茶樹CsWRKY6、CsWRKY31和CsWRKY48基因的PCR擴(kuò)增結(jié)果Fig.1 PCR amplification results of CsWRKY6,CsWRKY31 andCsWRKY48 genes in tea plant

表2 茶樹CsWRKY6、CsWRKY31和CsWRKY48蛋白生物信息學(xué)分析Table 2 Bioinformatics analysis of CsWRKY6,CsWRKY31 and CsWRKY48 proteins in tea plant

2.2 CsWRKYs蛋白的生物信息學(xué)分析

對蛋白質(zhì)理化性質(zhì)的分析結(jié)果（表2）表明，CsWRKY6、CsWRKY31和 CsWRKY48蛋白的分子質(zhì)量分別為62.99、46.75和35.61 kDa，理論等電點(diǎn)分別為6.11、8.49和6.83，不穩(wěn)定系數(shù)均大于40.00，平均疏水性均為負(fù)值，表明3個(gè)WRKY蛋白為不穩(wěn)定的親水蛋白。亞細(xì)胞定位預(yù)測結(jié)果顯示均定位于細(xì)胞核，再通過核定位信號預(yù)測發(fā)現(xiàn)CsWRKY6氨基酸序列的第310—340位、CsWRKY31的第158—188位和CsWRKY48的第107—138位存在核定位序列，而且CsWRKY6和CsWRKY31的核定位序列一致，推測兩者的同源性較高，功能相近。

2.3 CsWRKYs蛋白的系統(tǒng)發(fā)育樹分析

根據(jù)WRKY結(jié)構(gòu)域的數(shù)量及鋅指結(jié)構(gòu)的特征，WRKY家族可被分為3大類。將CsWRKY6、CsWRKY31、CsWRKY48與擬南芥WRKY家族中的65個(gè)WRKY蛋白構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹（圖2）。結(jié)果表明，CsWRKY6與AtWRKY6，CsWRKY31與AtWRKY31，CsWRKY48與AtWRKY48的進(jìn)化枝分別聚到一起，關(guān)系最近。3個(gè)茶樹WRKY均屬于Ⅱ類WRKY轉(zhuǎn)錄因子，包含單個(gè)WRKY保守域和C2H2型鋅指結(jié)構(gòu)。其中，CsWRKY6和CsWRKY31屬于進(jìn)一步細(xì)分的Ⅱb亞類，CsWRKY48屬于Ⅱc亞類。

圖2 茶樹與擬南芥WRKY蛋白的系統(tǒng)發(fā)育樹Fig.2 Phylogenetic tree of WRKY proteins in Camellia sinensis andArabidopsis thaliana

2.4 CsWRKYs蛋白的結(jié)構(gòu)域及三維結(jié)構(gòu)分析

將 CsWRKY6、CsWRKY31、CsWRKY48和擬南芥WRKY蛋白進(jìn)行序列比對（圖3），結(jié)果顯示3個(gè)茶樹WRKY蛋白均含有高度保守的DNA結(jié)合域（WRKYGQK）和鋅指結(jié)構(gòu)組成的WRKY結(jié)構(gòu)域。其中，Ⅱb亞類的CsWRKY6和CsWRKY31鋅指結(jié)構(gòu)模式為C-X5-C-X23-H-X-H，而Ⅱc亞類的CsWRKY48鋅指結(jié)構(gòu)模式為C-X4-C-X23-H-X-H。

圖3 茶樹CsWRKY6、CsWRKY31和CsWRKY48保守結(jié)構(gòu)域序列比對Fig.3 Alignment of conserved motifs of CsWRKY6,CsWRKY31 and CsWRKY48 in tea plant

以擬南芥WRKY1蛋白WRKY結(jié)構(gòu)域的晶體結(jié)構(gòu)作為模板對CsWRKY6、CsWRKY31和CsWRKY48的WRKY結(jié)構(gòu)域進(jìn)行三維蛋白結(jié)構(gòu)建模。結(jié)果（圖4）顯示，3個(gè)WRKY結(jié)構(gòu)域的三維結(jié)構(gòu)高度相似，均由5個(gè)反向平行的β折疊和無規(guī)則卷曲組成，說明茶樹WRKY蛋白家族結(jié)構(gòu)域高度保守。

圖4 茶樹CsWRKY6、CsWRKY31和CsWRKY48蛋白WRKY結(jié)構(gòu)域的三級結(jié)構(gòu)Fig.4 Three-dimensional structure of the WRKY domains of CsWRKY6,CsWRKY31 and CsWRKY48 proteins in tea plant

2.5 CsWRKYs的組織表達(dá)特異性分析

使用 qRT-PCR 對CsWRKY6、CsWRKY31和CsWRKY48在茶樹不同組織中的表達(dá)量進(jìn)行分析。結(jié)果（圖5）表明，3個(gè)基因在茶樹的根、莖、嫩葉、老葉、茶花和茶果中均有表達(dá)，而且表達(dá)具有明顯的組織特異性。以茶樹根的表達(dá)量為參照（表達(dá)量為1）進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)CsWRKY6在老葉中的表達(dá)量為2.15，顯著高于在茶樹其他組織中的表達(dá)量；CsWRKY31在花中的表達(dá)量最高，達(dá)到5.12；CsWRKY48在根和莖中的表達(dá)量最高，明顯高于在葉片、茶花和茶果中的表達(dá)量。CsWRKY6和CsWRKY48在茶果中的表達(dá)量極低。

圖5 CsWRKY6、CsWRKY31和CsWRKY48在茶樹不同組織中的表達(dá)量Fig.5 Expression level of CsWRKY6,CsWRKY31 andCsWRKY48 in different tissues of tea plant

2.6 CsWRKYs的逆境脅迫分析

利用STRING數(shù)據(jù)庫的擬南芥關(guān)聯(lián)模型搜索與CsWRKY6、CsWRKY31、CsWRKY48蛋白相互作用的其他蛋白質(zhì)信息，所構(gòu)建的蛋白互作網(wǎng)絡(luò)如圖6所示，3個(gè)WRKY蛋白和10個(gè)其他蛋白存在直接或間接的相互作用。紅色標(biāo)記的7個(gè)蛋白經(jīng)GO數(shù)據(jù)庫注釋和功能分類，與響應(yīng)脅迫相關(guān)。其中：AT1G18390為蛋白激酶超家族中的絲氨酸/蘇氨酸（Ser/Thr）蛋白激酶，涉及ABA信號傳導(dǎo)，正向調(diào)節(jié)非生物脅迫反應(yīng)；FRK1為FLG22誘導(dǎo)的受體激酶，參與植物先天性免疫反應(yīng)。

通過qRT-PCR技術(shù)對CsWRKY6、CsWRKY31、CsWRKY48在低溫、干旱和ABA脅迫下的表達(dá)進(jìn)行了檢測，結(jié)果顯示：在4℃低溫處理?xiàng)l件下（圖7A），3個(gè)基因均被誘導(dǎo)上調(diào)表達(dá)，其中CsWRKY6和CsWRKY31的表達(dá)量在48 h時(shí)達(dá)到最高，分別為13.77和101.01，CsWRKY48在72 h時(shí)達(dá)到最大值（19.95），均顯著高于處理0 h；在干旱脅迫條件下（圖7B），CsWRKY6的表達(dá)水平?jīng)]有顯著變化，CsWRKY31和CsWRKY48的表達(dá)量逐漸上升，均在12 h時(shí)達(dá)到峰值，分別為12.55和4.35，顯著高于處理0 h階段；ABA處理后（圖7C），CsWRKY48迅速響應(yīng)并上調(diào)表達(dá)，在6 h時(shí)達(dá)到最大值（4.25），顯著高于其他階段，CsWRKY6和CsWRKY31的表達(dá)受抑制，在處理后均有下調(diào)。上述結(jié)果表明，3個(gè)基因與茶樹逆境脅迫響應(yīng)密切相關(guān)。

圖6 基于擬南芥蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫的茶樹CsWRKY6、CsWRKY31和CsWRKY48蛋白互作網(wǎng)絡(luò)預(yù)測Fig.6 Prediction of interaction networks of CsWRKY6,CsWRKY31 and CsWRKY48 in tea plant based on Arabidopsis protein database

圖7 茶樹CsWRKY6、CsWRKY31和CsWRKY48在3種非生物脅迫處理下的表達(dá)量Fig.7 Expression level of CsWRKY6,CsWRKY31 and CsWRKY48 in tea plants under three abiotic stresses

3 討論

植物WRKY基因涉及多種生理過程的轉(zhuǎn)錄調(diào)控，包括各種逆境脅迫和發(fā)育過程[14]。本研究從‘鐵觀音’品種中分離得到3個(gè)茶樹WRKY基因，其編碼產(chǎn)物均屬于第Ⅱ類WRKY蛋白，具有高度保守的WRKYGQK核心基序和鋅指結(jié)構(gòu)組成的WRKY結(jié)構(gòu)域，其中Ⅱb亞類的CsWRKY6及CsWRKY31與Ⅱc亞類的CsWRKY48在鋅指結(jié)構(gòu)上有所差異。亞細(xì)胞定位與核定位信號預(yù)測結(jié)果一致，3個(gè)基因均具有高置信度的核定位信號，且同屬于Ⅱb亞類的CsWRKY6和CsWRKY31核定位信號序列相同。核定位信號是一種存在于細(xì)胞內(nèi)眾多蛋白質(zhì)中，介導(dǎo)其由細(xì)胞質(zhì)向細(xì)胞核轉(zhuǎn)運(yùn)的氨基酸序列，對調(diào)節(jié)目標(biāo)基因轉(zhuǎn)錄具有重要作用[31]。基于3個(gè)茶樹WRKY轉(zhuǎn)錄因子WRKY功能結(jié)構(gòu)域的三維結(jié)構(gòu)分析顯示，它們均由5個(gè)反向平行的β折疊和無規(guī)則卷曲組成，與擬南芥WRKY1相似，表明茶樹WRKY蛋白家族結(jié)構(gòu)域高度保守。

大量研究表明，WRKY轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)具有組織特異性。對3個(gè)茶樹WRKY基因的組織表達(dá)特征分析發(fā)現(xiàn)，3個(gè)基因具有明顯的組織特異性，且表達(dá)模式各不相同。CsWRKY6和CsWRKY31分別在茶樹老葉和茶花中優(yōu)勢表達(dá)，CsWRKY48則在根和莖中的表達(dá)量最高，這可能與脅迫響應(yīng)有關(guān)[32]。茶樹CsWRKY2的組織表達(dá)結(jié)果顯示其在葉片中表達(dá)量相對較高[23]，與CsWRKY6類似。另外，在擬南芥[2]、蘋果[12]和番茄[10]中WRKY家族的組織表達(dá)也呈現(xiàn)出多種相對表達(dá)模式。這些結(jié)果表明WRKY基因參與植物生長發(fā)育的多個(gè)方面。

近年來，已有諸多研究證明，部分WRKY基因可通過介導(dǎo)ABA信號途徑來響應(yīng)多種逆境脅迫[7,14]。我們通過STRING在線預(yù)測了3個(gè)茶樹WRKY基因的潛在蛋白互作網(wǎng)絡(luò)，經(jīng)GO數(shù)據(jù)庫注釋及功能分類，發(fā)現(xiàn)其置信度較高的互作蛋白多與響應(yīng)逆境脅迫相關(guān)。qRT-PCR結(jié)果表明，CsWRKY6、CsWRKY31和CsWRKY48在低溫、干旱及ABA脅迫處理下均有表達(dá)且表達(dá)水平有所差異。4℃低溫處理能誘導(dǎo)3個(gè)茶樹WRKY基因表達(dá)量出現(xiàn)極其顯著的上調(diào)，這與番茄WRKY家族中10個(gè)WRKY基因[33]及大豆GmWRKY21[34]的研究結(jié)果類似，表明3個(gè)基因參與了茶樹低溫脅迫響應(yīng)的調(diào)控途徑。MOON等[35]將辣椒CaWRKY1在馬鈴薯中異源表達(dá)，發(fā)現(xiàn)其能顯著提高植株對干旱的耐受性；郭俊紅等[24]驗(yàn)證表明茶樹CsWRKY57無轉(zhuǎn)錄激活活性，受干旱誘導(dǎo)短時(shí)間內(nèi)爆發(fā)性上調(diào)表達(dá)。在本研究中，干旱脅迫處理能顯著上調(diào)CsWRKY31和CsWRKY48的表達(dá)，外源ABA處理則抑制CsWRKY6及CsWRKY31的表達(dá)，迅速誘導(dǎo)CsWRKY48表達(dá)量的上調(diào)。前人研究表明，WRKY轉(zhuǎn)錄因子是ABA信號調(diào)控下游途徑的關(guān)鍵節(jié)點(diǎn)，通過調(diào)控ABA信號轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)靶基因如ABF4、ABI4、ABI5、DREB1A、MYB2和RAB18的表達(dá)來提高植物對逆境脅迫的耐受性[36]；ABA可以誘導(dǎo)部分WRKY家族基因行使功能，由于植物種類或脅迫環(huán)境不同，有的為正調(diào)控，有的則為負(fù)調(diào)控[17]；WANG等[23]通過外源ABA及ABA生物合成抑制劑證明茶樹CsWRKY2可介導(dǎo)ABA信號途徑參與茶樹對低溫及干旱脅迫的應(yīng)答，意味著CsWRKY6、CsWRKY31和CsWRKY48可能分別作為負(fù)調(diào)控和正調(diào)控因子參與茶樹響應(yīng)低溫和干旱脅迫的ABA信號調(diào)控途徑，但具體的響應(yīng)調(diào)控機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。

總之，本研究克隆得到茶樹CsWRKY6、CsWRKY31和CsWRKY48，通過系統(tǒng)的生物信息學(xué)分析及在不同組織、低溫條件、干旱條件、ABA處理下的表達(dá)模式分析，推測這3個(gè)基因與茶樹抗逆響應(yīng)密切相關(guān)。它們的功能及作用機(jī)制值得后續(xù)通過轉(zhuǎn)基因功能驗(yàn)證及酵母雜交等技術(shù)來進(jìn)行研究。

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