鐘 青，羅逢健，陳宗懋，崔 璇，周 利，張新忠

(1.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院茶葉研究所農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全研究中心，浙江 杭州 310008；2.天津農(nóng)學(xué)院園藝園林學(xué)院，天津 300384)

聯(lián)苯肼酯(bifenazate，C17H20N2O3，CAS No.：149877-41-8)是一種由美國科聚亞公司研發(fā)，2008年在我國獲得部分登記的聯(lián)苯肼類殺螨劑，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式示于圖1。它可作用于螨類線粒體細(xì)胞色素b(cytb)和電子傳遞鏈cytb復(fù)合物Ⅲ的Q0位點(diǎn)，殺卵活性及擊倒優(yōu)勢良好，目前與其他殺螨劑無交互抗性，對螨類各個(gè)生長階段皆有效，且持效期長[1-2]。

圖1 聯(lián)苯肼酯的化學(xué)結(jié)構(gòu)式Fig.1 Chemical structural formula of bifenazate

聯(lián)苯肼酯主要登記用于防治草莓[3]、柑橘[4]、桑樹[5]和蘋果[6]等水果，蔬菜和其他經(jīng)濟(jì)作物上的害螨。近年來，研究結(jié)果表明，聯(lián)苯肼酯在茶樹上用于防治茶橙癭螨、茶葉癭螨、茶紅蜘蛛等螨類害蟲，效果很好[7-8]，可替代現(xiàn)有茶園里施用的常規(guī)藥劑。田間施用聯(lián)苯肼酯后，會造成農(nóng)產(chǎn)品及環(huán)境中的殘留，我國規(guī)定啤酒花和薄荷中的聯(lián)苯肼酯最大殘留限量(MRL)值為20、40 mg/kg；規(guī)定棉籽、蔬菜、水果、堅(jiān)果等的聯(lián)苯肼酯MRL值為0.2～7 mg/kg；歐盟、日本和韓國分別規(guī)定茶葉中聯(lián)苯肼酯MRL值為0.02、2、3 mg/kg[9]。然而，目前我國和食品法典委員會CAC暫無茶葉中聯(lián)苯肼酯MRL值的有關(guān)規(guī)定。

目前，研究人員多采用液相色譜-紫外檢測法或液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法分析聯(lián)苯肼酯在不同樣品基質(zhì)中的殘留。如Park等[10]建立了液相色譜法分析谷子、蕓豆、柑橘、紫蘇葉和蘑菇等多種基質(zhì)中的聯(lián)苯肼酯殘留，結(jié)果表明，在0.1～0.5 mg/kg添加水平下該方法的回收率為73.1%～104.3%，RSD為0.2%～9.7%，定量限為0.01 mg/kg；張?jiān)碌萚11]采用UPLC-MS/MS法檢測木瓜上聯(lián)苯肼酯及其代謝物的殘留量；張嬌嬌等[2]和歐陽文森等[12]研究了聯(lián)苯肼酯在柑橘上的消解動態(tài)；何建紅等[3]采用UPLC-MS/MS法研究了聯(lián)苯肼酯在草莓上的殘留降解動態(tài)；Satheshkuma等[13]采用HPLC-DAD法研究了熱帶氣候環(huán)境條件下紅茶樣品中聯(lián)苯肼酯消解動態(tài)，半衰期為1.03～1.36天，建議安全采收期PHI為16天，方法最低添加濃度為0.10 mg/kg，遠(yuǎn)高于歐盟規(guī)定的茶葉中聯(lián)苯肼酯MRL值0.02 mg/kg；另有報(bào)道采用液相色譜-紫外檢測法進(jìn)行聯(lián)苯肼酯原藥[14]和制劑分析[15]， 以及柑橘[16]和土壤[16]中聯(lián)苯肼酯的殘留分析。尚未見聯(lián)苯肼酯在茶園施用后，其殘留降解情況的相關(guān)報(bào)道。

為了評價(jià)聯(lián)苯肼酯在茶葉上的消解趨勢和殘留水平，明確其在茶葉生長過程中的降解規(guī)律，為聯(lián)苯肼酯在茶葉上的安全和合理用藥、茶葉應(yīng)用安全性評價(jià)提供科學(xué)依據(jù)。本研究擬采用QuEChERS法凈化茶葉，超高效液相色譜-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜法(UPLC-MS/MS)檢測茶葉鮮葉和成茶中聯(lián)苯肼酯殘留量，利用該方法研究我國氣候條件下43%聯(lián)苯肼酯懸浮劑在湖南永定、福建松溪和浙江紹興三地茶園的殘留消解動態(tài)和最終殘留實(shí)驗(yàn)，并進(jìn)行相關(guān)風(fēng)險(xiǎn)評估。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要儀器與試劑

UPLC/Quattra Premier XE超高效液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用儀：美國Waters公司產(chǎn)品，配有電噴霧電離源(ESI)，MassLynx 4.1質(zhì)譜工作站；高速離心機(jī)：德國Sigma公司產(chǎn)品；電子分析天平(0.000 1 g 和0.01 g)：美國Mettler公司產(chǎn)品；R-210 BUCHI旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：瑞士BUCHI Labortechnik A G公司產(chǎn)品；DFT-200食品粉碎機(jī)：溫嶺市林大機(jī)械有限公司產(chǎn)品；KQ-250DB超聲波清洗器：昆山市超聲儀器有限公司產(chǎn)品；T18均質(zhì)器：德國IKA公司產(chǎn)品；Vortex-2渦旋混合器：美國Scientific公司產(chǎn)品。

乙腈、無水硫酸鎂、氯化鈉：均為分析純，上海試四赫維化工有限公司產(chǎn)品；N-丙基乙二胺(PSA)填料(40～60 μm)，石墨化炭黑(GCB)填料(100～150目)：天津博納艾杰爾科技有限公司產(chǎn)品；純凈水：杭州娃哈哈公司產(chǎn)品；聯(lián)苯肼酯標(biāo)準(zhǔn)品(純度98%)：德國Dr.Ehrenstorfer公司產(chǎn)品。

1.2 殘留實(shí)驗(yàn)

1.2.1茶鮮葉中消解動態(tài)實(shí)驗(yàn) 選擇浙江紹興、福建松溪和湖南永定三地長勢均勻的茶園，在2013年和2014年的7～8月茶葉生長季節(jié)，以43%聯(lián)苯肼酯懸浮劑制劑以45 mL/畝(有效成分290.25 g/公頃)劑量，每畝兌水60 L，采用背負(fù)式噴霧器來回均勻葉面噴霧1次，施藥后間隔2 h(原始沉積量)、1、2、3、5、7、10、14、21、28天，采用隨機(jī)法15點(diǎn)采集1 kg茶葉鮮葉，混勻后，四分法取樣，用食品粉碎機(jī)磨碎，-18 ℃存放備用，分別測定鮮葉上聯(lián)苯肼酯殘留量，獲得對應(yīng)的消解動態(tài)曲線和半衰期。設(shè)3個(gè)重復(fù)實(shí)驗(yàn)，每重復(fù)小區(qū)面積為20 m2。采集施藥前的茶葉鮮葉樣品作為空白對照。

1.2.2最終殘留實(shí)驗(yàn) 在1.2.1節(jié)的相同地點(diǎn)和相同時(shí)間，按照制劑30 mL/畝(有效成分193.5 g/公頃，推薦劑量)和制劑45 mL/畝(有效成分290.25 g/公頃)兩個(gè)劑量濃度，每畝兌水60 L，藥液質(zhì)量濃度分別為215 mg/L和322.5 mg/L，采用手動背負(fù)式噴霧器施藥1～2次，施藥間隔7天，距最后一次施藥后5、7、10、14天，分別以隨機(jī)法15點(diǎn)采摘1 kg茶葉鮮葉一芽二葉、三葉，將鮮葉按照當(dāng)?shù)爻Ｒ?guī)工藝方法加工制成成茶(浙江炒青綠茶、湖南烘青綠茶、福建紅茶)，用食品粉碎機(jī)粉碎后，-18 ℃存放備用，分別測定成茶茶葉中聯(lián)苯肼酯殘留量。每個(gè)樣品設(shè)3個(gè)重復(fù)實(shí)驗(yàn)，每個(gè)重復(fù)小區(qū)面積為20 m2，并設(shè)空白對照。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1提取凈化 分別稱取磨碎后的樣品(5.00 g鮮葉，2.00 g干茶茶粉)，置于50 mL塑料離心管中，加入10 mL水渦旋混勻，30 min后，加入10 mL乙腈(其中，向鮮葉樣品加入20 mL乙腈)渦旋混勻，浸泡過夜；加入3 g NaCl混勻均質(zhì)1 min，超聲10 min，以7 500 r/min離心5min；取1.50 mL上層(乙腈層)至裝有100 mg PSA+50 mg GCB+200 mg MgSO4凈化填料(鮮葉為100 mg PSA+25 mg GCB+200 mg MgSO4)的2 mL離心管中，渦旋混勻，以7 500 r/min離心5 min后，過0.22 μm濾膜至進(jìn)樣瓶，向UPLC-MS/MS進(jìn)樣5 μL，基質(zhì)外標(biāo)法測定。

1.3.2色譜條件 Acquity UPLC HSS T3色譜柱(100 mm×2.1 mm×1.8 μm)；柱溫40 ℃；進(jìn)樣量5 μL；樣品盤溫度8 ℃；流速0.25 mL/min；流動相：A為0.1%甲酸乙腈，B為10 mmol/L乙酸銨溶液；梯度洗脫程序：0～1.5 min(20%～30%A)，1.5～3.0 min(30%～55%A)，3.0～7.0 min(55%～90%A)，7.0～8.0 min(90%～98%A)，8.0～9.5 min(98%A)，9.5～9.8 min(98%～70%A)，9.8～10.6 min(70%～20%A)，保持1.4 min。聯(lián)苯肼酯的保留時(shí)間為5.8 min。

1.3.3質(zhì)譜條件 電噴霧電離正離子多反應(yīng)監(jiān)測模式(ESI+-MRM)；電噴霧毛細(xì)管電壓3.0 kV；離子源溫度120 ℃；脫溶劑氣溫度350 ℃；錐孔反吹氣(N2)流速50 L/h；脫溶劑氣(N2)流速600 L/h；碰撞氣(Ar)流速0.25 mL/min；電子倍增器倍增電壓650 V；二級質(zhì)譜母離子駐留時(shí)間 0.040 s；錐孔電壓 15 V；定量離子對：母離子m/z301.2，子離子m/z198.1，碰撞裂解電壓10 eV；定性離子對：母離子m/z301.2，子離子m/z170.1，碰撞裂解電壓20 eV。

1.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制與標(biāo)準(zhǔn)曲線

稱取0.010 g聯(lián)苯肼酯標(biāo)準(zhǔn)品于50 mL容量瓶中，用乙腈溶解定容，配制成200 mg/L標(biāo)準(zhǔn)儲備液，-18 ℃保存。將聯(lián)苯肼酯標(biāo)準(zhǔn)儲備液用乙腈-水溶液(5∶5,V/V)稀釋成1.00、0.50、0.250、0.10、0.050、0.0250、0.010、0.005、0.002 5 mg/L系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，UPLC-MS/MS進(jìn)樣5 μL，每個(gè)濃度測定3次，以濃度為橫坐標(biāo)(x)，峰面積平均值為縱坐標(biāo)(y)，獲得聯(lián)苯肼酯標(biāo)準(zhǔn)曲線和線性相關(guān)系數(shù)。

1.5 添加回收率與精密度

稱取經(jīng)測定不含聯(lián)苯肼酯的茶鮮葉、綠茶和紅茶空白樣品，分別添加相當(dāng)于0.020、0.20、2.0 mg/kg添加水平的標(biāo)準(zhǔn)溶液，渦旋混勻后放置2 h，以更接近于實(shí)際樣品農(nóng)藥殘留情況，然后按照1.3.1節(jié)方法加入水和乙腈進(jìn)行提取凈化測定，每個(gè)濃度重復(fù)6次；同時(shí)將處理后得到的空白茶鮮葉(綠茶、紅茶)樣品溶液，加入相應(yīng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液后定容，配制成基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行測定，計(jì)算添加回收率、相對標(biāo)準(zhǔn)偏差、方法的檢測限和定量限。

2 結(jié)果與討論

2.1 前處理方法的優(yōu)化

分析聯(lián)苯肼酯殘留時(shí)，張?jiān)碌萚11]采用乙腈和0.25%乙酸溶液提取木瓜中的殘留藥物，再加入0.25%抗壞血酸衍生化；Satheshkuma等[13]采用0.1%甲酸乙腈溶液提取紅茶中聯(lián)苯肼酯殘留；也有直接采用乙腈提取草莓[3]、柑橘[16]和土壤[16]中聯(lián)苯肼酯殘留的報(bào)道。韓鳳等[16]比較了甲醇、乙酸乙酯、乙腈和二氧甲烷提取柑橘橘肉、果皮等的聯(lián)苯肼酯殘留，結(jié)果表明乙腈作為提取溶劑時(shí)，雜質(zhì)較少，回收率穩(wěn)定。由于茶葉基質(zhì)更復(fù)雜，成茶茶葉為干物質(zhì)，人體通過飲用茶湯攝入農(nóng)藥殘留。因此，本實(shí)驗(yàn)采用茶葉加水充分浸泡后，再加入乙腈作為提取溶劑，以提取茶葉中的聯(lián)苯肼酯殘留。

QuEChERS是美國農(nóng)業(yè)部Anastassiades 教授在2003年發(fā)明的一種前處理方法[17]，操作簡單、快速，廣泛應(yīng)用于農(nóng)藥殘留分析檢測中[18-20]。前期研究[21-22]表明：PSA 能有效去除茶葉樣品中的脂肪酸、糖類物質(zhì)等極性基質(zhì)；C18能去除部分非極性脂肪和脂溶性雜質(zhì)；GCB能去除色素和固醇類雜質(zhì)，降低雜質(zhì)干擾與基質(zhì)效應(yīng)；加入MgSO4可吸收多余水分。因此，本實(shí)驗(yàn)采用100 mg PSA+50 mg GCB+200 mg MgSO4凈化干茶，采用100 mg PSA+25 mg GCB+200 mg MgSO4凈化鮮葉。既能去除大部分雜質(zhì)，又能保證農(nóng)藥較好的回收率，且5.0 g鮮葉和2.0 g干茶分別僅需20、10 mL乙腈，節(jié)省了有機(jī)試劑的使用量，降低了實(shí)驗(yàn)成本。

2.2 色譜質(zhì)譜條件的優(yōu)化

茶葉中富含咖啡堿、色素等不同極性的雜質(zhì)化合物，在紫外檢測中易造成嚴(yán)重的背景干擾，無法獲得更低的檢測限。因此，為了獲得良好的分離效果，采用0.1%甲酸乙腈和10 mmol/L乙酸銨溶液進(jìn)行梯度洗脫，進(jìn)一步降低雜質(zhì)干擾和基質(zhì)效應(yīng)的影響。

本研究分別采用ESI+和ESI-電離分析聯(lián)苯肼酯，結(jié)果表明，在ESI+模式下，聯(lián)苯肼酯的離子化效果更好，能獲得更高的[M+H]+響應(yīng)。在實(shí)驗(yàn)過程中，進(jìn)一步優(yōu)化了錐孔電壓(10、20、30、40、50 V)和噴霧電壓，發(fā)現(xiàn)錐孔電壓在20 V時(shí)的準(zhǔn)分子離子峰[M+H]+(m/z301)響應(yīng)最好。對準(zhǔn)分子離子進(jìn)行二級質(zhì)譜裂解子離子掃描，不斷增大二級質(zhì)譜的裂解碰撞電壓，得到碎片離子信息，并優(yōu)化碰撞裂解能量(5、10、15、20、30、40 eV)，聯(lián)苯肼酯準(zhǔn)分子離子峰m/z301在5、10、20 eV下的二級質(zhì)譜圖示于圖2。由圖2可見，m/z301主要生成碎片子離子m/z198和m/z170，推測二者均是由六元環(huán)重排裂解生成，隨著碰撞裂解電壓的變化，離子豐度有所不同。利用四極桿飛行時(shí)間質(zhì)譜通過源內(nèi)裂解生成m/z198后，對其進(jìn)行二級質(zhì)譜裂解驗(yàn)證，發(fā)現(xiàn)m/z198的子離子為m/z152，未見m/z170。這進(jìn)一步驗(yàn)證了m/z170并非來自m/z198，而是隨著裂解能量的增強(qiáng)，由m/z301裂解生成，其主要碎片結(jié)構(gòu)和裂解途徑示于圖3。最終優(yōu)化后的條件已列于1.3.2和1.3.3節(jié)，選擇子離子m/z198作為定量離子，m/z170用以輔助定性。

注：a.5 eV；b.10 eV；c.20 eV圖2 不同二級碰撞能量下，聯(lián)苯肼酯準(zhǔn)分子離子峰m/z 301的二級質(zhì)譜圖Fig.2 MS/MS spectra of m/z 301 at different collision energies

圖3 聯(lián)苯肼酯準(zhǔn)分子離子及其主要碎片離子的裂解路徑Fig.3 Fragmentation pathway of the quasi-molecular ion of bifenazate

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線、靈敏度、回收率與精密度

在優(yōu)化條件下，考察了方法的線性關(guān)系，在0.002 5～1.0 mg/L濃度范圍內(nèi)，聯(lián)苯肼酯的線性方程為y=1 505 413x+43 050，相關(guān)系數(shù)r=0.994 2。

按照1.5節(jié)條件進(jìn)行添加回收率實(shí)驗(yàn)，同時(shí)配制相應(yīng)濃度的基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行定量分析，回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)列于表1。結(jié)果表明，在0.020、0.20、2.0 mg/kg 3個(gè)添加濃度下，綠茶中聯(lián)苯肼酯的平均回收率分別為79.3%、88.6%和103.4%，RSD分別為6.1%、5.9%和3.7%；紅茶中聯(lián)苯肼酯的平均回收率分別為79.3%、82.6%和103.3%，RSD分別為6.7%、4.5%和4.7%；茶鮮葉中聯(lián)苯肼酯的平均回收率分別為91.1%、94.4%和91.0%，RSD分別為4.3%、3.8%和7.6%。以最低添加濃度下方法檢出限(LOD，S/N=3)為1.5 μg/kg，計(jì)算S/N=10時(shí)的方法定量限(LOQ)，聯(lián)苯肼酯在茶鮮葉、綠茶和紅茶中的方法定量限為5 μg/kg。茶葉空白樣品、聯(lián)苯肼酯綠茶基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)樣品和最低添加濃度樣品的色譜圖示于圖4。

表1 茶鮮葉、綠茶和紅茶中聯(lián)苯肼酯的添加回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差Table 1 Spiked recoveries and relative standard deviations (RSDs) of bifenazate residue in fresh tea leaves, green tea and black tea samples

圖4 綠茶空白樣品(a)、聯(lián)苯肼酯綠茶基質(zhì)0.004 mg/L標(biāo)準(zhǔn)樣品(b)和最低添加濃度0.02 mg/kg樣品(c)的色譜圖Fig.4 Chromatograms of green tea blank sample (a), bifenazate matrix standard solution (b) and spiked green tea sample (c)

2.4 聯(lián)苯肼酯在鮮葉上的消解動態(tài)

按照1.2.1節(jié)方法進(jìn)行43%聯(lián)苯肼酯懸浮劑在茶鮮葉上的殘留消解動態(tài)實(shí)驗(yàn)，按照1.3節(jié)方法測定茶鮮葉中聯(lián)苯肼酯的殘留量，結(jié)果列于表2，鮮葉中聯(lián)苯肼酯的消解動態(tài)曲線示于圖5。

結(jié)果表明：由于茶葉生長狀態(tài)不同，按實(shí)驗(yàn)劑量施藥后，2013年茶葉鮮葉噴藥2 h后聯(lián)苯肼酯原始沉積量為21.291～54.789 mg/kg；噴藥5天后，浙江、湖南、福建三地茶鮮葉中聯(lián)苯肼酯消解均達(dá)到90%以上；三地茶鮮葉中聯(lián)苯肼酯殘留消解分別滿足一級反應(yīng)動力學(xué)方程y=7.835 6×10-0.237 7x、y=11.227×10-0.332 3x、y=12.81×10-0.401 1x，相關(guān)系數(shù)R2分別為0.757 1、0.929 9、0.960 2，半衰期T1/2分別為2.9、2.1、1.7天。2014年茶鮮葉施藥2 h后聯(lián)苯肼酯原始沉積量為5.333～11.876 mg/kg，由于三地氣候等差別，噴藥5天后，浙江和福建兩地茶鮮葉中聯(lián)苯肼酯消解率均達(dá)到90%以上，而湖南地區(qū)在噴藥14天后茶鮮葉中聯(lián)苯肼酯消解率才達(dá)到90%以上。浙江、湖南、福建三地茶鮮葉中聯(lián)苯肼酯殘留消解分別滿足一級反應(yīng)動力學(xué)方程y=3.714 0×10-0.338 6x、y=10.513 8×10-0.174 7x和y=3.196 8×10-0.486 6x，相關(guān)系數(shù)R2分別為0.892 0、0.982 5和0.869 9，半衰期T1/2分別為2.0、4.0、1.4天。

表2 43%聯(lián)苯肼酯懸浮劑在茶葉鮮葉上的消解動態(tài)數(shù)據(jù)Table 2 Average dynamic degradation data of 43% bifenazate suspending agent in fresh tea leaves

2013～2014年夏秋季43%聯(lián)苯肼酯懸浮劑在兩年三地實(shí)驗(yàn)表明，聯(lián)苯肼酯在茶鮮葉上的半衰期為1.4～4.0天，屬于易降解農(nóng)藥。

2.5 聯(lián)苯肼酯在茶葉中的最終殘留結(jié)果

按照1.2.2節(jié)方法進(jìn)行43%聯(lián)苯肼酯懸浮劑在成茶茶葉中的最終殘留實(shí)驗(yàn)，依照1.3節(jié)方法測定成茶中聯(lián)苯肼酯的殘留量。

結(jié)果表明，按照推薦劑量制劑30 g/畝(有效成分193.5 g/公頃)施藥1、2次，間隔5天后成茶中聯(lián)苯肼酯殘留量為0.010～8.243 mg/kg，平均值為2.835 mg/kg，殘留中值為1.725 mg/kg；間隔7天后成茶中聯(lián)苯肼酯殘留量為未檢出～4.518 mg/kg，平均值為1.486 mg/kg，殘留中值為1.025 mg/kg；間隔10天后成茶中聯(lián)苯肼酯殘留量為未檢出～3.991 mg/kg，平均值為1.061 mg/kg，殘留中值為0.480 mg/kg；間隔14天后成茶中聯(lián)苯肼酯殘留量為未檢出～1.769 mg/kg，平均值為0.546 mg/kg，殘留中值為0.340 mg/kg。

按照高劑量(1.5倍推薦劑量)制劑45 g/畝(有效成分290.25 g/公頃)施藥1、2次，間隔5天后成茶中聯(lián)苯肼酯殘留量為0.011～10.501 mg/kg，平均值為3.824 mg/kg，殘留中值為2.920 mg/kg；間隔7天后成茶中聯(lián)苯肼酯殘留量為0.006～5.977 mg/kg，平均值為1.819 mg/kg，殘留中值為1.316 mg/kg；間隔10天后成茶中聯(lián)苯肼酯殘留量為未檢出～4.547 mg/kg，平均值為1.164 mg/kg，殘留中值為0.690 mg/kg；間隔14天后成茶中聯(lián)苯肼酯殘留量為未檢出～2.038 mg/kg，平均值為0.701 mg/kg，殘留中值為0.390 mg/kg。

實(shí)驗(yàn)表明，按照推薦劑量和1.5倍推薦劑量施藥1～2次，10天后成茶中的聯(lián)苯肼酯殘留量均小于5 mg/kg。

注：a.浙江2013年；b.浙江2014年；c.湖南2013年；d.湖南2014年；e.福建2013年；f.福建2014年圖5 43%聯(lián)苯肼酯懸浮劑在浙江、湖南和福建三地2013～2014年茶鮮葉上的消解動態(tài)曲線Fig.5 Degradation kinetic curves of 43% bifenanzate SC in tea fresh leaves in 2013-2014 at Zhejiang, Hunan and Fujian

2.6 茶葉中聯(lián)苯肼酯最大殘留限量建議及飲用安全性風(fēng)險(xiǎn)評估

聯(lián)苯肼酯的每日允許攝入量(ADI)值為0.01 mg/kg·d bw。如果以5 mg/kg設(shè)定為聯(lián)苯肼酯在茶葉中的MRL值標(biāo)準(zhǔn)，按照茶葉全部攝入體內(nèi)(實(shí)際上還應(yīng)該考慮浸出率，浸出率并非100%)計(jì)算人體最大攝入量為：

0.001 032(mg/kg·d bw)

其中：LP為世界上每人每天飲用茶葉的最高值(13 g/d)；HR-P為理論上應(yīng)該取假定安全間隔期10天的成茶中聯(lián)苯肼酯最高殘留量4.547 mg/kg，小于建議MRL值，故此處按照建議MRL值5 mg/kg來計(jì)算；BW為成人平均體重(63 kg)。

計(jì)算獲得人體最大攝入量為0.001 032 mg/kg·d bw，該值僅為聯(lián)苯肼酯ADI值(0.01 mg/kg·d bw)的10.32%，此處計(jì)算并未考慮茶湯中浸出率，若引入浸出率數(shù)據(jù)，則風(fēng)險(xiǎn)值更小。該結(jié)果表明，聯(lián)苯肼酯在茶葉中的MRL值設(shè)定為5 mg/kg時(shí)，人體飲用安全系數(shù)大于10，可認(rèn)為此條件下茶葉是安全的。

3 結(jié)論

本研究建立了QuEChERS分散固相萃取方法凈化，超高效液相色譜-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜法測定茶葉中聯(lián)苯肼酯殘留的分析方法，研究了43%聯(lián)苯肼酯懸浮劑在茶園茶葉中的殘留降解規(guī)律，并對其飲用安全性進(jìn)行了風(fēng)險(xiǎn)評估。結(jié)果表明，按照風(fēng)險(xiǎn)評估制訂茶葉中聯(lián)苯肼酯殘留量MRL值為5 mg/kg對人體飲用是安全的，人體通過全部食用茶葉攝入的聯(lián)苯肼酯僅占每日允許攝入量(ADI)的10.32%。