馬婧妤，劉 莉，虞 冰，吾建祥，楊德毅，刁銀軍

(1.金華市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量綜合監(jiān)督檢測(cè)中心,浙江 金華 321017 2.金華職業(yè)技術(shù)學(xué)院,浙江 金華 321017)

海鮮菇(Hypsizygusmarmoreus(Peck)H.E.Bigelow)又名斑玉蕈、真姬菇、蟹味菇等，隸屬于擔(dān)子菌門(mén)層菌綱傘菌目白蘑科玉蕈屬[1～3]。作為一種營(yíng)養(yǎng)豐富的真菌類(lèi)食品，不僅富含蛋白質(zhì)、氨基酸、維生素、酚類(lèi)、多糖、微量元素如K、Mg、Na、P、Ca等，還具有清除自由基、抗預(yù)防動(dòng)脈硬化、調(diào)節(jié)血糖、改善腸道循環(huán)等功效[4-8]。海鮮菇屬于藥食兩用食品，深受中國(guó)、日本等亞洲國(guó)家消費(fèi)者的歡迎。

蔬菜中農(nóng)藥殘留的檢測(cè)方法主要有氣相色譜法[9]，氣相色譜質(zhì)譜法[10]，氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[11]，液相色譜法[12]，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[13]等。但是關(guān)于海鮮菇的農(nóng)藥殘留的報(bào)道鮮見(jiàn)，本文以金華農(nóng)產(chǎn)品企業(yè)生產(chǎn)的海鮮菇為研究對(duì)象，建立了氣相色譜技術(shù)(GC)檢測(cè)海鮮菇中有機(jī)磷農(nóng)藥和擬除蟲(chóng)菊酯農(nóng)殘殘留的方法，該方法靈敏度較高，能滿(mǎn)足農(nóng)殘限量要求的測(cè)定，且方法簡(jiǎn)便快速，適合金華蔬菜中農(nóng)藥殘留的檢測(cè)和確證分析，對(duì)推進(jìn)蔬菜農(nóng)殘檢測(cè)技術(shù)的提高，保障人們健康具有重要作用。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 試劑與儀器 Agilent 7890B氣相色譜儀(氣相色譜-火焰光度(FPD)檢測(cè)器和氣相色譜電子捕獲(ECD)檢測(cè)器)(美國(guó)安捷倫(上海)科技公司)；N-EVAP氮吹儀(美國(guó)Organomation公司)；C18固相萃取管(Agilent)，濾膜(0.2μm 有機(jī)溶劑膜)。

乙腈、丙酮、無(wú)水硫酸鎂、醋酸鈉、(分析純,國(guó)藥集團(tuán))。農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品：敵敵畏、乙酰甲胺磷、二嗪磷、久效磷、甲基嘧啶磷、甲基對(duì)硫磷、馬拉硫磷、甲基異硫磷、喹硫磷、丙溴磷；甲胺磷、甲拌磷、氧化樂(lè)果、毒死蜱、倍硫磷、殺螟硫磷、對(duì)硫磷、水胺硫磷、三唑磷等20種有機(jī)磷農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品；六六六、五氯硝基苯、百菌清、乙烯菌核利、三唑酮、腐霉利、三氯殺螨醇、異菌脲，聯(lián)苯菊酯、甲氰菊酯、氯氟氰菊酯、氟氯氰菊酯，氰戊菊酯、溴氰菊酯等15種擬除蟲(chóng)菊酯農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品。農(nóng)藥標(biāo)樣購(gòu)于天津思億浩遠(yuǎn)科技有限公司，濃度均為100μg/kg。實(shí)驗(yàn)室用水為超純水。

實(shí)驗(yàn)用海鮮菇來(lái)自金華地區(qū)蔬菜基地企業(yè)送檢。

1.2 農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)溶液 根據(jù)農(nóng)藥的性質(zhì)、保留時(shí)間和分離度不同，對(duì)待測(cè)農(nóng)藥進(jìn)行分組

20種有機(jī)磷農(nóng)藥分為：

A組：敵敵畏、乙酰甲胺磷、二嗪磷、久效磷、甲基嘧啶磷、甲基對(duì)硫磷、馬拉硫磷、甲基異硫磷、喹硫磷、丙溴磷。

B組：甲胺磷、甲拌磷、氧化樂(lè)果、毒死蜱、倍硫磷、殺螟硫磷、對(duì)硫磷、水胺硫磷、三唑磷等20種有機(jī)磷農(nóng)藥。

15種擬除蟲(chóng)菊酯：六六六、五氯硝基苯、百菌清、乙烯菌核利、三唑酮、腐霉利、三氯殺螨醇、異菌脲，聯(lián)苯菊酯、甲氰菊酯、氯氟氰菊酯、氟氯氰菊酯，氰戊菊酯、溴氰菊酯。

根據(jù)農(nóng)藥在檢測(cè)器上的響應(yīng)值，逐一準(zhǔn)確吸取一定體積的同組別的單個(gè)農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，分別注入10mL容量瓶中，用丙酮稀釋?zhuān)量潭?，配制成所需的混合農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，使用時(shí)用丙酮稀釋成所需質(zhì)量濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液。

1.3 氣相色譜條件 測(cè)定有機(jī)磷農(nóng)藥，檢測(cè)器：FPD；色譜柱：DB-1701(30m×320μm，0.25μm)進(jìn)樣口溫度：220℃；檢測(cè)器溫度：250℃；流量：2.8mL/min；分流進(jìn)樣：不分流；進(jìn)樣量：1.0μL。柱升溫程序：初始溫度100℃，保持2min，然后以6℃/min速率升至230℃，保持10min。

測(cè)定擬除蟲(chóng)菊酯農(nóng)藥，檢測(cè)器：ECD；色譜柱：DB-1色譜柱(30m×320μm，0.25μm)進(jìn)樣口溫度：220℃；檢測(cè)器溫度：250℃；流量：2.8mL/min；分流進(jìn)樣：不分流；進(jìn)樣量：1.0μL。柱升溫程序：初始溫度100℃，保持2min，然后以6℃/min速率升至230℃，保持10min。

1.4 前處理

1.4.1 提取 稱(chēng)取粉碎后的海鮮菇樣品25g，用乙腈50mL勻漿提取2min，過(guò)濾，濾液中加入5～7g氯化鈉的具塞量筒中，振蕩后靜置30min后分層，移取10mL上層液于10mL試管中。

1.4.2 FPD檢測(cè)器測(cè)定的樣品 將待測(cè)液經(jīng)氮吹至近干，用丙酮定容至5mL，漩渦混勻；靜置10min，取上清液經(jīng)0.2μm有機(jī)濾膜過(guò)濾后上機(jī)進(jìn)樣檢測(cè)。

1.4.3 ECD檢測(cè)器測(cè)定的樣品 將待測(cè)液經(jīng)氮吹全干，用正己烷定容到2mL，漩渦混勻；靜置10min，經(jīng)固相萃取柱凈化，先用5mL正己烷：丙酮(9：1)活化，再用5mL正己烷平衡，活化液和平衡液棄去，樣品經(jīng)SPE小柱過(guò)濾(10mL的正己烷：丙酮(9：1)濾液)，用具塞量筒收集。再次氮吹至5mL以下，用正己烷定容至5mL，取上清液經(jīng)0.2μm有機(jī)濾膜后上機(jī)進(jìn)樣檢測(cè)。

2 結(jié)果與討論

2.1 海鮮菇基質(zhì)色譜圖 按照1.3的色譜條件和1.4實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)，有機(jī)磷農(nóng)藥A組標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜圖(圖1)；有機(jī)磷農(nóng)藥B組標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜圖(圖2)；除蟲(chóng)菊酯類(lèi)農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖(圖3)；GC-FPD檢測(cè)器條件下海鮮菇色譜圖(圖4)；GC-ECD檢測(cè)器條件下海鮮菇色譜圖(圖5)。由圖可見(jiàn)，海鮮菇的化學(xué)成分對(duì)本方法的農(nóng)藥殘留分析基本沒(méi)有影響且農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)溶液峰形較好，因此該實(shí)驗(yàn)條件可準(zhǔn)確定性、定量。

圖1 有機(jī)磷農(nóng)藥A組分標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜圖

敵敵畏(6.65min)、乙酰甲胺磷(12.08min)、二嗪磷(14.33min)、久效磷(15.77min)甲基嘧啶磷(16.55min)、甲基對(duì)硫磷(17.06min)、馬拉硫磷(17.517min)、甲基異柳磷(18.25min)、喹硫磷(18.49min)、丙溴磷(19.74min)。

圖2.有機(jī)磷農(nóng)藥B組標(biāo)準(zhǔn)色譜圖

甲胺磷(8.33min)、甲拌磷(13.14min)、氧樂(lè)果(14.21min)、樂(lè)果(15.91min)、毒死蜱(16.96min)、倍硫磷(17.41min)、殺螟硫磷(17.61min)、對(duì)硫磷(18.08min)、水胺硫磷(18.58min)、三唑磷(24.37min)。

圖3.除蟲(chóng)菊酯農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)色譜圖

六六六-1(6.03min)、六六六-2(6.62)、五氯硝基苯(6.87min)、百菌清(7.13min)、乙烯菌核利(8.63min)三唑酮(10.25min)腐霉利(11.52min)、三氯殺螨醇(12.99min)、異菌脲(16.52)、聯(lián)苯菊酯、甲氰菊酯(17.29min)、三氟氯氰菊酯-1(18.54min)、三氟氯氰菊酯-2(18.86min)、氟氯氰菊酯(21.09min)、氯氰菊酯(21.63min)氰戊菊酯-1(22.91min)氰戊菊酯-2(23.32min)溴氰菊酯-1(23.94min)、溴氰菊酯-2(24.39min)。

圖4.GC-FPD檢測(cè)器條件下海鮮菇空白基質(zhì)色譜圖

圖5.GC-ECD檢測(cè)器條件下海鮮菇空白基質(zhì)色譜圖

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線 有機(jī)磷檢測(cè)：取農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)溶液配成質(zhì)量濃度為0.05、0.25、0.1、0.5、1.0mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)使用溶液。

菊酯檢測(cè)：取農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)溶液配成質(zhì)量濃度為0.005、0.01、0.1、1.0、2.0mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)使用溶液。

按色譜條件對(duì)混合標(biāo)準(zhǔn)使用溶液系列進(jìn)行測(cè)定，以各農(nóng)藥的質(zhì)量濃度與相應(yīng)的峰面積繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，其線性范圍均為0.01～5.0mg/L，線性回歸方程、相關(guān)系數(shù)(表1)。

從表1可以得出有機(jī)磷農(nóng)藥和菊酯類(lèi)農(nóng)藥線性較好，相關(guān)系數(shù)R2處于0.990～0.999之間，方法檢出限較低，符合國(guó)家的蔬菜農(nóng)殘檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)。

表1 有機(jī)磷農(nóng)藥和菊酯類(lèi)農(nóng)藥線性方程，相關(guān)系數(shù)R2

續(xù)表

2.3 精密度和回收試驗(yàn) 稱(chēng)取經(jīng)粉碎均勻后的海鮮菇25.00g，分別添加0.08、0.12、0.16mg/kg 3個(gè)濃度水平的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，靜置30min，按試驗(yàn)方法提取后進(jìn)行回收試驗(yàn)，平行測(cè)定9次，結(jié)果(表2)。

表2 海鮮菇中35種農(nóng)藥的3個(gè)濃度水平標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定回收率(ARR)和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)

續(xù)表

海鮮菇中農(nóng)藥的測(cè)定回收率在89%～116%之間，RSD在5.61%～20.91%之間。

2.4 樣品檢測(cè) 基于本研究建立的檢測(cè)方法，對(duì)金華地區(qū)蔬菜基地企業(yè)送檢的24份海鮮菇樣品進(jìn)行了上述35種農(nóng)藥殘留的檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果顯示未檢出上述農(nóng)藥殘留。

3 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)基于氣相色譜技術(shù)，利用火焰光度(FPD)檢測(cè)器和電子捕獲(ECD)檢測(cè)器建立了金華蔬菜基地海鮮菇中35種農(nóng)藥殘留同時(shí)檢測(cè)的方法。結(jié)果顯示35種農(nóng)藥在海鮮菇中添加回收率為89%～116%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在5.61%～20.91%之間；蔬菜自身差異對(duì)檢測(cè)結(jié)果并沒(méi)有明顯差異。該方法與以往文獻(xiàn)報(bào)道的方法比具有較高選擇性、靈敏度和較寬的線性范圍的特點(diǎn)，在25min內(nèi)將被測(cè)成分達(dá)到完全分離，操作簡(jiǎn)單、快速，可用于金華蔬菜基地生產(chǎn)的海鮮菇的質(zhì)量評(píng)價(jià)。