于新友，李天芝

(山東綠都生物科技有限公司，山東 濱州 256600)

布魯氏菌病(Bmcellosis)是由布魯氏菌引起的一種慢性傳染病。布魯氏菌能感染多種動(dòng)物，也可感人，是一種人獸共患病原菌，具有重要的公共衛(wèi)生學(xué)意義[1]。布魯氏菌病在世界各地都有廣泛流行，每年造成的經(jīng)濟(jì)損失高達(dá)數(shù)億美元。世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）將布魯氏菌病列入必須報(bào)告的動(dòng)物疫病，我國(guó)也將其列為的二類動(dòng)物疫病。20 世紀(jì)80 年代以前，該病在我國(guó)的流行較嚴(yán)重，20 世紀(jì)80 年代有所下降，自從20 世紀(jì)90 年代以后，疫情又呈回升勢(shì)頭，當(dāng)前我國(guó)布魯氏菌病防治形勢(shì)非常嚴(yán)峻[2]。布魯氏菌可分為多種類型，常見多發(fā)的主要有羊布魯氏菌、牛布魯氏菌和豬布魯氏菌。我國(guó)對(duì)布魯氏菌病的監(jiān)測(cè)與凈化重點(diǎn)主要集中自在牛和羊上，對(duì)豬布魯氏菌病關(guān)注度不夠。由于豬不生產(chǎn)奶制品，豬布魯氏菌在人類的發(fā)病幾乎全部是職業(yè)性的，包括豬場(chǎng)員工、獸醫(yī)和屠宰工人。1914 年，美國(guó)專家首次從豬流產(chǎn)胎兒體內(nèi)分離到豬布魯氏菌[3]。性成熟期的豬易感性增高，母豬表現(xiàn)為流產(chǎn)、死胎、不孕等，公豬表現(xiàn)為睪丸炎、腱鞘炎和關(guān)節(jié)炎等。文章主要從豬布魯氏菌病的病原學(xué)、流行病學(xué)、診斷及防控措施等幾個(gè)方面進(jìn)行闡述，以期為該病的防控提供參考。

1 病原學(xué)

布魯氏菌為革蘭氏陰性需氧桿菌， 菌體大小約為0.5 ～0.7 μm×0.6 ～1.5 μm[4]， 多單個(gè)存在，呈球形、球桿形或短桿形。無鞭毛，不能運(yùn)動(dòng)，不形成芽孢，有類莢膜樣結(jié)構(gòu)。該菌一般能分解葡萄糖產(chǎn)生少量酸，不分解甘露糖，不能產(chǎn)生靛基質(zhì)，觸酶陽性，不液化明膠，不凝固牛乳，不溶解紅細(xì)胞，吲哚、甲基紅和VP 試驗(yàn)陰性，不利用檸檬酸鹽。該菌為專性需氧菌，最適生長(zhǎng)溫度為37 ℃，最適pH 為6.6 ～7.4。細(xì)菌初代分離時(shí)需5%～10% CO2，對(duì)營(yíng)養(yǎng)要求高，培養(yǎng)基中需要含有血清、肝湯及葡萄糖等，且生長(zhǎng)緩慢，需要1 ～2周，甚至更長(zhǎng)時(shí)間。實(shí)驗(yàn)室傳代保存菌株2 ～3 d 內(nèi)即生長(zhǎng)良好，且對(duì)營(yíng)養(yǎng)要求低，普通培養(yǎng)基上也能生長(zhǎng)，血清肝湯瓊脂培養(yǎng)基上呈無色、濕潤(rùn)、圓形、邊緣整齊的小菌落。布魯氏菌包括6 個(gè)種20 個(gè)血清型，分別為羊種布魯氏菌(B.melitensis，也稱馬爾他布魯氏菌)有1、2、3 型，牛種布魯氏菌(B.abortus，也稱流產(chǎn)布魯氏菌)有1、2、3、4、5、6、7、9 型，豬種布魯氏菌(B.suis)1、2、3、4、5 型，犬種布魯氏菌(B.canis)。綿羊附睪種布魯氏菌(B.ovis)和沙林鼠種布魯氏菌(B.neotomae)各有1個(gè)生物型。其中羊種菌的毒力最強(qiáng)，豬種次之，牛種較弱。豬種布魯氏菌常見的為1 和3 型，在世界范圍廣泛分布，對(duì)人具有較強(qiáng)的致病性，具有的公共衛(wèi)生學(xué)意義；豬布魯氏菌2 型僅存在于歐洲，宿主為豬和歐洲野兔，對(duì)人無致病性；豬布魯氏菌4 型宿主為北極、西伯利亞等寒冷地區(qū)的馴鹿；豬布魯氏菌5 型宿主為烏克蘭等中亞地區(qū)的嚙齒類動(dòng)物。布魯氏菌革蘭氏染色為紅色，吉姆薩染色呈紫色，但這兩種染色法均不易著色，常用染色法為科茲洛夫斯基染色法，布魯氏菌染為紅色，其他細(xì)菌染為綠色或蘭色。該菌對(duì)外界環(huán)境抵抗力強(qiáng)[5]，糞便、土壤、污水和皮毛上細(xì)菌可存活1 ～4 個(gè)月，鮮乳中存活8 d，肉中存活2 個(gè)月，流產(chǎn)胎兒中存活75 d，陽光直射下存活4 h。對(duì)消毒劑抵抗力弱，常規(guī)消毒劑如來蘇爾、燒堿、福爾馬林溶液、新潔爾滅均能殺滅細(xì)菌。60 ℃ 30 min 或70 ℃ 5 min可迅速殺滅細(xì)菌，沸水中細(xì)菌迅速死亡。布魯氏菌對(duì)四環(huán)素、卡那霉素、利福平、鏈霉素等抗生素敏感。

2 流行病學(xué)

我國(guó)流行的豬布魯氏菌為1 型和3 型，均能感染牛、羊等其他動(dòng)物，也能感染人，是一種人獸共患病原菌。同樣羊、牛布魯氏菌也能感染豬和人，當(dāng)豬場(chǎng)附近存在羊場(chǎng)或場(chǎng)內(nèi)存在患布魯菌病病羊，則兩者容易發(fā)生交叉感染。人布魯氏菌病一般不由人傳人，僅能通過動(dòng)物傳染人。病豬和帶菌豬是主要傳染源。各品種和日齡豬均可感染，接近性成熟期豬易感性高，對(duì)妊娠期母豬和公豬危害嚴(yán)重。妊娠母豬主要表現(xiàn)為流產(chǎn)，母豬感染后通常只發(fā)生1 次流產(chǎn)，公豬則表現(xiàn)為不育。仔豬和老齡豬對(duì)該病具有一定抵抗力，癥狀表現(xiàn)不明顯，可隱性帶菌。病原菌隨病豬糞便、尿液、精液、流產(chǎn)胎兒、胎衣、羊水以及分泌物和排泄物等排出體外，污染飼料、飲水、用具及周圍環(huán)境，通過消化道、呼吸道、生殖道、結(jié)膜、健康及破損皮膚黏膜感染其他健康豬[6]。該病可通過吸血昆蟲傳播，也能通過胎盤感染進(jìn)行垂直傳播[7]。豬種布魯氏菌較牛、羊種布魯氏菌更易通過生殖道傳染。該病一年四季均可發(fā)生，豬繁殖期高發(fā)，呈一定區(qū)域流行性，新疫區(qū)常呈急性暴發(fā)，老疫區(qū)發(fā)病輕[8]。病原菌侵入機(jī)體后，首先在局部存活，后定居于淋巴結(jié)，并大量繁殖，后進(jìn)入菌血癥時(shí)期，菌血癥常在感染后2 周出現(xiàn)，持續(xù)時(shí)間約5 周[9]。菌體隨血流進(jìn)入肝、脾、骨髓、關(guān)節(jié)囊、健鞘、睪丸和乳腺等，在細(xì)胞長(zhǎng)期存在，并生長(zhǎng)繁殖，菌體外特殊蛋白外殼可保護(hù)其免受吞噬細(xì)胞吞噬。豬布魯氏菌病在豬群中傳播速度慢，傳染性不強(qiáng)，但因病原為細(xì)胞內(nèi)寄生菌，豬群一旦感染后，可長(zhǎng)期帶菌，當(dāng)環(huán)境不良或遭受應(yīng)激時(shí)可再次排菌，或引起豬發(fā)病。

3 診斷

豬布魯氏菌病潛伏期長(zhǎng)短不一，短的兩周，長(zhǎng)的可達(dá)半年。各種品種和年齡豬均易感，繁殖期豬癥狀表現(xiàn)明顯，感染豬不表現(xiàn)稽留熱或波浪熱，死亡率低，母豬表現(xiàn)為流產(chǎn)，流產(chǎn)可發(fā)生在妊娠任何階段，流產(chǎn)前癥狀表現(xiàn)不明顯，流產(chǎn)時(shí)伴隨陰唇和乳房腫脹，陰道有紅色分泌物流出，流產(chǎn)后常伴有體溫升高，子宮內(nèi)膜炎。流產(chǎn)胎兒胃內(nèi)容物黏稠、渾濁呈淡黃色，并含有像凝乳狀的絮狀物。胎衣變薄，上面有粟米至綠豆大小的灰白色硬結(jié)，外觀看像是鑲嵌著珍珠，又稱珍珠胎衣，結(jié)節(jié)內(nèi)充滿膿液。公豬病初體溫升高，精神不振，可表現(xiàn)為睪丸炎、附睪炎，單側(cè)或雙側(cè)睪丸腫大、變硬，觸摸疼痛，病情嚴(yán)重者睪丸極度腫大，后期出現(xiàn)萎縮，病豬性欲減退甚至消失，失去配種的種用價(jià)值[10]。種豬也會(huì)發(fā)生關(guān)節(jié)炎，一后肢或雙后肢關(guān)節(jié)腫大、疼痛，關(guān)節(jié)囊內(nèi)充滿液體，嚴(yán)重者癱瘓，喪失運(yùn)動(dòng)能力。

根據(jù)流行情況、臨床癥狀及特征性病變可作出初步診斷，需要注意的是，應(yīng)和一些類似的疾病做出鑒別診斷，如要確診可采用實(shí)驗(yàn)室方法檢測(cè)，最常用的實(shí)驗(yàn)室方法檢測(cè)有細(xì)菌染色鏡檢、細(xì)菌分離培養(yǎng)、抗體檢測(cè)法和分子生物學(xué)方法。常用的細(xì)菌染色法為柯茲羅夫斯基染色，具體操作為標(biāo)本涂片、火焰固定，滴加0.5%沙黃液，加熱至出現(xiàn)氣泡（注意不能煮沸），2 ～3 min后，流水洗去沙黃染料，滴加1%孔雀綠或1%美蘭進(jìn)行復(fù)染，約30 ～50 s，水洗，待干。油鏡觀察：布魯氏菌呈紅色球桿狀，其他細(xì)菌呈綠色或蘭色。豬布魯氏菌分離困難，周期長(zhǎng)，分離時(shí)一定要選取新鮮病料樣本，可選用流產(chǎn)材料，如羊水、陰道分泌物或菌血癥時(shí)期全血或淋巴結(jié)、脾臟等組織，初代分離培養(yǎng)最適生長(zhǎng)溫度為37 ℃，含有5% ～10% CO2的氣體溫箱中培養(yǎng)，一般需4 ～6 d，有的甚至21 ～30 d 才能長(zhǎng)出單菌落。通過體重350 ～400 g 的豚鼠接種后可提高分離率，培養(yǎng)基可選用馬丁瓊脂培養(yǎng)基和肝浸液培養(yǎng)基。

布魯氏菌病抗體檢測(cè)法主要有補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)、全乳環(huán)狀凝集試驗(yàn)、虎紅平板凝集反應(yīng)、試管凝集試驗(yàn)、ELISA 和膠體金法。補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)是一種公認(rèn)準(zhǔn)確性最高的方法，同時(shí)也是國(guó)際貿(mào)易中布魯氏菌病診斷的指定方法之一，操作繁瑣，適合試驗(yàn)應(yīng)用。全乳環(huán)狀凝集試驗(yàn)是檢測(cè)乳汁中布魯氏菌病抗體常用方法，主要用于牛奶，對(duì)豬來說意義不大，且不適用于患乳房炎母牛乳、初乳、脫脂乳和煮沸過的乳。虎紅平板凝集抗原為商品化試劑，我國(guó)生產(chǎn)該產(chǎn)品的公司有青島立見診斷發(fā)展中心、哈爾濱維科生物技術(shù)開發(fā)公司、唐山怡安生物工程有限公司、哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司、青島易邦生物工程有限公司。具體操作為取被檢血清與虎紅抗原各30 μL，滴加于平板上混勻，攪拌混勻，放置4 ～10 min 后。出現(xiàn)凝集者為陽性，否則為陰性，每次需設(shè)陽性對(duì)照和陰性對(duì)照，該法主要檢查抗體，為目前基層最常用方法?；⒓t平板凝集反應(yīng)操作簡(jiǎn)單，反應(yīng)時(shí)間短，適合大量樣本初篩，易出現(xiàn)假陽性結(jié)果，對(duì)檢測(cè)的陽性樣本，可進(jìn)一步做試管凝集試驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證，試管凝集試驗(yàn)操作繁瑣，結(jié)果觀察需24 h 后，我國(guó)商品化布魯氏菌病試管凝集試驗(yàn)抗原生產(chǎn)公司有唐山怡安生物工程有限公司、哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司和青島易邦生物工程有限公司。具體操作為抗原使用時(shí)作1 ∶20 稀釋，被檢血清分別作1 ∶12.5、1 ∶25、1 ∶50、1 ∶100、1 ∶200 稀 釋，同時(shí)設(shè)陰、陽性血清對(duì)照。 取抗原和血清各加0.5 mL 于試管中，置37 ℃作用于24 h，觀察凝集試驗(yàn)結(jié)果，1 ∶50“++”為陽性；1 ∶25 “+”為可疑。試驗(yàn)結(jié)果為“可疑”的動(dòng)物，應(yīng)于3 ～4 周后重新采血檢驗(yàn)，仍為可疑時(shí)，判為陽性。隨著快速凝集試驗(yàn)的改進(jìn)及ELISA 等檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展，該法缺點(diǎn)不斷暴露，發(fā)達(dá)國(guó)家已經(jīng)棄用該法。當(dāng)前我國(guó)商品化布魯氏菌ELISA 抗體檢測(cè)試劑盒主要有武漢科前生物股份有限公司、長(zhǎng)春西諾生物科技有限公司、洛陽萊普生信息科技有限公司、哈爾濱國(guó)生生物科技股份有限公司、哈爾濱維科生物技術(shù)開發(fā)公司生產(chǎn)的布魯氏菌競(jìng)爭(zhēng)ELISA 抗體檢測(cè)試劑盒。北京明日達(dá)科技發(fā)展有限責(zé)任公司生產(chǎn)的布魯氏菌間接抗體檢測(cè)試劑盒。膠體金試紙條有浙江迪恩生物科技有限公司生產(chǎn)的布魯氏菌抗體檢測(cè)試紙條。

分子生物學(xué)方法如PCR、熒光PCR 方法已在各種動(dòng)物疾病疾病檢測(cè)領(lǐng)域廣泛應(yīng)用，檢測(cè)速度快、敏感性高、特異性好，主要針對(duì)病原檢測(cè)，與抗體檢測(cè)法不同，可判定現(xiàn)癥感染，也可對(duì)各豬、牛、羊等個(gè)型布魯氏菌做出鑒別診斷。LAMP 檢測(cè)方法適合基層實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用，但檢測(cè)敏感性太高，有時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)假陽性結(jié)果。臨床上要根據(jù)自身?xiàng)l件及目的選擇合適的檢測(cè)方法，有時(shí)需多種方法綜合應(yīng)用，從而做出診斷，指導(dǎo)臨床布魯氏菌病防控。

4 防控措施

堅(jiān)持自繁自養(yǎng)，全進(jìn)全出的飼養(yǎng)模式，減少引種，引種時(shí)做好隔離檢疫工作，檢測(cè)合格后方可并入大群飼養(yǎng)。定期對(duì)豬群檢測(cè)，尤其是豬群中出現(xiàn)母豬流產(chǎn)，公豬睪丸腫大等病例時(shí)，盡快檢測(cè)確診，陽性豬堅(jiān)決淘汰。加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，飼喂優(yōu)質(zhì)全價(jià)配合飼料，不飼喂霉變飼料。做好常規(guī)疫苗接種，提高豬群免疫力。豬舍提供適宜的溫度、濕度，降低豬群密度，減少豬群應(yīng)激。養(yǎng)殖場(chǎng)內(nèi)開展滅蚊蠅和滅鼠工作，加強(qiáng)環(huán)境清潔衛(wèi)生，防止外來疫病傳入。豬場(chǎng)遠(yuǎn)離牛羊等養(yǎng)殖場(chǎng)，禁止豬場(chǎng)內(nèi)養(yǎng)貓狗。豬場(chǎng)內(nèi)環(huán)境保持清潔衛(wèi)生，定期清理糞便，每周用5% 來蘇兒、10% ～20% 石灰乳、2%氫氧化鈉消毒1 次，流產(chǎn)胎兒、胎衣、羊水、分泌物及被污染圈舍、用具等均應(yīng)徹底消毒。做好滅鼠及滅蚊蠅工作，防止其機(jī)械帶菌傳播。

布魯氏菌是兼性細(xì)胞內(nèi)寄生菌，細(xì)胞免疫在其防控中其主要作用，血清抗體只能作用于細(xì)胞外的布魯氏菌，所以死菌苗免疫所產(chǎn)生的免疫力非常微弱，臨床無應(yīng)用價(jià)值。對(duì)豬布魯氏菌也可接種豬布魯氏菌病活疫苗（S2 株）進(jìn)行防控，該疫苗可口服、皮下或肌肉注射接種豬，劑量為2 頭份，免疫效果好，安全性高，妊娠母豬也可接種，但對(duì)人具有一定的致病性，免疫時(shí)做好自身防護(hù)，并妥善處理剩余疫苗及所用器具，為確保疫苗免疫效果，免疫前后3 d內(nèi)，豬禁止飼喂抗生素。疫苗免疫保護(hù)率在80%左后，豬群免疫后不能阻止豬排毒，對(duì)黏膜攻毒感染有一定保護(hù)力，但母豬對(duì)來自公豬的交配感染不能提供保護(hù)。同牛、羊型布魯氏菌一樣，均為光滑型，產(chǎn)生的抗體難以與野毒感染產(chǎn)生的抗體相區(qū)別。當(dāng)前該疫苗主要用于牛、羊布魯氏菌病免疫和預(yù)防，豬群免疫接種率不高。

對(duì)布魯氏菌病抗生素治療效果不佳，多種抗生素均能起到一定的治療作用，如鏈霉素、大觀霉素、利福平、多黏菌素B、強(qiáng)力霉素、新霉素、四環(huán)素、復(fù)方磺胺甲惡唑，但菌體很難徹底殺滅，易復(fù)發(fā)，聯(lián)合用藥能提高抗菌效果，如利福平+四環(huán)素、鏈霉素+強(qiáng)力霉素等。及早確診后，足量用藥是治療布魯氏菌病的關(guān)鍵。豬群一旦感染布魯氏菌后很難根除，豬只可長(zhǎng)期帶菌、排毒，抗生素治療價(jià)值不大，因此，一般不建議進(jìn)行治療，而采取群體檢疫、淘汰或屠宰的對(duì)策。

5 小結(jié)

布魯氏菌病在全球廣泛流行，給養(yǎng)殖業(yè)造成嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失，并嚴(yán)重危害人類健康。人的布魯氏菌病一般由動(dòng)物傳播而來，一旦發(fā)病將引起嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題，人患病后需長(zhǎng)期用抗生素治療，會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重后遺癥。當(dāng)前全國(guó)布魯氏菌病疫情處于歷史高發(fā)期，根除布魯氏菌病傳播的根本措施是撲殺患病動(dòng)物，消滅傳染源，因此快速檢出陽性動(dòng)物并撲殺是有力措施。布魯氏菌病不是烈性傳染病，不引起豬群大批死亡，長(zhǎng)期得不到重視，相對(duì)關(guān)注度高的是牛羊布魯氏菌病，豬群布魯氏菌病的防控很少被人們提及，但豬布魯氏菌病可造成豬群繁殖障礙性疾病，也可對(duì)豬群造成嚴(yán)重?fù)p失，抗生素等治療時(shí)雖然可暫時(shí)緩解癥狀，減少排菌量，當(dāng)豬群遭受應(yīng)激或有新的豬只進(jìn)入豬群時(shí)，該病可再度暴發(fā)或流行。豬場(chǎng)養(yǎng)殖人員及相關(guān)從業(yè)工作者，一定要重視該病防控，防止自身被感染。