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(長江大學(xué)園藝園林學(xué)院，湖北 荊州 434025)

巨紫荊，學(xué)名：CercisgiganteaCheng et Keng f.，為豆科(Leguminosae)紫荊屬高大落葉喬木，直徑可達(dá)50 cm，樹高可達(dá)15 m，是我國現(xiàn)存特有、極少的鄉(xiāng)土樹種，主要分布在湖北、浙江、河南、湖南等省，壽命較長，生長速度較快，耐修剪，能夠適應(yīng)干旱、水漬等較為惡劣的環(huán)境。巨紫荊春季觀花，夏季觀葉，秋季觀果，冬季觀干，具有極高的觀賞價值，在景觀、道路園林綠化等方面具有廣闊的應(yīng)用前景，巨紫荊具有質(zhì)硬、耐腐蝕、少開裂等良好結(jié)構(gòu)性能，是良好家具、建筑制作的用材。豆科紫荊屬在自然條件下主要是靠種子進(jìn)行繁殖，近些年來關(guān)于豆科紫荊屬的種子研究較多，研究表明，種子具有硬實(shí)性和休眠特性[1-2]。有關(guān)巨紫荊研究主要集中于嫁接繁殖[3]、組織培養(yǎng)快繁[4]、引種栽培繁殖[5]以及園林植物應(yīng)用[6]等方面，而有關(guān)巨紫荊種子休眠特性及快速萌發(fā)探究較少，金繼良等[7]研究發(fā)現(xiàn)，以80 ℃熱水結(jié)合250 mg/L 赤霉素進(jìn)行沙藏，可促進(jìn)種子萌發(fā)，但沒有具體說明沙藏天數(shù)。盧芳等認(rèn)為，濃硫酸腐蝕結(jié)合赤霉素浸泡再低溫層積60 d能打破休眠[8]。目前關(guān)于巨紫荊種子形態(tài)解剖以及快速打破休眠的方法還未見報道。巨紫荊種子解剖結(jié)構(gòu)探究、如何在較短時間打破休眠使其萌發(fā)鮮有報道。因此，通過實(shí)驗(yàn)對巨紫荊種子外觀形態(tài)、種子解剖、破除種皮結(jié)合激素處理等方面進(jìn)行探索研究，以期為巨紫荊種子休眠特性研究提供一定理論參考，并為種子快速育苗繁殖及其栽培提供實(shí)踐生產(chǎn)指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 供試材料

2017年11月，巨紫荊種子取自湖北省神農(nóng)架林區(qū)五峰山上，海拔1 100 m左右。巨紫荊莖粗10 cm左右，高10 m以上，樹上結(jié)有大量果莢。采收成熟果實(shí)帶回長江大學(xué)實(shí)驗(yàn)室，將果實(shí)去殼、凈種、陰干，放置常溫干燥環(huán)境保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 果實(shí)和種子形態(tài)指標(biāo)觀察與測定

1.2.1 百粒重

隨機(jī)選取100粒正常種子在電子天平上稱重，重復(fù)3次。

1.2.2 果實(shí)、種子類型觀察與解剖

隨機(jī)挑選出成熟完整的20個果莢和50粒種子，用電子游標(biāo)卡尺和20 cm刻度尺測定果莢和種子的長度、寬度和厚度。挑選不同類型的種子，用解剖鏡進(jìn)行形態(tài)觀察解剖并作比較分析。

1.2.3 種子形態(tài)解剖

隨機(jī)選擇種粒飽滿、富有光澤的完整種子用解剖刀縱切，在體式顯微鏡下觀察取照。

1.3 處理方法

1.3.1 種子吸水曲線測定

1) 種子處理。

A.濃硫酸腐蝕處理：精選完整飽滿種子90粒，將樣品每30粒分別放置于3個裝有一定量濃硫酸的燒杯中浸沒，并計(jì)時25，35，45 min取出樣品并在流水下沖洗3 min左右。

B.種皮破皮處理：精選完整飽滿種子30粒，用普通砂紙隨機(jī)磨損種皮，使其有一定損傷，待用。2種處理同時以完整種子作為對照。

2) 吸水試驗(yàn)。

精選完整飽滿種子30粒，將濃硫酸處理、砂紙?zhí)幚?、完整種子所有樣品分類放入不同裝有足夠量水的容器中，置于25 ℃左右的室溫內(nèi)并開始計(jì)時，初始每隔3 h取出樣品稱重1次，后由吸水變化調(diào)整為每隔12 h、24 h取出樣品稱重1次，稱重前吸干種子表面的水分，直至2次吸水測定的值接近恒值為止。

種子凈吸水率(%)=(吸水后樣品的重量-吸水前樣品重量)/吸水前樣品重量×100%。

1.3.2 種子發(fā)芽試驗(yàn)

1) 種子胚根端處理。

精選飽滿種子3 200粒，放置在現(xiàn)配0.1%高錳酸鉀溶液中消毒15 min，清水沖洗3次，放置在清水中常溫浸泡3 d，每天定時更換清水，浸泡完畢后再清水沖洗3次，用解剖刀對所有種子的胚根端2 mm左右處進(jìn)行切除，置于50，100，150 mg/L的赤霉素水溶液中，浸泡12 h和48 h，倒出浸泡液，反復(fù)清洗種子，以在清水中浸泡12 h和48 h的種子作為對照。

2) 種子子葉端處理。

參照劉雅琦等[9]的方法，種子子葉端處理中，要用解剖刀對所有種子的子葉端2 mm左右處進(jìn)行切除，其余處理同種子胚根端處理。

3) 濃硫酸、破皮處理對巨紫荊種子發(fā)芽的影響。

以完整種子作為對照，以濃硫酸、破皮處理后種子為實(shí)驗(yàn)材料，其余條件保持相同。

以上處理的種子采用培養(yǎng)皿發(fā)芽法，置于生態(tài)培養(yǎng)箱(黑暗12 h/光照12 h交替進(jìn)行，25 ℃)中進(jìn)行發(fā)芽試驗(yàn)。每個處理選擇100粒種子，平行做4次，連續(xù)進(jìn)行10 d的培養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)期間，逐日定時觀察，記錄種子發(fā)芽數(shù)和發(fā)霉數(shù)，僅以胚根長為種子的一半作為種子發(fā)芽標(biāo)準(zhǔn)，測定巨紫荊種子的發(fā)芽率。

1.3.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

用Microsoft Excel 2016軟件錄入試驗(yàn)數(shù)據(jù)，對種子凈吸水率、種子萌發(fā)率進(jìn)行曲線作圖，然后根據(jù)數(shù)據(jù)及圖表進(jìn)行分析總結(jié)。

2 結(jié)果與分析

2.1 種子質(zhì)量及形態(tài)與解剖

2.1.1 種子質(zhì)量測定

經(jīng)測定完整成熟的巨紫荊果莢長度平均為(11.39±0.698 0)cm，寬度平均為(13.24±0.652 2)mm，厚度平均為(0.908 5±0.174 9)mm；巨紫荊種子的百粒重平均為(2.162 8±0.051 58)g，長度平均為(4.999 2±0.189 4)mm，寬度平均為(4.405±0.147 0)mm，厚度平均為(1.496±0.109 1)mm。

2.1.2 種子形態(tài)觀察

如版圖所示，從果莢中收集種子有以下幾種類型：1為完整飽滿種粒，2為黑色空癟種粒，3為綠色空癟種粒，4為黃色空癟種粒，5為昆蟲幼蟲蠶食種粒，6為病菌感染種粒，7為黑色圓潤種粒，8為胚根端壞死種粒。其中1為完全可育類型，2～8屬于皺縮、空癟、病蟲害等敗育類型，在種子催芽試驗(yàn)前，應(yīng)精挑完整飽滿可育型種子作為供試材料，剔除空癟皺縮病蟲害等敗育種粒。

注:1為正常種子；2～4為不同顏色空癟粒種子；5為蟲食種子；6為病菌侵染種子；7為黑色圓潤種子；8為胚根壞死種子；9～12為完整種子觀察與解剖；13～15為不同處理下種子3種萌發(fā)方式。版圖

2.1.3 種子形態(tài)觀察與解剖

由版圖-9可知，巨紫荊種子為卵圓形，種皮呈綠色，具有明顯種臍，質(zhì)密，種皮硬化。以完整種子進(jìn)行縱切解剖觀察，如版圖-10和版圖-11，種臍部位有較發(fā)達(dá)的維管系統(tǒng)，最外層是逐漸加厚的柵欄組織，其細(xì)胞壁緊縮，子葉占據(jù)著種子絕大部分，版圖-12成熟硬實(shí)種子子葉呈黃色，種皮下方存在有透水透氣白色管，子葉、胚根形態(tài)可見，子葉較大發(fā)育完全，為雙子葉，胚根略偏于種臍，周圍具有空室。高度木質(zhì)化具有較厚的柵欄組織所形成的種臍，加強(qiáng)了種皮的厚度，也保證了巨紫荊種皮的致密性，因而阻礙了外界的水分、空氣等滲透到種皮的內(nèi)部，這可能是巨紫荊種子難透水透氣的原因，也可能是導(dǎo)致種子休眠的主要原因。

2.2 不同處理對種子吸水率的影響

由圖1可知：完整種子在前24 h內(nèi)，吸水緩慢，24 h后吸水趨于平穩(wěn)；濃硫酸處理不同時間后，在前24 h內(nèi)吸水速率較快，隨著浸泡時間越長，吸水速率越快，24 h后仍在少量吸水，但趨于平穩(wěn)；破皮種子在前24 h內(nèi)，吸水速率快，凈吸水率明顯升高，在24 h后吸水緩慢趨于平穩(wěn)。完整種子、破皮種子、濃硫酸浸泡25，35，45 min處理最高吸水率分別為7.5%、102.6%、103.2%、101.4%、105.6%，濃硫酸浸泡處理45 min吸水率最高，為完整種子的14.08倍，為破皮種子的1.03倍。由此可見，種皮透水性能很差，用物理和化學(xué)方法處理種皮吸水率有明顯提升，且處理時間越長，吸水率越大，表明種皮具有不透水不透氣的特性，是巨紫荊種子休眠的一個重要原因。

圖1 不同處理下巨紫荊種子吸水速率

2.3 不同時間、濃度赤霉素對巨紫荊種子萌發(fā)的影響

紫荊屬植物繁殖途徑主要是以種子進(jìn)行，其種子具有一定的休眠特性，參考劉雅琪等[9]有關(guān)對種子破皮的方法以及米建華等[10]破除紫荊種子休眠的方法，以完整種子作為對照，通過對巨紫荊種子進(jìn)行砂紙破損種皮邊緣、濃硫酸腐蝕打破種皮限制休眠，赤霉素溶液浸泡24 h；以及直接以不同濃度的赤霉素處理，在冰箱低溫層積不同天數(shù)，在生態(tài)培養(yǎng)箱中進(jìn)行發(fā)芽試驗(yàn)。

不同處理對巨紫荊種子萌發(fā)產(chǎn)生的3種出芽方式如版圖-13～版圖-15。版圖-13為切除種子胚根端后，種子以胚根生長方式發(fā)芽，版圖-14為切除種子子葉端后，種子發(fā)芽過程為子葉先出，這是一種異狀發(fā)芽，不能算正常發(fā)芽。版圖-15為切除種子子葉端結(jié)合赤霉素處理，以胚根突破種皮生長方式發(fā)芽。其中切除種子胚根端全部以版圖-13方式發(fā)芽，切除種子子葉端大部分以版圖-14方式發(fā)芽，而僅有少量種子以版圖-15方式發(fā)芽，進(jìn)一步說明種子萌發(fā)受種皮限制，存在機(jī)械障礙。

巨紫荊種子萌發(fā)情況見圖2和圖3。由圖2、圖3可知：種子消毒15 min，清水浸泡3 d，切除種子胚根端及子葉端的2 mm左右后，種子第4天開始發(fā)芽，能打破機(jī)械障礙，可快速促使種子萌發(fā)，在相同處理中使用赤霉素浸泡對種子萌發(fā)具有明顯的促進(jìn)作用；切除種子胚根端對比切除種子子葉端，對種子萌發(fā)有更好的效果，再使用激素浸泡12 h后，最高萌發(fā)率可達(dá)90%，使用激素浸泡48 h后，最高萌發(fā)率為6.67%；相同處理中，不同濃度激素對種子萌發(fā)效果不同，在種子最初萌發(fā)過程中，低濃度激素有一定促進(jìn)作用，高濃度激素有一定抑制作用。較長時間激素浸泡切除之后的種子對萌發(fā)存在一定的毒害作用，清水浸泡切除子葉端種子對種子有一定促進(jìn)作用。

試驗(yàn)結(jié)果表明，由于種皮限制，胚根較難突破種皮，種子不萌發(fā)或萌發(fā)率較低，萌發(fā)時間較長，種子污染發(fā)霉率高，不具備以巨紫荊種子作為快速育苗繁殖的條件，其中通過切除子葉端的種子，大部分以子葉先出，胚根不能正常生長，這屬于異狀發(fā)芽。因而，采用直接切除巨紫荊種子胚根端，形成一個不完整種子，快速打破由于種皮種臍限制產(chǎn)生的休眠，促使種子萌發(fā)，在赤霉素處理的條件下，使其快速萌發(fā)，提高萌發(fā)率。

圖2 不同濃度赤霉素處理12 h下破皮巨紫荊種子萌發(fā)情況

圖3 不同濃度赤霉素處理48 h下破皮巨紫荊種子萌發(fā)情況

3 討論與結(jié)論

3.1 巨紫荊種子休眠原因

豆科類植物種子普遍具有硬實(shí)性，由于大多硬實(shí)種子表皮堅(jiān)硬，對種子產(chǎn)生機(jī)械障礙作用，從而導(dǎo)致種子休眠。Juan Niu等從分子角度發(fā)現(xiàn)，種子硬實(shí)性是與細(xì)胞壁生物合成相關(guān)[11]；楊期和等認(rèn)為，導(dǎo)致種子休眠與硬實(shí)種子透水透氣性能較差相關(guān)，從而對胚的生長產(chǎn)生機(jī)械限制[12]；Emine Burcu Yeilyurt等發(fā)現(xiàn)，通過對硬實(shí)種子進(jìn)行機(jī)械損傷可以提高發(fā)芽率[13]。巨紫荊種子休眠原因也較復(fù)雜，由于巨紫荊種子表面光滑，質(zhì)密，種皮硬化，從種子吸水速率曲線可以看出，其具有硬實(shí)性，完整種子吸水能力極弱，物理、化學(xué)方法處理種皮之后，吸水效果明顯，說明種皮對種子吸水有嚴(yán)重阻礙作用；巨紫荊種子種臍部較厚，柵欄組織緊密，導(dǎo)致水分較難從種臍滲透，其透水、透氣性極差，水分、氣體等很難自由進(jìn)入種子中。對于硬實(shí)種子，采用的方法主要有物理、化學(xué)和生物學(xué)的方法。本實(shí)驗(yàn)在切除種子胚根端及子葉端破除機(jī)械障礙后，種子能夠萌發(fā)，但切除子葉端后，種子發(fā)芽過程是以子葉先出，胚根不正常生長，推測胚根端可能存在抑制物質(zhì)或生理休眠，僅靠赤霉素處理，不能使胚根萌發(fā)啟動。這是一種異狀發(fā)芽，不能算正常發(fā)芽的種子。清水浸泡12 h最高萌發(fā)率為40%，浸泡48 h最高萌發(fā)率為73.3%。這進(jìn)一步說明種子由于種皮的機(jī)械障礙而限制巨紫荊種子的萌發(fā)，是產(chǎn)生種子休眠的重要原因。

3.2 不同組合處理對種子發(fā)芽特性的影響

赤霉素處理48 h，較長時間浸泡對破損種皮的種子會有一定的毒害作用，表現(xiàn)為種子變黑壞死、長菌感染等，清水浸泡48 h后可能使種子抑制物濃度降低，對種子萌發(fā)具有一定促進(jìn)作用，因而赤霉素處理時間以12 h為宜。對比切除種子胚根與子葉端在不同濃度激素處理下，切除胚根端較切出子葉端種子，萌發(fā)率高，萌發(fā)時間快，說明巨紫荊種子發(fā)芽方式主要靠胚根生長突破種皮限制，赤霉素處理能使種子快速萌發(fā)，增加發(fā)芽率，因此破除巨紫荊種子種皮限制休眠宜選擇切除種子胚根端。由于種子受機(jī)械破損嚴(yán)重，在培養(yǎng)過程中能在較短時間內(nèi)發(fā)芽，種子污染率低，種子利用效率高。說明破除種皮限制，打破種子機(jī)械障礙后，種子能直接萌發(fā)，一定濃度赤霉素的處理能夠加快種子萌發(fā)，對巨紫荊種子萌發(fā)有促進(jìn)作用，表現(xiàn)為萌發(fā)率大幅度增加、發(fā)芽整齊度提高、發(fā)芽速度加快，其中在切除胚根端，使用150 mg/L GA3處理12 h后，效果最好，萌發(fā)率最高為90%。

3.3 巨紫荊種子敗育情況分析

自然條件下巨紫荊成年樹所結(jié)果莢較多，但其種子空癟、蟲食、菌染等較嚴(yán)重，而且果莢存在落果現(xiàn)象，提早落的果莢，里面的種子敗育更加嚴(yán)重，污染率也較高，果莢提前脫落可能是昆蟲、病害所致。成年巨紫荊在結(jié)果數(shù)量與避免蟲食方面達(dá)到一種平衡，樹體營養(yǎng)對果實(shí)以及種子發(fā)育也有重要影響。巨紫荊結(jié)籽量巨大，對資源需求量較大，母株很難滿足其資源需求，從而導(dǎo)致巨紫荊種子敗育率高。而主要傳粉昆蟲影響豆科植物結(jié)實(shí)，胚珠敗育可能導(dǎo)致結(jié)實(shí)率低[14]，高成杰等認(rèn)為，昆蟲的寄生對果莢內(nèi)種子的敗育產(chǎn)生影響，敗育種子數(shù)與被寄生種子數(shù)呈正相關(guān)[15]，因此昆蟲幼蟲蠶食種子，可能是傳粉昆蟲在授粉過程中把卵傳進(jìn)子房，蟲卵發(fā)育過程中以種子為食，導(dǎo)致種子敗育率較高。在采集的巨紫荊果莢中，每個果莢平均含有種子(7.35±0.9333)粒，平均敗育種子(2.95±1.099)粒，平均敗育率為40.1%。種子敗育率高是由多方面造成，可能與細(xì)菌感染、昆蟲幼蟲寄生蠶食，還可能與樹體資源限制或者授粉受精不足有關(guān)，導(dǎo)致種粒皺縮空癟壞死，還應(yīng)開展傳粉生物學(xué)的研究，對其授粉受精進(jìn)行觀察，進(jìn)一步確定敗育原因。因此在種子選育中，獲得高質(zhì)量的種子是比較重要的，在進(jìn)行種子篩選時，選擇體積膨大、完整無缺口、無病菌綠皮種子進(jìn)行育苗，這類種子為有活力的種子。

3.4 幼苗移栽情況分析

對不同發(fā)芽程度的幼苗進(jìn)行移栽，發(fā)現(xiàn)待子葉完全脫離種殼后再移栽至基質(zhì)中，部分巨紫荊幼苗枯萎死亡。對其根系觀察發(fā)現(xiàn)，根系出現(xiàn)表皮光滑無毛，或根毛死亡脫落形成黑色毛孔，或根系較短發(fā)育不良，原因可能存在移栽方法不當(dāng)，使幼苗根系無法充分接觸基質(zhì)或部分根系被折斷損傷，幼苗根系缺水，根毛死亡脫落最終導(dǎo)致幼苗死亡。對根系進(jìn)一步觀察發(fā)現(xiàn)，有根結(jié)線蟲和紅蜘蛛的存在，對巨紫荊的根系造成嚴(yán)重影響，原因可能是育苗基質(zhì)未進(jìn)行消毒殺菌處理，進(jìn)而導(dǎo)致幼苗死亡。因此，在育苗過程中，應(yīng)對育苗基質(zhì)進(jìn)行殺蟲滅菌處理，以減少土傳病害對幼苗的影響。而選擇發(fā)芽種子帶殼進(jìn)行移栽，每天定時補(bǔ)充水分，幼苗正常生長，莖稈粗壯，扎土較深。所以，巨紫荊種子幼苗移栽以切除種子胚根端，100 mg/L GA3處理12 h，胚根長為種子長一半為宜。

4 結(jié) 論

巨紫荊種子具有硬實(shí)現(xiàn)象，在催芽前要先進(jìn)行凈種、剔除敗育粒、消毒等處理，然后以清水浸泡巨紫荊種子3 d，清水要求每天換，切除巨紫荊種子胚根端2 mm左右，用100 mg/L赤霉素處理已切除胚根端種子12 h，在生態(tài)培養(yǎng)箱培養(yǎng)(黑暗12 h/光照12 h交替進(jìn)行，25 ℃中進(jìn)行培養(yǎng)，能夠快速有效打破休眠，第3天開始萌發(fā)，第5天達(dá)到最高萌發(fā)率為80%。