薩礎拉,朝木日麗格,韓金美,王樹梅

(內蒙古醫(yī)科大學,呼和浩特 010110)

失眠是一種影響健康的常見疾病。隨現(xiàn)代社會經濟的高速發(fā)展、生活節(jié)奏不斷加快，失眠日益成為困擾人們身心健康的隱患殺手。蒙醫(yī)理論認為，引起失眠的原因有外因及內因兩種。外因有勞逸失調、受到驚嚇、思慮過多等；內因是體內“赫依”增多紊亂，使“三根”失調，引起心、腦、腎、血管、神經相關疾病，從而導致失眠[1]。蒙藥蘇格木勒-3湯為蒙醫(yī)臨床常用主治失眠的方劑，始載于《四部醫(yī)典》[2]。其味辛，性溫，具有抑赫依作用，主治失眠。由白豆蔻15 g、香旱芹10 g、蓽茇5 g組成。白豆蔻為主藥，味辛、苦，性溫，蒙文名為蘇格木勒，可祛腎寒、鎮(zhèn)赫依、溫中消食，主治腎赫依病、失眠、消化不良等[3]。香旱芹為輔藥，味辛、性平，具有清肺熱、提升胃火、消食的功效[3]。蓽茇為佐藥，有抑赫依、調理體素、化痰、止痛等功效，味辛，性溫、膩[3]。但蘇格木勒-3湯中治療失眠的主要有效成分目前尚不明確。5-羥色胺(5-HT)、神經遞質γ-氨基丁酸(GABA)、白細胞介素1-β(IL-1β)是常用的失眠指標。超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)是臨床常用的氧化損傷指標。2018年3月～2018年4月，我們通過建立對氯苯丙胺酸 (PCPA)大鼠失眠模型，觀察蘇格木勒-3湯水提物對失眠模型大鼠腦組織5-HT、GABA、IL-1β、SOD、MDA的影響，蘇格木勒-3湯水提物中具有鎮(zhèn)靜催眠效果的有效物質?，F(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 藥品、動物及儀器 白豆蔻、香旱芹與蓽茇購自內蒙古天立藥材公司，經內蒙古醫(yī)科大學蒙醫(yī)藥學院圖門巴雅爾教授鑒定為正品。SPF級SD大鼠102只，體質量180～220 g，雌雄各半，分籠飼養(yǎng)，購自北京市海淀區(qū)興隆實驗動物養(yǎng)殖廠，合格證號：11401300076603，許可證：SCXK(京)2014-0004。阿普唑侖片(江蘇恩華藥業(yè)股份有限公司，批號：H32020215，規(guī)格：0.4 mg/片)；0.9%生理鹽水(山東科倫藥業(yè)有限公司，批號：H37022918)；PCPA(美國Sigma公司，規(guī)格：25 g)；水合氯醛(國藥集團化學試劑有限公司，純度：≥99.5%，批號：20171211)。Rat5-HT試劑盒(上海藍基生物科技有限公司，批號：20180425)；Rat GABA試劑盒(上海藍基生物科技有限公司，批號：20180425)；IL-1β試劑盒(聯(lián)科生物技術股份有限公司，批號：2301b71122)；SOD測試盒(南京建成生物工程研究所，批號：A001-1)；MDA測試盒(南京建成生物工程研究所，批號：A003-1)。

DL-1型電爐(北京永光明醫(yī)療器械有限公司)；BS323S型電子天平(北京賽多利斯科技儀器有限公司)；FW135型中草藥粉粹機(天津華新儀器廠)；藥用篩(南京科達儀器廠)；全自動多功能酶標儀(MULTISKAN MK3，美國Thermo公司)；電熱恒溫培養(yǎng)箱(天津泰斯特；DH4000A)；MINI shaker(MH-1，kylin-Bell Lab Instruments QILINBEIER)；自動洗板機、離心機(美國Thermo公司)；電動勻漿器(FLUKO、F6/10model)。

1.2 蘇格木勒-3湯水提物的制備 分別稱取蘇格木勒-3湯(白豆蔻∶香旱芹∶蓽茇=3∶2∶1)50 g、白豆蔻∶香旱芹(3∶2)42 g、白豆蔻:蓽茇(3∶1)33 g、香旱芹∶蓽茇(2∶1)25 g、白豆蔻25 g、香旱芹17 g、蓽茇8 g加1 000 mL蒸餾水，煎煮30 min后，濾過，濾液蒸干，制作蘇格木勒-3湯水提物、白豆蔻-香旱芹水提物、白豆蔻-蓽茇水提物、香旱芹-蓽茇水提物、白豆蔻水提物、香旱芹水提物、蓽茇水提物，得率分別為18%、17%、20%、32%、11%、37%、29%。按得率計算最終給藥量。

1.3 大鼠分組與失眠模型制備 取102只大鼠，隨機分為空白組、模型組、陽性組、蘇格木勒-3湯水提物高及低劑量組、白豆蔻-香旱芹水提物高及低劑量組、白豆蔻-蓽茇水提物高及低劑量組、香旱芹-蓽茇水提物高及低劑量組、白豆蔻水提物高及低劑量組、香旱芹水提物高及低劑量組、蓽茇水提物高及低劑量組等17組，每組6只。除空白組外，剩下16組大鼠適應性喂養(yǎng)7 d，每天上午8:00～9:00腹腔射注300 mg/kg的PCPA混懸液(生理鹽水溶解，pH 7～8)，每天1次，連續(xù)注射2 d，制作大鼠失眠模型。2天后，與空白組比較，其他組大鼠出現(xiàn)晝夜節(jié)律紊亂，白天活動不停，毛發(fā)雜亂，興奮性增強，攻擊性增強，大便灰白等顯著的行為學改變，表明大鼠失眠模型成功[4]。

1.4 蘇格木勒-3湯水提物給藥方法 空白組、模型組大鼠每天生理鹽水灌胃，陽性組予阿普唑侖0.09 mg/kg灌胃，蘇格木勒-3湯水提物高及低劑量組分別予108、54 mg/kg的蘇格木勒-3湯水提物灌胃，白豆蔻-香旱芹水提物高及低劑量組分別予84、42 mg/kg的白豆蔻-香旱芹水提物灌胃，白豆蔻-蓽茇水提物高及低劑量組分別予82、41 mg/kg的白豆蔻-蓽茇灌胃，香旱芹-蓽茇水提物高及低劑量組分別予98、49 mg/kg的香旱芹-蓽茇水提物灌胃、白豆蔻水提物高及低劑量組分別予33、16.5 mg/kg的白豆蔻水提物灌胃、香旱芹水提物高及低劑量組分別予74、37 mg/kg的香旱芹水提物灌胃、蓽茇水提物高及低劑量組分別予29、14.5 mg/kg的蓽茇水提物灌胃，1次/d，連續(xù)灌胃7 d。

1.5 各組大鼠腦組織5-HT、GABA、IL-1β、SOD、MDA檢測 末次灌胃后，將各組大鼠斷頭處死，迅速取出大鼠大腦組織，生理鹽水沖洗后稱重，按組織重量，加入10%生理鹽水組織用電動勻漿器勻漿。4 ℃，3 500 rpm離心10 min后取上清液，于-20 ℃或-80 ℃低溫保存。采用ELISA法檢測各組大鼠腦組織5-HT、GABA、IL-1β、SOD、MDA，測定各組450 nm處光密度(OD值)，并代入標準曲線方程式，計算出各組大鼠腦內5-HT、GABA、IL-1β、SOD、MDA含量。

2 結果

各組大鼠腦組織5-HT、GABA、IL-1β含量比較見表1。

表1 各組大鼠腦組織5-HT、GABA、IL-1β含量比較

注：與空白組比較,△P<0.05；與模型組比較,*P<0.05。

各組大鼠腦組織SOD、MDA含量比較見表2。

3 討論

目前實驗研究中制作失眠模型的方法有電刺激法[5]、水平臺法、PCPA法。電刺激法最是通過電流刺激改變大鼠的睡眠-覺醒節(jié)律。水平臺法主要阻斷大鼠REM睡眠[6]，剝奪大鼠的深睡眠。前兩種方法由于成本高，耗時較長，模型質量不穩(wěn)定，對實驗結果影響較大。有研究[7]報道，腹腔注射PCPA建立失眠模型的動物，在給藥后第3～6天動物失眠狀態(tài)最明顯，第7天開始失眠狀態(tài)慢慢恢復，到第9天失眠狀態(tài)基本消失，但此時腦內5-HT等相關的神經遞質仍處于低水平。這是因為PCPA對TPH的抑制作用是不可逆的，需要待體內PCPA完全消失，并且有新的色氨酸羥化酶分子合成，5-HT才能緩慢恢復[8]。本實驗中用連續(xù)2天為動物腹腔注射PCPA的方法建立失眠模型，于第1次腹腔注射PCPA后36 h，動物出現(xiàn)晝夜節(jié)律紊亂，興奮性增強，睡眠消失等癥狀。本次實驗結果顯示，與正常組比較，模型組大鼠腦內5-HT、GABA含量均減少，與多數(shù)注射PCPA建立睡眠剝奪模型動物神經遞質變化的文獻[9,10]報道一致，表明造模成功。

表2 蘇格木勒-3湯水提物各組對大鼠腦內SOD、MDA的影響

注：與空白組比較，△P<0.05；與模型組比較，*P<0.05。

近年來研究[11]發(fā)現(xiàn)，神經遞質5-HT、GABA、IL-1β在睡眠-覺醒節(jié)律過程中等起到重要作用；朱國慶等[12]發(fā)現(xiàn)選擇性阻斷腦內5-HT的合成，可致大鼠失眠；Sherin等[13]發(fā)現(xiàn)增加腦內GABA含量，可提高慢波睡眠質量；宋媛等[14]發(fā)現(xiàn)增加腦內IL-1β的含量，能治療失眠。因而本研究考察了這三個指標，結果顯示：蘇格木勒-3湯水提物中白豆蔻、香旱芹、蓽茇等水提物均可增加失眠模型大鼠腦內5-HT與GABA含量，說明蘇格木勒-3湯水提物中鎮(zhèn)靜催眠作用的有效物質基礎來源于各單味藥。據趙翠仙等[15]等報道蓽茇乙醇提取物有明顯的抗戊四唑的驚厥作用。蓽茇中的胡椒堿可明顯減少大鼠得自主活動，具有一定的鎮(zhèn)靜作用。還可明顯延長戊巴比妥鈉誘發(fā)小鼠的睡眠時間。白豆蔻及香旱芹的鎮(zhèn)靜催眠作用還需繼續(xù)深入研究。本研究結果顯示，雖然蘇格木勒-3湯水提物及各單味藥有降低趨勢但是作用并不明顯，陽性對照藥物阿普唑侖也沒有起到作用。另一方面，蘇格木勒-3湯水提物中白豆蔻、香旱芹、蓽茇等水提物均可增加失眠模型大鼠腦內SOD含量，降低MDA含量，可不同程度顯示出一定的抗氧化能力。這與馮雪等[17，18]研究發(fā)現(xiàn)白豆蔻精油和香旱芹黃酮具有良好的抗氧化效果的報道一致。

綜上所述，蘇格木勒-3湯水提物中鎮(zhèn)靜催眠作用的有效物質來源于白豆蔻、香旱芹、蓽茇等單味藥；白豆蔻、香旱芹、蓽茇可通過降低腦組織MDA、升高SOD含量發(fā)揮震驚催眠作用。