朱晟易 徐永強(qiáng)

[摘要] 目的 研究結(jié)直腸癌MICA基因的表達(dá)與p53、K-ras基因突變之間的聯(lián)系。 方法 選取我院從2015年8月～2017年8月132例結(jié)直腸癌患者為此次研究對(duì)象行回顧性分析，應(yīng)用半定量PCR-SSCP技術(shù)，進(jìn)行mRNA水平的檢測，對(duì)結(jié)直腸癌組織MICA基因表達(dá)量與p53、K-ras進(jìn)行檢測，并分析結(jié)直腸癌MICA基因表達(dá)與p53、K-ras基因突變之間的相互關(guān)聯(lián)。 結(jié)果 在K-ras基因突變組中的MICA平均表達(dá)量顯著高于K-ras基因未突變組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；在p53基因突變組中的MICA平均表達(dá)量顯著高于p53基因未突變組， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。 結(jié)論 高表達(dá)的MICA基因的發(fā)生可能與p53、K-ras基因突變關(guān)系密切，MICA基因的表達(dá)情況是目前檢測結(jié)直腸癌的關(guān)鍵，應(yīng)引起人們的廣泛關(guān)注。

[關(guān)鍵詞] 結(jié)直腸癌；MICA基因；p53基因；K-ras基因

[中圖分類號(hào)] R735.34 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-9701（2018）30-0006-04

[Abstract] Objective To study the relationship between the expression of MICA gene in colorectal cancer and the mutations of p53 and K-ras genes. Methods 132 patients with colorectal cancer from August 2015 to August 2017 in our hospital were selected as the study subjects， and they were retrospectively analyzed. Semi-quantitative PCR-SSCP technique was used for the detection at the mRNA level. The expression quantity of MICA gene in colorectal cancer tissues and p53 and K-ras were detected. The correlation between MICA gene expression in colorectal cancer and mutations in p53 and K-ras genes was analyzed. Results The average expression quantity of MICA in K-ras gene mutants group was significantly higher than that in K-ras gene non-mutants group， and the difference was statistically significant（P<0.05）； the average expression quantity of MICA in p53 gene mutants group was significantly higher than that in p53 gene non-mutants group， and the difference was statistically significant（P<0.05）. Conclusion The occurrence of highly expressed MICA gene may be closely related to the mutation of p53 and K-ras genes. The expression of MICA gene is the key to the current detection of colorectal cancer and should be widely concerned.

[Key words] Colorectal cancer； MICA gene； p53 gene； K-ras gene

]結(jié)直腸癌是一種常見的惡性腫瘤，位于消化道內(nèi)，發(fā)病率較高，直腸與乙狀結(jié)腸相交聯(lián)的地方是臨床上該疾病發(fā)病最常見的位置，占總比重的3/5。且患病與年齡、性別有一定的關(guān)系，年齡長者患此病的風(fēng)險(xiǎn)更大，其中，男性患此病的概率大約為女性的兩倍[1]。世界衛(wèi)生組織（WHO）國際癌癥科研中心數(shù)據(jù)顯示，全球惡性腫瘤的發(fā)病率排名中，肺癌的發(fā)病率位居第一位，乳腺癌的發(fā)病率位居第二位，結(jié)直腸癌發(fā)病率位居第三位，結(jié)直腸癌在全球惡性腫瘤死亡率位于第四位[2]。本次研究取材于2015年8月～2017年8月來我院治療的結(jié)直腸癌患者132例為研究對(duì)象，研究結(jié)直腸癌MICA基因的表達(dá)與p53、K-ras基因突變之間的聯(lián)系，給結(jié)直腸癌在臨床上的診療與治療提供相應(yīng)的理論依據(jù)。

1資料與方法

1.1一般資料

選取自2015年8月～2017年8月我院132例結(jié)直腸癌患者為此次研究對(duì)象，其中，男72例，平均年齡（42.5±12.6）歲；女60例，平均年齡（42.7±13.5）歲。對(duì)26例患者進(jìn)行姑息性切除術(shù)，對(duì)另外的106例患者進(jìn)行結(jié)直腸癌根治術(shù)。納入標(biāo)準(zhǔn)：患者知情同意本研究；病歷資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并免疫系統(tǒng)疾病；合并嚴(yán)重肝腎功能障礙[3]。

根治性手術(shù)：是一種對(duì)于結(jié)直腸癌疾病能起到高效治療的手術(shù)方法，同時(shí)也能防止肝轉(zhuǎn)移現(xiàn)象的發(fā)生。手術(shù)涉及到腫瘤病發(fā)地及其周圍的組織或者器官，執(zhí)行手術(shù)的方案因腫瘤部位的不同而不同，常執(zhí)行的原則為完整結(jié)腸系膜切除（CME）[4]。

結(jié)腸癌根據(jù)其發(fā)病情況，可分為4期：Duke A期（44例），Duke B期（46例），Duke C期（20例），Duke D期（22例）。

1.2方法

1.2.1 建立檔案 記錄患者的年齡、性別、聯(lián)系方式、家庭情況等，同時(shí)記錄患者的疾病類型、疾病病程、既往發(fā)病等相關(guān)情況?；颊呙看尉驮\后要將其病情如實(shí)記錄，保留患者完整的病例記錄?；颊呔橥獗狙芯浚瑫r(shí)經(jīng)過我院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，將132例分為K-ras基因突變組62例及K-ras基因未突變組70例，同時(shí)將132例分為p53基因突變組80例及p53基因未突變組52例。

1.2.2 提取結(jié)直腸癌基因組的DNA 取出組織研磨，消化，超速離心，DNA沉于試管底部，棄上清液，加入800 mL氯仿進(jìn)行抽提，最后放置于無水乙醇（提前預(yù)冷）中，靜置等沉淀析出，將TE溶解，留存便于進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。PCR反應(yīng)程序：總體系達(dá)20 μL，于94℃變性（75 s），54℃退火（60 s），72℃延伸（60 s），循環(huán)30次。電泳及銀染：取出5 μL PCR產(chǎn)物，加入5 μL緩沖液混合，在98℃變性處理300 s，冷浴150 s，加入聚丙烯酰胺（8%），進(jìn)行電泳并進(jìn)行銀染鑒定[5]。

1.2.3 分子生物學(xué)水平實(shí)驗(yàn)-免疫組化 （1）標(biāo)本：EDTA抗凝全血20 mL；（2）DNA抽提：運(yùn)用Peacl-Treeze說明書中的方法；（3）測序：PCR擴(kuò)增：擴(kuò)增1號(hào)外顯子-8號(hào)外顯子，37℃ 35 min，80℃ 10 min，其中，1號(hào)外顯子-4號(hào)外顯子和5號(hào)外顯子-8號(hào)外顯子分別進(jìn)行擴(kuò)增。PCR擴(kuò)增體系：DNA酶Ⅰ2 μL，PCR產(chǎn)物8 μL，熱穩(wěn)定性酶8 μL，改程序：95℃ 1 min，45℃ 35 s，59℃3 min，循環(huán)40次，冷卻到18℃[6]；（4）Gene Scan檢測 擴(kuò)增反應(yīng)總體系40 μL。檢測程序：按比例20%稀釋產(chǎn)物，40 μL體系中，已知19.2 μL，未知品0.8 μL，95℃變性（5 min），掃描，分析結(jié)果?；驋呙璺治龊徒Y(jié)果判斷：運(yùn)用程序AongTapcher測出結(jié)果[7]。

1.3 觀察指標(biāo)

觀察直腸癌MICA基因的表達(dá)與p53、K-ras基因突變之間的聯(lián)系[8]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS18.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，其中計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料以（x±s）表示，采用t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 K-ras基因與MICA表達(dá)量的分析

K-ras基因突變組中MICA平均表達(dá)量高于K-ras基因未突變組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）（表1）。

2.2 p53基因與MICA表達(dá)量的分析

p53基因突變組中MICA平均表達(dá)量高于p53基因未突變組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）（表2）。

3討論

結(jié)直腸癌是一種常見的惡性腫瘤，有研究報(bào)道，結(jié)直腸腫瘤中MICA表達(dá)情況所占的總比重顯著高于正常結(jié)直腸組織中的[9]。隨著科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，現(xiàn)在有關(guān)結(jié)直腸癌的發(fā)病原理和結(jié)直腸癌發(fā)病的機(jī)制有較多研究。且越來越多研究在分子生物學(xué)水平進(jìn)行的結(jié)果顯示，就相對(duì)于結(jié)直腸腫瘤細(xì)胞來看，其靶點(diǎn)作用于化療應(yīng)答反應(yīng)靈敏性的細(xì)胞和組織[10]。結(jié)直腸癌發(fā)病部位位于消化道內(nèi)，且發(fā)病率較高，直腸與乙狀結(jié)腸相交聯(lián)處是臨床上最常見的該疾病的發(fā)病部位，其概率占總比重的3/5[11]。且患該病與年齡、性別存在一定的關(guān)系，年齡長者患此病的風(fēng)險(xiǎn)更大，其中，男性患此病的概率大約為女性的2倍[12]。結(jié)直腸癌患者在飲食方面需要注意，不能吃刺激性的東西，忌生冷的食物和辛辣的食物。平時(shí)可以按期去醫(yī)院做相關(guān)的檢查，消除潛在的隱患，早發(fā)現(xiàn)早治療。如果患者沒有空閑的時(shí)間去醫(yī)院，在家里運(yùn)用試紙也能進(jìn)行檢查。在運(yùn)動(dòng)方面要合理運(yùn)動(dòng)，最好在醫(yī)生的指導(dǎo)下制定屬于自己的運(yùn)動(dòng)計(jì)劃，禁止長時(shí)間坐著不動(dòng)。適當(dāng)?shù)膴蕵沸曰顒?dòng)也是必要的，養(yǎng)成良好的作息習(xí)慣，不可熬夜、長時(shí)間看電視、打麻將等不利于身體健康的行為。結(jié)直腸癌研究至今，具體的致病因素、發(fā)生、發(fā)展仍尚不明確[13]。但已有研究報(bào)道了可能的因素，患者可能是平時(shí)飲食多食用高脂、高糖、高蛋白等類的食品導(dǎo)致疾病的發(fā)生；或是存在遺傳方面的原因，這方面有早期研究發(fā)現(xiàn)，在直腸癌患者的家族群系中，有25%左右的疾病是伴隨著家族史出現(xiàn)的、有規(guī)律的發(fā)病情況，其中，有一半的患者為男性結(jié)直腸癌患者[14]。

人體中存在原癌基因和抑癌基因，若正常人的細(xì)胞其基因發(fā)生了突變，患癌病人的免疫力就會(huì)降低，在此基礎(chǔ)上，若再受到某種不利因素的刺激，則會(huì)使組織細(xì)胞快速生長，最終演變?yōu)榘┌Y[15]。具有遺傳性質(zhì)的基因改變，常常表現(xiàn)出癌腫的家族性[16]。此外，此疾病的發(fā)生與發(fā)展，還與外界因素，如適應(yīng)環(huán)境的敏感能力、氣候因素、溫度因素等有著十分密切的關(guān)系[17]。ras屬于原癌基因，p53屬于抑癌基因，結(jié)直腸癌發(fā)生形成的過程，也就是原癌基因和抑癌基因的突變所致，是普通基因突變的現(xiàn)象[18]。前期研究中發(fā)現(xiàn)，p53基因突變?cè)诮Y(jié)直腸癌的病發(fā)中大約所占比重為75%，且多為第7外顯子和第8外顯子的突變；K-ras基因的第12位點(diǎn)上大都發(fā)生ras基因的突變，且有50%的高突變率[19]。WT1基因也是一種抑癌基因，它可以調(diào)控MICA基因的表達(dá)，p53基因可以通過影響WT1基因從而對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生耐藥性，MICA基因產(chǎn)物P-gp蛋白包括誘導(dǎo)耐藥的主要成分。肝臟是人體主要的器官之一，在結(jié)直腸癌疾病中作為一種重要的靶器官，很大比重的結(jié)直腸癌患者的發(fā)病伴隨著肝轉(zhuǎn)移（colorectal cancer liver metastases），所以這是治療此疾病所面臨的重點(diǎn)和難點(diǎn)。結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移是結(jié)直腸癌患者主要的致死原因[20]。

本次研究取材于2015年8月～2017年8月來我院治療的結(jié)直腸癌患者132例為研究對(duì)象，研究結(jié)直腸癌MICA基因的表達(dá)與p53、K-ras基因突變之間的聯(lián)系。其中，在K-ras基因突變者中MICA平均表達(dá)量顯著高于K-ras基因未突變者，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；在p53基因突變者中MICA平均表達(dá)量顯著高于p53基因未突變者，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。高表達(dá)的MICA基因的發(fā)生可能與p53、K-ras基因突變關(guān)系密切，MICA基因的表達(dá)情況是目前檢測結(jié)直腸癌的關(guān)鍵，應(yīng)引起人們的廣泛關(guān)注。

綜上所述，高表達(dá)的MICA基因的發(fā)生可能與p53、K-ras基因突變關(guān)系密切，MICA基因的表達(dá)情況是目前檢測結(jié)直腸癌的關(guān)鍵，應(yīng)引起人們的廣泛關(guān)注。

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（收稿日期：2018-06-05）