高秀蘭，周紹真，謝天琪，蘇胖胖

(浙江省寧?？h婦幼保健院檢驗(yàn)科 315600)

呼吸道感染(RTI)在發(fā)達(dá)和發(fā)展中國(guó)家是一類嚴(yán)重危害人類健康的公共衛(wèi)生問題，每年造成5歲以下兒童近19%的病死率以及8.2%的殘疾率[1]。RTI主要是由呼吸道病毒引起，在患兒中常能檢測(cè)到的呼吸道病毒有5類，分別是甲型流感病毒(IVA)、乙型流感病毒(IVB)、副流感病毒(PIV)、呼吸道合胞病毒(RSV)及腺病毒(ADV)[2-3]。不同年齡段兒童對(duì)病毒的免疫耐受能力是不同的，病毒入侵兒童后產(chǎn)生免疫應(yīng)答反應(yīng)也是不同的，最終會(huì)造成不同的感染結(jié)局。特異性IgM檢測(cè)常用于呼吸道病毒檢查，IgM是初次體液免疫應(yīng)答中最早出現(xiàn)的抗體，通常在發(fā)病后1周內(nèi)就可以在患兒血清中檢測(cè)到，而且在血清中持續(xù)時(shí)間不長(zhǎng)，可用于感染的早期診斷。本研究旨在通過統(tǒng)計(jì)2017年本院收治RTI患兒的病毒感染情況，分析不同病毒對(duì)不同年齡段兒童的感染情況，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集2017年1月1日至12月31日因RTI在本院兒科住院及門診患兒共1 287例，年齡0～14歲，近期無RTI病史。

1.2儀器與試劑 Leica DM 2500熒光顯微鏡、歐蒙呼吸道病原體抗體IgM檢測(cè)試劑盒、eppendorf加樣槍、燒杯等。

1.3方法 吸附劑1∶10稀釋血清，加樣板每反應(yīng)區(qū)加30 μL稀釋后血清，室溫溫育30 min，磷酸鹽緩沖液(PBS)吐溫緩沖液沖洗，浸泡5 min，每個(gè)反應(yīng)區(qū)加25 μL FITC標(biāo)記的抗人免疫球蛋白，避光溫育30 min，沖洗后滴加甘油至蓋破片，封片讀片，讀片過程嚴(yán)格遵守操作規(guī)程。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料以率表示，采用χ2檢驗(yàn),以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.15類呼吸道病毒特異性IgM檢測(cè)結(jié)果 1 287例5類呼吸道病毒特異性IgM陽(yáng)性標(biāo)本檢出率分別為IVA(25.17%)、IVB(50.58%)、PIV(3.42%)、RSV(2.87%)和ADV(2.10%)。其中IVB檢出率最高。

2.25類呼吸道病毒特異性IgM在不同年齡段患兒中的檢出情況 5類呼吸道病毒感染情況分別在新生兒期(0～28 d)、嬰兒期(1～12個(gè)月)、幼兒期(1～3歲)、學(xué)齡前期(3～6歲)，以及學(xué)齡期兒童(6～14歲)中進(jìn)行比較。IVA在新生兒期不感染，隨著年齡增長(zhǎng)陽(yáng)性檢出率逐漸增高(χ2=145.24，P<0.05)，在學(xué)齡期兒童檢出率最高。IVB在新生兒期不感染，隨著年齡增長(zhǎng)陽(yáng)性檢出率逐漸增高(χ2=357.97,P<0.05)，在學(xué)齡期兒童檢出率最高。PIV在新生兒期不感染，隨著年齡增長(zhǎng)均有陽(yáng)性檢出，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=3.01,P>0.05)。RSV在新生兒期不感染，嬰兒期陽(yáng)性檢出率最高，隨著年齡增長(zhǎng)陽(yáng)性檢出率下降(χ2=102.83,P<0.05)，學(xué)齡期未檢出陽(yáng)性病例。ADV在新生兒期不感染，隨著年齡增長(zhǎng)均有陽(yáng)性標(biāo)本檢出，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=9.25,P>0.05)，見表1、圖1。

表1 5類呼吸道病毒特異性IgM在不同年齡段患兒中的檢出情況[n(%)]

注：1、2、3、4和5分別表示新生兒期、嬰兒期、幼兒期、學(xué)齡前期和學(xué)齡期兒童

圖1 5類呼吸道病毒特異性IgM在不同年齡段患兒中的檢出情況

3 討 論

本研究中，兒童5類呼吸道病毒特異性IgM陽(yáng)性標(biāo)本檢出率分別為IVA(25.17%)、IVB(50.58%)、PIV(3.42%)、RSV(2.87%)和ADV(2.10%)。其中IVB在所有檢出病毒中占60%，這一數(shù)值反映了2017年本院兒童病毒感染的流行趨勢(shì)是以IVB為主。在不同地區(qū)，各個(gè)病毒的流行趨勢(shì)是不同的。2010-2016年在江蘇無錫主要以RSV感染為主[4]。深圳市兒童醫(yī)院在2012-2015年對(duì)深圳市地區(qū)30 443例RTI的兒童進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，在該地區(qū)以RSV感染為主，檢出率為68.11%[5]。山東濱州地區(qū)2012年統(tǒng)計(jì)分析兒童呼吸道病毒感染是以IVB為主,檢出率為8.45%[6]。青海西寧地區(qū)2012年是以ADV流行為主[7]。北京地區(qū)2006-2014年連續(xù)監(jiān)測(cè)，數(shù)據(jù)表明是以IVA和IVB交替流行[8]。這與各地區(qū)氣候不同相關(guān)，南北地區(qū)氣候差異較大，可能導(dǎo)致了不同的病毒流行，而且病毒流行與人口流動(dòng)相關(guān)性較大。西寧地處中國(guó)西北，人口流動(dòng)相對(duì)較少，病毒檢出率就遠(yuǎn)低于全國(guó)水平[7]。寧?？h地處浙東沿海地區(qū)，人口流動(dòng)相對(duì)較大，2017年IVB的檢出率為50.58%，反映出當(dāng)?shù)貎和疘VB流行嚴(yán)重，且IVB在學(xué)齡期兒童(6～14歲)中流行最為嚴(yán)重，檢出率為68.75%。

新生兒期均未檢測(cè)到陽(yáng)性標(biāo)本，這與選擇的檢測(cè)方法學(xué)相關(guān)。本研究選擇的是間接免疫熒光法，檢測(cè)的是早期特異性IgM抗體，該方法本質(zhì)上是抗原抗體的結(jié)合，而新生兒免疫功能尚未完善，接觸病毒后可能未能產(chǎn)生有效的IgM抗體，導(dǎo)致最后無法檢測(cè)出陽(yáng)性標(biāo)本。其他相關(guān)實(shí)驗(yàn)室選用本方法去做病毒檢測(cè)，在新生兒期也均未有檢出陽(yáng)性標(biāo)本現(xiàn)象[6]。選擇本研究方法是出于綜合考慮，使用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-PCR)法儀器設(shè)備和經(jīng)濟(jì)要求高，不利于在基層醫(yī)院開展檢測(cè)，而相對(duì)于其他快速檢測(cè)方法，本方法的特異性、敏感性更好[9]。

不同年齡段兒童對(duì)于不同病毒的免疫耐受能力是不同的，同種病毒對(duì)于不同年齡段兒童的感染情況亦是不同的，本研究發(fā)現(xiàn)RSV在嬰兒期陽(yáng)性檢出率最高，為15.93%，而隨年齡增長(zhǎng)逐漸降低。這種現(xiàn)象普遍存在，在東莞地區(qū)使用RT-PCR法，單獨(dú)檢測(cè)RSV在兒童中的流行情況，也同樣發(fā)現(xiàn)2歲以下兒童的陽(yáng)性檢出率遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于2歲以上兒童，且2歲以下兒童感染RSV以發(fā)熱、喘息癥狀為主，2歲以上兒童感染RSV以咳嗽癥狀為主[10]。這說明不同年齡段兒童對(duì)于RSV免疫耐受能力不同的。IVA和IVB隨著兒童年齡增長(zhǎng)陽(yáng)性檢出率逐漸增高，在學(xué)齡期陽(yáng)性檢出率最高，分別為36.25%和68.75%，此統(tǒng)計(jì)結(jié)果與王加芬等[6]研究結(jié)果相似，這可能與流感病毒流行特點(diǎn)相關(guān)，流感病毒在人群密集地區(qū)的流行相對(duì)較強(qiáng)，學(xué)齡兒童免疫功能尚未完善而又群聚在一起，如不注意個(gè)人衛(wèi)生與空氣流通，極易造成大面積流行。PIV和ADV隨著年齡增長(zhǎng)陽(yáng)性檢出率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。這些數(shù)據(jù)表明了不同年齡段的兒童接觸到病毒后，會(huì)有不同的感染結(jié)局。這種現(xiàn)象在自然界中普遍存在，例如，將等量的伯氏瘧原蟲分別接種于幼齡SD大鼠與4周齡SD大鼠，感染瘧原蟲的幼齡大鼠全部死亡而4周齡大鼠全部存活[11]。造成這種感染結(jié)局差異的原因有很多，最主要的原因應(yīng)該是不同年齡段宿主的免疫功能不同，現(xiàn)代一些學(xué)者認(rèn)為進(jìn)入宿主的瘧原蟲激活了CD4+T細(xì)胞，從而產(chǎn)生Th1和Th2免疫應(yīng)答，消滅入侵物質(zhì)[12]。同樣的，入侵兒童的病毒也會(huì)激活CD4+T細(xì)胞，活化的CD4+T細(xì)胞也可能介導(dǎo)Th1和Th2免疫應(yīng)答，從而清除寄生于宿主體內(nèi)的病毒。一些研究人員認(rèn)為人體應(yīng)對(duì)IVA主要是Th2型免疫應(yīng)答在起作用[13]。其他一些學(xué)者認(rèn)為兒童在應(yīng)對(duì)病毒感染時(shí)，急性期也是Th2免疫應(yīng)答在起作用[14]。用IVA和RSV感染BALB/c小鼠做動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)不同階段的宿主會(huì)有不同的免疫應(yīng)答，急性期是以Th2免疫應(yīng)答為主，感染后期卻轉(zhuǎn)變?yōu)門h1為主[15]。這些研究結(jié)果也可能提示兒童感染病毒后，急性期應(yīng)該以Th2應(yīng)答為主，感染后期轉(zhuǎn)變成Th1應(yīng)答，但不同年齡段的兒童免疫功能發(fā)育完善程度不同，應(yīng)對(duì)病毒感染時(shí)，會(huì)產(chǎn)生不同的免疫應(yīng)答能力，表現(xiàn)出不同的臨床癥狀。通過實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)，結(jié)合不同年齡段兒童的臨床表現(xiàn)，更有利于對(duì)疾病的診斷與治療。

綜上所述，2017年本院IVB特異性IgM陽(yáng)性檢出最高，新生兒因免疫功能未完善未檢出陽(yáng)性標(biāo)本，不同年齡段的兒童感染病毒后會(huì)產(chǎn)生不同的免疫應(yīng)答，最終會(huì)導(dǎo)致不同的感染結(jié)局，對(duì)不同年齡段兒童感染情況的研究有利于臨床早期診斷，以及后期更精準(zhǔn)的治療。